四川石渠县鼠疫耶尔森菌的分子生物学特征

目的：对四川省石渠县鼠疫耶尔森菌的遗传特性进行分析。并与其他类型的鼠疫苗株相比较。方法：特征性基因的PCR扩增，随机扩增多态性DNA，脉冲场电泳、rRNA基因指纹图分析等。结果：石渠县的菌株为典型的鼠疫菌株，具有鼠疫强毒菌的典型特征，从该县青海田鼠中分离的鼠疫菌株，其分子生物学特征与我国其他疫源地中的鼠疫菌株明显不同。结论：该地可能存在一种新类型的鼠疫自然疫源地，其鼠疫菌属于一单独型别；1999年该县发生的人间鼠疫。感染来自该疫源地之外；对该疫源地仍须密切监视，以确定其对人类的威胁。     

我国鼠疫菌的营养类型及其流行病学意义

目的 研究我国鼠疫菌的营养型及流行病学意义。方法 采用定量培养法。将鼠疫菌28℃ 17h培养物稀释成1000个／ml，分别接种于完全琼脂平碟、Lawton最小琼脂平碟和各种最小限定琼脂平碟，观察鼠疫菌对各种氨基酸的需求。结果 通过对我国10种类型鼠疫自然疫源地内258株鼠疫菌营养需求的研究证实，我国鼠疫菌的营养型有3类：基本营养依赖型、低营：养型和高营养型。结论 我国鼠疫菌的基本营养依赖型具有地理分布特征，研究结果可为鼠疫菌的分型提供依据。     

我国鼠疫耶尔森菌Pgm特征的研究

目的　对从我国不同类型疫源地分离的鼠疫菌进行色素沉着因子 (Pgm )表型的分析。方法　用氯化血红素培养基或刚果红培养基培养鼠疫菌 ,对不同颜色的菌落进行计数 ,计算鼠疫菌Pgm的阳性率。 结果　我国 10个疫源地的 16个生态型和新发现的四川青海田鼠型 ,除昆仑山A、B型外 ,其他各型的菌株均含有Pgm+ 菌 ,以青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 率为高 ,Pgm+ 菌株 >90 %。结论　青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 表型稳定。     

内蒙古地区鼠疫菌营养需求谱的研究

内蒙古地区自1949年开展鼠疫防治工作以来，通过微生物学方法检验了大量的鼠疫疫源动物和媒介昆虫标本，基本证实并查清了各种类型鼠疫疫源地的存在与分布。来源于不同自然疫源地的鼠疫苗有不同的营养需求。因此，查清各疫源地菌株的营养谱，对鼠疫菌的生理生化和遗传变异的研究十分重要。鼠疫苗的营养型需求差异涉及氨基酸和维生素等，但主要还是对氨基酸需求的差异。检查发现，内蒙古地区鼠疫菌株有3种基本营养型：草原黄鼠疫源地菌株，需要甲流氨酸、俄氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸；长爪沙鼠疫碌地菌株，需要甲硫氨酸、跳氨酸、色氨酸、苯丙…     

鼠疫耶尔森菌检测方法的研究进展

鼠疫（Plague）是由鼠疫耶尔森菌（Yersinia Pestis）引起的人畜共患的烈性传染病之一。自1894年耶尔森和北里2位学者成功分离和鉴定出鼠疫耶尔森菌以来，人们己成功地建立起常规的病原学和血清学检测方法。随着分子生物学技术的飞跃发展，鼠疫菌检测技术正发生着日新月异的变化。现就近年来鼠疫耶尔森氏菌检测的研究进展作一综述。     

生物传感器与鼠疫耶尔森菌检测

生物传感器由于具有轻巧和灵敏度高的特点，可能会在微生物检测中发挥重要作用。尽管目前由于微生物检测的商品化传感器还十分稀少，但是一个值得探讨的发展方向。鼠疫作为一种典型的人兽共患病广泛分布在全世界，其病原鼠疫耶尔森菌的检测因此显得尤为重要。本综述了光纤传感器、不寻址电位传感器和平面波导传感器在鼠疫耶尔森菌检测中的应用，介绍了各传感器原理与特点，并对灵敏度和特异性进行了讨论。     

