食管鳞癌中CDK4表达及意义的研究

目的　研究CDK4在食管鳞癌中的表达、发生过程中的影响以及在其增殖、侵袭、转移中的作用。方法　运用免疫组织化学方法 (SABC法 )研究CDK4蛋白表达情况 ,显微镜下计数阳性细胞指数 (LI) ,并进行统计分析。结果　 1)CDK4表达情况 :正常食管黏膜组织阳性率与食管鳞癌组织比较差异有显著性 ,后者高于前者 ( χ2 =5 .42 99,P =0 .0 2 0 ) ,LI后者高于前者 (t =2 .42 3 ,P =0 .0 19) ,1例正常食管黏膜阳性者为弱阳性 (LI <2 5 %)。 2 )CDK4在食管鳞癌组织中的表达与年龄、性别无明显关系 (P >0 .0 5 ) ,不同分化级别中两者表达亦无差异 (P >0 .0 5 )。有淋巴结转移组CKD4水平分别高于无淋巴结转移组 ,差异有显著性 (P =0 .0 0 1)。食管外膜浸润组CDK4显著高于未受浸润组 ,(P =0 .0 0 0 ) ,临床分期Ⅰ～Ⅱ与Ⅲ～Ⅳ期CDK4表达水平差异有显著性 ,(P =0 .0 0 0 )。结论　CDK4在食管鳞癌中高表达 ,促进了细胞生长和肿瘤发展 (G1 →S过渡 ) ,反应了肿瘤的生物学特性 ,促进侵袭转移 ,是食管癌发生发展中的重要事件。     

MIM在食管鳞癌组织中的表达

目的：探讨肿瘤转移消失蛋白（ MIM）在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法检测65例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织及65例正常食管黏膜组织中MIM表达。结果 MIM在食管鳞癌组织中的阳性表达率为75.4%、癌旁不典型增生组织中的阳性表达率为43.3%、正常食管黏膜组织中的阳性表达率为13.8%,三者两两相比差异均有有统计学意义（P〈0.05）。MIM在食管鳞癌组织中的表达与浸润程度、淋巴结转移有关（ P〈0.05）。结论食管鳞癌组织中MIM的异常表达可能是导致食管鳞癌发生、发展的原因之一。     

食管鳞癌c-myc、PCNA表达的相关性研究

 应用免疫组织化学LSAB方法，检测c－myc蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）在食管癌及癌旁中的表达。发现食管癌中PCNA、c－myc均有不同程度的表达。癌旁上皮PCNA几乎均为阳性而c－myc仅两例重度非典型增生上皮有少数细胞弱阳性。有淋巴结转移的食管癌组PCNA阳性率和c－myc蛋白表达均显著高于无转移组。c－myc蛋白和PCNA表达之间存在较好正变关系。c－myc基因激活和PCNA在食管癌变及癌转移中协同作用。     

S100A4蛋白在食管鳞癌组织中的表达

目的 探讨S100A4蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系.方法应用免疫组化二步法检测S100A4蛋白在食管鳞癌及癌旁正常食管组织中的表达情况.结果S100A4蛋白在食管鳞癌及癌旁正常食管组织中的阳性表达率分别为57.30%、15.00%,前者明显高于后者,差异有统计学意义(P=0.001).S100A4...     

热休克蛋白在食管鳞癌中的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白（HSPs）HSP27、HSP60、HSPT0和HSP90d在食管鳞癌及其切缘正常食管黏膜中的表达及其意义。方法168例食管鳞癌和42例切缘正常食管黏膜制成组织芯片,应用免疫组化EnVision法及Westernbolt检测HSP27、HSP60、HSP70和HSP90α在组织中的表达情况,分析4种HSPs的表达与肿瘤位置、肿瘤长度、浸润深度、分化程度和淋巴结转移的关系。结果食管鳞癌和切缘正常食管黏膜中,HSP27的阳性率分别为62．0％和42．1％;HSP60的阳性率分别为92．7％和63．2％;HSP70的阳性率分别为57．9％和22．2％;HSP90α的阳性率分别为33．7％和18．5％。统计学分析结果表明,HSP60和HSP70在食管鳞癌的表达均高于切缘正常食管黏膜（P〈0．01）,HSP27和HSP90α在食管鳞癌与切缘正常黏膜的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。除HSP27的表达随着食管鳞癌分化程度的降低而降低（P〈0．05）外,其他3种HSPs的表达与食管鳞癌的临床病理特征无关（P〉0．05）。结论HSP27、HSP60、HSPT0和HSP90α在食管鳞癌和切缘正常食管黏膜中均有表达。HSP60和HSP70在食管鳞癌的表达高于切缘正常食管黏膜,可能与食管鳞癌的生物学行为有关;HSP27的表达随食管鳞癌分化程度的降低而降低,HSP27的高表达可能影响鳞癌的分化程度。     