布氏田鼠鼠疫菌102 kb pgm基因座结构研究

目的　研究布氏田鼠鼠疫菌株 1 0 2kbpgm基因座结构与其他类型鼠疫菌是否有区别 ,及其与布氏田鼠鼠疫菌株的独特特征的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)的方法 ,共设计 2 5对嵌套的引物 ,以喜玛拉雅旱獭鼠疫菌株和布氏田鼠鼠疫菌株的染色体DNA为模板 ,分段扩增该区域内的DNA ,选择差异较大的扩增片段进行克隆和测序 ,与已发表的序列比较。结果　布氏田鼠鼠疫菌株的 1 0 2kbpgm基因座一端缺失了1 952个碱基 ,即插入序列IS1 0 0。另外 ,在测序的这段基因中 ,一类似于可变数量串联重复序列 (VNTR)的区域 ,布氏田鼠鼠疫菌比已发表的序列多出几个拷贝。结论　布氏田鼠鼠疫菌株的 1 0 2kbpgm基因座序列改变了 ,一端缺失了插入序列IS1 0 0 ,这就使得它的毒力岛不容易丢失 ,保持了 pgm+表现型的稳定 ;与其毒力的关系 ,有待于进一步研究     

鼠疫耶尔森菌遗传学研究进展

染色体、质粒作为鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的遗传基础,决定着鼠疫菌的生物学特征及致病力.在现有的鼠疫菌全基因组序列中,各型菌株基因组都表现出G+C含量偏差、存在丰富的插入序列、大量的假基因及频繁的基因重组等特征,这些都是鼠疫菌迅速进化的关键.鼠疫菌遗传学通过基因组学、比较和进化基因组学的研究,确定鼠疫菌对人体的毒力因子和致病机制,探索鼠疫菌致病性和进化的遗传学机制,从而为鼠疫的流行监测及疫苗研制等防治工作提供科学的理论依据.     

青藏高原鼠疫耶尔森菌基因型分布

目的研究青藏高原鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因组型分布特征.方法对分离到的青藏高原鼠疫菌297株,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证.结果在喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地中,鼠疫菌基因组型有9种,分别为1、5、6、7、8、10、11、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5、8和10型为主,3种基因组型合计所占比例为80.6%（204/253）,而且不同地区鼠疫菌基因组型的分布也不一致.青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因组型全部为14型.结论青藏高原鼠疫菌基因组型分布具有明显的地理特征.根据基因组型的分布状况推测出了鼠疫菌在青藏高原的传播路径.     

鼠疫耶尔森菌显色培养基的筛选试验

目的 根据鼠疫菌对某些抑菌剂的抵抗力和酶底物显色的方法研制一种鼠疫菌显色培养基,并对其进行检测效果评价,方法 以耶尔森菌选择性培养基(CIN琼脂)为基础添加促进鼠疫菌生长的营养成分以及不同浓度抑菌剂,制备4种鼠疫菌显色培养基,通过单因素实验,筛选出最佳鼠疫菌显色培养基.结果 经单因素筛选出的1％胆盐显色培养基对常见致病...     

鼠疫耶尔森氏菌外膜蛋白研究进展

耶尔森氏菌属包括 11个菌种 ,其中只有鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌对人致病 ,而其余 8个菌种只对动物致病。致病性耶尔森氏菌的外膜蛋白(yersiniaouter -membranceproteins ,Yops)一直是研究的热点。现将其研究进展综述如下。1　外膜蛋白的种类与基因定位3种对人致病的耶尔森氏菌在对外环境刺激作用反应时分泌一系列毒力因子和毒力辅助因子。现已证实这一系列毒力因子和毒力辅助因子均由大小为 70kb的毒力质粒编码(包括 11种外膜蛋白和V抗原 )。该编码质粒保守且对耶尔森氏菌毒力的发挥至关重要。鼠疫耶尔森氏…     

鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法的建立及评价

目的 建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法 依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列["疫岛(PeI)"和"假岛(PsI)"], 与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对, 设计特异性的引物, 对鼠疫菌、假结核菌和其他肠道细菌进行鉴定。结果 用52株鼠疫菌、57株假结核菌和其他肠道菌株进行验证, 结果显示, 5对鼠疫菌的鉴定引物中, 2对(PeI2和PeI11)仅在52株鼠疫菌中扩出目的条带, 另3对引物(PeI1、PeI3和PeI12)除鼠疫菌外在部分假结核菌株中也扩出目的条带;5对假结核菌鉴定引物中, 1对引物(PsI1)在52株鼠疫菌和57株假结核菌株中扩出目的条带, 4对引物(PsI7、PsI16、PsI18和 PsI19)仅在57株假结核菌株中均扩出目的条带, 在鼠疫菌中未扩出目的条带。结论 用鼠疫菌和假结核菌共有的PsI1序列、鼠疫菌特有的PeI2和PeI11序列及假结核菌特有的PsI7、PsI16、PsI18和 PsI19序列组成的基因鉴别方法, 可以用于鼠疫菌和假结核菌的基因快速鉴别。     

鼠疫耶尔森菌检测技术研究进展

鼠疫(plague)是由鼠疫耶尔森菌(yersinia pestis)引起的自然疫源性疾病,其传染性强,传播速度快,病死率高,被列为甲类传染病之首[1].鼠疫在历史上曾有过3次大流行,罹难者数以亿计.为了防止鼠疫的大面积的流行,维护社会的生命和财产安全,对鼠疫的快速诊断提出了更高的要求.如今,新技术新手段的应用,为有效的控制鼠疫的传播和流行提供了保障.本文对鼠疫检测技术和方法进展进行综述.     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白的克隆与表达

目的克隆并表达鼠疫耶尔森菌的多种外膜蛋白或外膜蛋白的定位、表达调控蛋白。方法通过PCR技术对目的基因进行扩增，其PCR产物经纯化、酶切处理后，再分别导入原核表达载体pET32a中，然后转化大肠埃希菌BL21(DE3)，IPTG诱导后，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和蛋白质芯片分析。结果获得了23个表达鼠疫耶尔森菌外膜蛋白或外膜蛋白的定位、表达调控蛋白的克隆子。全部重组蛋白质的纯度均在85％以上。结论构建了一系列重组表达质粒，为进一步研究鼠疫耶尔森菌外膜蛋白的结构与功能奠定了基础。     

鼠疫耶尔森菌基因组核糖体结合部位识别

目的 通过统计分析鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)CO92株中核糖体结合位点(RBS)与翻译起始位点的距离,探索最适合翻译起始的RBS与起始位点的距离.方法 通过对鼠疫菌所有拷贝的16S rRNA 3’端,及已经通过实验确定的177处RBS进行分析,确定鼠疫菌RBS的序列特征.统计鼠疫菌CO92株中存在的所有RBS序列的位置和数量,及RBS序列与翻译起始序列ATG(GTG,TTG,CTG)的距离.观察已经公布的CO92株的编码序列(CDS)片段前20个碱基序列的特征.结果 在CO92的全基因组序列中搜索,共发现可能的RBS结构5081个,2909个后面一段距离内存在开放读码框架,其中1541与标注的CDS相符,535与标注的CDS终止位点相同,但起始位点不同.CO92序列中的3887 CDS前面20个碱基中,57.7％含有RBS序列.结论 RBS序列与起始位点间隔7个碱基和8个碱基出现的次数最多;RBS可能作为基因识别的重要指征.     

四川省2000-2008年青海田鼠鼠疫疫情监测

目的 分析四川省2000-2008年青海田鼠鼠疫流行趋势.方法 按照"全国鼠疫总体规划"和"四川省鼠疫监测方案"及实施细则进行调查.结果 2000-2008年每个年度均发生青海田鼠鼠疫流行;鼠平均密度312.41只/ha;青海田鼠体染蚤率42.57%.蚤指数0.88.青海田鼠巢蚤指数55.89;发现染疫动物6种,包括青海田鼠、牧犬、沙狐、家猫、藏系绵羊和长尾仓鼠,其中活体青海田鼠检菌率0.32%,自毙青海田鼠检菌率22.99%;血清学阳检率6.70%.发现蚤类4科11属19种,其中染疫媒介3种,蚤类检菌率0.054%,包括细钩盖蚤、直缘双蚤指名亚种和五侧纤蚤邻近亚种.结论 四川省青海田鼠鼠疫呈连续流行态势.     