SALL4高表达在食管鳞癌临床病理及预后判定中的意义

目的 分析食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中SALL4的表达与临床病理及生存预后的关系,探讨SALL4在食管鳞癌诊断和治疗中的作用。方法 收集2010年7月—2011年11月哈尔滨医科大学附属肿瘤医院90例食管鳞癌患者的癌组织及相应的癌旁组织,采用免疫组织化学的方法检测SALL4的表达情况,比较癌组织与癌旁组织间SALL4的表达差异,并分析其与食管鳞癌患者临床特征、总生存(Overall survival,OS)及无进展生存(Progression free survival,PFS)的关系。结果 食管鳞癌组织中SALL4的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),SALL4高表达与术中肿瘤部位(P=0.038)、G分级(P=0.036)和AJCC分期(P=0.015)密切关联。生存分析及Cox风险回归分析表明,SALL4高表达组的食管鳞癌患者OS和PFS均低于SALL4低表达组(P＜0.05)。结论 SALL4高表达可以作为食管鳞癌一个独立的预后判定因子,在临床工作中,可以帮助判断食管鳞癌患者的生存预后。     

HSP70和P27在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)和P27在食管鳞状细胞癌中表达的相关性。方法采用SP免疫组化染色法检测65例食管鳞癌组织、30例正常食管组织及30例癌旁组织中的HSP70和P27。结果正常食管上皮、癌旁组织、食管鳞癌中HSP70的阳性表达率分别是16.67%(5/30)、46.67%(14/30)、86.15%(56/65),正常食管上皮、癌旁组织及食管鳞癌中P27的表达率分别是96.67%(29/30)、53.33%(16/30)、41.54%(27/65)。在食管鳞癌中,HSP70和P27的表达呈负相关(rs=-0.541,P=0.000)。结论在食管癌中,P27可能随着HSP70表达的上调而下降,其表达率与多个临床病理指标相关。     

长链非编码RNA SPRY4-IT1在食管鳞癌中的表达及对细胞生长的影响

  目的  探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1与食管鳞状细胞癌（ESCC）的临床病理及预后的相关性,以及对细胞生长的影响。   方法  收集2008年1月至2009年12月南京医科大学附属南京医院肿瘤外科50例ESCC手术切除标本（包括癌组织和癌旁组织）,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测50例ESCC中SPRY4-IT1的表达情况,分析其与临床病理及预后的关系,用小干扰RNA（siRNA）干扰SPRY4-IT1后MTT法检测其对细胞生长的影响,流式细胞检测对细胞凋亡和周期的影响。  结果  45例（90%）标本中SPRY4-IT1呈阳性表达,SPRY4-IT1在癌组织中的表达量显著高于癌旁组织（t=5.377,P < 0.01）。SPRY4-IT1的相对表达水平与肿瘤大小、临床分期相关（P均 < 0.05）。SPRY4-IT1在ESCC细胞株中表达量高于正常食管上皮细胞。KYSE30细胞中干扰SPRY4-IT1的表达后可明显减慢细胞生长,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡（P < 0.01）。  结论   SPRY4-IT1在ESCC组织中显著高表达,并且能促进ESCC细胞生长,可能成为ESCC诊断和判断预后的重要分子标记物。      

两种食管鳞癌细胞系增殖和侵袭能力的比较研究

目的：研究两种来源不同的食管鳞癌细胞系EC109和KYSE510分裂增殖能力和侵袭能力的差异。方法：利用MTT实验和侵袭实验,在体外分别检测EC109和KYSE510细胞的分裂增殖能力和侵袭能力;采用裸鼠皮下接种实验和爪垫皮下接种淋巴结转移模型,比较两种细胞在体内的成瘤能力、局部侵袭能力和区域淋巴结转移能力的差异;免疫印迹检测上皮-间充质细胞转换标志蛋白E-cadherin、γ-cadherin和Vimentin在两种细胞中的表达水平。结果：体外实验表明,EC109细胞的分裂增殖和侵袭能力均明显较KYSE510细胞的强（P〈0.05）;皮下接种和爪垫皮下接种淋巴结转移实验显示EC109细胞的成瘤能力、局部侵袭能力和淋巴结转移能力均较KYSE510细胞的高;免疫印迹检测发现,E-cadherin和γ-cadherin在EC109细胞中的表达水平较KYSE510细胞中的表达低,而Vimentin在EC109细胞中的表达则较KYSE510细胞中的表达高,提示EC109细胞发生上皮-间充质细胞转换的程度较KYSE510的高。结论：EC109细胞的增殖和侵袭能力均较KYSE510细胞的强,上皮-间充质细胞转换可能是导致这种差异的原因之一。     