鼠疫耶尔森菌rRNA基因识别特征研究

目的 分析鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的rRNA基因识别特征.方法 通过比较基因组学方法,利用Clustal W软件,对目前已完成全基因组测序的9株鼠疫菌的rRNA基因序列进行分析,分别比对rRNA基因簇两侧的2000bp序列、基因簇内16S、23S、5S rRNA及16S～23S基因间隔区序列,以确定鼠疫菌rRNA基因的识别特征.结果 菌株D182038、D106004、Z176003和CO92分别有6个rRNA基因簇拷贝(6拷贝菌株),菌株91001、KIM、Nepa1516、Antiqua和Pestoides F分别有7个rRNA基因簇拷贝(7拷贝菌株).按照两侧2000bp序列不同,可将鼠疫菌rRNA基因簇分成13种类型,并可将6拷贝与7拷贝菌株进行区分;16S～23S rRNA基因间隔区含有4种不同种类和数量的tRNA基因,可将6拷贝菌株和7拷贝菌株分别进行区分;23S rRNA基因在不同菌株间及不同rRNA拷贝间的碱基突变数方差分析显示,各菌株间F=0.548,P=0.815>0.05;各拷贝间F=5.228,P<0.01.结论 鼠疫菌rRNA基因簇两侧序列、间隔区tRNA基因和23S rRNA基因可作为识别不同菌株和不同rRNA基因簇拷贝的指标,将鼠疫菌不同菌株进行分类.

Abstract：

Objective To study the identification characteristics of rRNA genes on Yersinia (Y.)pestis.Methods By means of comparative genomics,we compared the rRNA genome sequences of nine completely sequenced strains of Y. pestis isolated from China and other countries by Clustal W software.we also compared the 2000 bp sequence adjacent to the rRNA genes,rRNA genes and 16S-23S rRNA spacer region respectively to determine the identification features of rRNA genes for Y. pestis.Results There were 6 rRNA gene clusters in the strains of D182038,D106004,Z176003 and CO92 respectively(6 copies strain).There were 7 rRNA gene clusters in the strains of 91001,KIM,Nepa1516,Antiqua and Pestoides F(7 copies strain).According to the 2000 bp sequence,13 types of rRNA gene clusters could classify the strains between the 6 copies and 7 copies.There were 4 types of tRNA gene among the 16S-23S rRNA spacer region that could classify the strains among the 6 copies and 7 copies strains respectively.The number of point mutation among the 23S rRNA gene was statistically different in some copies under ANOVA analysis(F=0.548,P=0.815>0.05 among the strains and F=5.228,P<0.01 among the copies).Conclusion The 2000 bp sequence adjacent to the rRNA genes,tRNA gene and 23S rRNA gene sequence could serve as the identification sign of rRNA genes for classifing the strains of Y. pestis.     

2000-2004年四川省青海田鼠鼠疫流行特点分析

目的 分析2000-2004年青海田鼠鼠疫流行特点，为鼠疫防治提供科学依据。方法按照“全国鼠疫总体规划”和“四川省鼠疫监测方案”及实施细则进行调查。结果2000-2004年5个年度均有青海田鼠鼠疫流行；发现染疫动物5种，除青海田鼠外，还有牧犬、沙狐、家猫和藏系绵羊，染疫媒介5种。结论 青海田鼠鼠疫呈连续流行态势。     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性研究

目的建立分析鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性的简便方法。方法采用DNAstarProtean和EMBOSS网络分析平台综合预测鼠疫耶尔森菌外膜蛋白YopE、YopH、YopT、YopJ、YopM的免疫原性,并通过蛋白质芯片技术对上述外膜蛋白的免疫原性进行验证。结果计算机综合预测分析显示外膜蛋白YopE抗原性最好,蛋白质芯片技术进一步证实YopE具有良好的免疫原性。结论软件预测结合蛋白质芯片检测的方法可用于筛选病原微生物抗原性蛋白。