FOXC2蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与预后的相关性

目的：叉头框 C2（FOXC2）在多种肿瘤中表达,并与肿瘤的转移和增殖关系密切,但其在食管鳞癌中的表达以及作用未见报道,本研究旨在探讨 FOXC2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及与预后的相关性。方法：应用实时定量 PCR 法以及 Western blot 法检测 FOXC2在129例食管鳞癌组织中的表达情况,并且分析其表达水平与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度、T 分期、淋巴结转移等临床病理之间的关系,研究FOXC2对患者预后的影响。结果：PCR 证实在 mRNA 水平 FOXC2在食管鳞癌组织中表达水平均高于其对应的癌旁组织（P ＝0．005）。免疫组化结果表明 FOXC2在食管鳞癌中的阳性率为60．47％,与患者的肿瘤大小（P ＜0．001）、T 分期（P ＝0．008）、淋巴管转移（P ＝0．005）关系密切,而与患者的年龄、肿瘤位置等没有统计学意义;FOXC2阳性表达的患者5年生存率显著低于 FOXC2阴性表达的患者（P ＝0．009）;同时,多因素分析显示 FOXC2是食管癌患者预后的独立因素。结论：FOXC2高表达于食管鳞癌组织中,并且发现其与食管癌的转移密切相关,其对食管鳞癌患者的预后预测有重要意义,可能成为食管鳞癌诊断、治疗的新标志物。     

长链非编码RNA HAGLROS在食管鳞癌组织中的表达及其对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA HAGLROS在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌患者临床病理参数之间的关系,分析HAGLROS对食管鳞癌细胞增殖及转移的影响.方法 运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HAGLROS在42对食管鳞癌组织与癌旁食管正常组织及食管上皮细胞Het1A及食管鳞癌细胞EC109和KYSE30...     

芬太尼对食管鳞癌细胞株Eca109增殖及凋亡的影响

目的:探讨不同浓度的芬太尼对食管鳞癌细胞株Eca109增殖和凋亡的影响。方法:选用不同浓度的芬太尼（0.5、5、50、500ng/ml）干预细胞。采用四甲基偶氮唑蓝（MMT）法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V/PI 双染色法测定细胞凋亡。结果:各组芬太尼孵育Eca109细胞24h后,对细胞的增殖无明显影响;孵育48h后,与对照组相比,各浓度组均能显著抑制细胞的增殖（P＜0.05）,且呈浓度和时间依赖性。芬太尼孵育Eca109细胞48h,与对照组相比,各浓度组均能诱导早期凋亡和晚期凋亡,呈浓度依赖性（P＜0.05）。结论:芬太尼可抑制食管鳞癌细胞株Eca109的增殖并诱导凋亡。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的:比较选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果:COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖(P<0.05),并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论:尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

OGT蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨OGT蛋白在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达及其与临床病理的关系。方法:收集66例ESCC组织标本及其癌旁组织标本,免疫组化法测定OGT蛋白的表达。结果:OGT在ESCC组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),OGT的高表达与TNM 分期、病理分级相关(P<0.05),而与性别、年龄及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论:OGT在食管癌组织中表达增高,提示OGT的异常高表达在食管癌的发生发展中起重要作用。     

食管鳞癌中差异表达的lncRNA的筛选及分析

目的:筛查及分析食管鳞癌中长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA的差异表达谱,以及这些差异lncRNAs的功能、互作分子.方法:通过对3对食管鳞癌/癌旁组织的基因芯片筛选及生物信息学分析,预测这些差异表达的lncRNAs潜在靶点、通路,及其与临近编码基因、转录因子的相关性.结果:按FC 值≥2.0且P值≤0.05的标准,共筛选得到癌及癌旁组织差异表达的lncRNA 182个,mRNA 108个,GO聚类和KEGG分析发现差异lncRNAs潜在靶标基因与细胞周期调控、细胞分化、细胞外基质等活性密切相关,进一步生物分析得到lncRNA NONHSAT015779、NONHSAT08197、NONHSAT112918和NONHSAT115190等17个lncRNAs可能与食管鳞癌发生发展密切相关.结论:与癌旁组织相比,lncRNAs在食管鳞癌组织中显示不同的表达模式,这些差异表达的lncRNAs可能在食管鳞癌发生和发展中发挥重要作用.     

p21‐activated kinase 4 promotes the progression of esophageal squamous cell carcinoma by targeting LASP1

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is one of the most common malignant tumors of the digestive tract in humans. Several studies have indicated that PAK4 is associated with the risk of ESCC and may be a potential druggable kinase for ESCC treatment. However, the underlying mechanism remains largely unknown. The aim of our study is to identify the functional role of PAK4 in ESCC. To determine the expression of PAK4 in ESCC, Western blot analysis and immunohistochemistry were performed, and the results showed that PAK4 is significantly upregulated in ESCC tissues and cell lines compared with normal controls and normal esophageal epithelial cell line. To further investigate the role of PAK4 in ESCC, cell viability assays, anchorage‐independent cell growth assays, wound healing assays, cellular invasion assays, in vivo xenograft mouse models, and metastasis assays were conducted, and the results showed that PAK4 can significantly facilitate ESCC proliferation and metastasis in vitro and in vivo. To determine the potential target of PAK4 in ESCC progression, a pull‐down assay was performed, and the results showed that LASP1 may be a potential target of PAK4. An immunoprecipitation assay and confocal microscopy analysis confirmed that PAK4 can bind to and colocalize with LASP1 in vitro and in cells. Notably, rescue experiments further illustrated the mechanistic network of PAK4/LASP1. Our research reveals the oncogenic roles of PAK4 in ESCC and preliminarily elucidates the mechanistic network of PAK4/LASP1 in ESCC.