庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制

目的：研究HGV和HCV的复制和表达。方法：利用HGV全长cDNA克隆(HGVqz)及HCV1a／1b嵌合体cDNA克隆分别构建表达质粒p3．1HGV和p3.1HCV并转染张氏肝细胞,以HGVqz克隆建立HGV转基因小鼠。分别应用RT—PCR、免疫组化及Western印迹分析病毒正、负链RNA,蛋白表达和剪切。结果：在转染p3.1HCV的张氏肝细胞及HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链RNA,但在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中未能检出HGV负链RNA。Western印迹在转染p3.1HCV的张氏肝细胞中检测到针对HCV NS3蛋白、相对分子质量约70000的特异性条带,在HGV转基因小鼠某些组织中检测到2条特异性条带,相对分子质量约42000和100000,分别相当于HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而,在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中检测到针对HGV E2蛋白的特异性条带,其相对分子质量约为310000,相当于HGV整个前体蛋白。结论：HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用,HGV和HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异,故两种病毒体外培养时的嗜性细胞株并不完全一致。     

全长cDNA文库的构建和新基因全长cDNA克隆的策略

基因全长cDNA克隆是研究基因功能的前提之一。新基因全长cDNA克隆的方法很多，目前比较可行且应用较多的主要是cDNA库筛选。本主要介绍了近年来比较常用的全长cDNA库的构建及全长cDNA的克隆(包括“电子”基因克隆)的策略和方法及其进展。     

庚型肝炎病毒转基因小鼠的特性研究

庚型肝炎病毒 (HGV)是一种新发现的与肝炎相关的病毒 ,作者已克隆了 HGV的全长基因 ,并制备了含有庚型肝炎病毒 (HGV)全长基因的转因基小鼠。作者以本室构建的 HGV转基因小鼠为材料 ,取转基因小鼠的各种组织进行 RT- PCR、免疫组织化学、Westernblotting等实验 ,分析 HGV基因在转基因小鼠体内的复制、表达及前体蛋白的剪切。并以外周血单核细胞(PBMC)及血清 RNA阳性的转基因小鼠血清接种Molt- 4细胞 ,鉴定细胞及上清中的 HGV RNA以及HGV病毒颗粒 ,研究 HGV的传染性。结果发现 HGV的正、负链 RNA以及蛋白产物可以在多个组…     

庚型肝炎病毒研究现状与展望

病原微生物是人类健康的大敌 ,1 977年至 1 997年的 2 0年中 ,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近 30种 ,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌 O1 57、艾滋病毒、霍乱弧菌 O1 39等 ,学术界将这类微生物所致的疾病称为“新现传染病”( emerginginfectious diseases)。由于对这类病原微生物本身及其致病机制了解甚少 ,加之人群缺乏免疫力及有效的防治方法 ,这类新的病原体常引起严重的传染性疾病 ,造成巨大的社会影响和经济损失。庚型肝炎病毒 ( hepatitis G virus,HGV)被认为是这类病原微生物之一。1　概　述在 1 989年丙型肝炎病…     

重庆市庚型肝炎病毒（HGV）感染的初步观察

重庆市庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的初步观察ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎｈｅｐａｔｉｔｉｓＧｖｉｒｕｓ（ＨＧＶ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＣｈｏｎｇｑｉｎｇ张绪清陈国致顾长海（第三军医大学附属西南医院传染病中心）重庆，６３００３８采用酶...     

中国人丙型肝炎病毒2a型基因组C区基因cDNA的克隆及序列分析

测定陕西地区丙型肝炎病毒的Ｃ区基因序列，为进一步研究ＨＣＶ的流行病学和开展ＨＣＶ的诊治打下基础。方法；自行设计合成了两条正向引物和两条反向引物，用反转录ＰＣＲ法从陕西地区１例ＮＡＮＢ型肝炎患者血清中扩增出４３６ｂｐ的片段，将此片段克隆于ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）中用全自动序列分析仪测序。     

正常垂体及垂体瘤组织中新的全长cDNA的克隆

目的 从正常垂体及垂体瘤组织中克隆新的全长ｃＤＮＡ。方法 垂体ｃＤＮＡ文库构建,大规模表达序列标签（ＥＳＴｓ）产生及生物信息学处理,芯片拼接及ｃＤＮＡ末端快速扩增（ＲＡＣＥ）。结果 从正常垂体及垂体瘤组织分别克隆４１条和２６条新的全长ｃＤＮＡ,共６７条。在这些基因中,与内分泌功能相关者１６条;至少有２个具有典型信号肽结构的分泌蛋白;３个是具有典型穿膜结构的膜蛋白。在５个参与激素信号转导的新基因中,至少有２个可能参与酷氨酸激酶型受体的信号转导过程。结论 通过ＥＳＴｓ手段,短期内克隆到６７条新的全长ｃＤＮＡ。在这些新基因中,有些可能在垂体的生理及病理过程中起重要作用。     

GB病毒和庚型肝炎病毒的分子生物学研究近况

自从建立起丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒的免疫和分子生物学检测方法以后,使大部分非甲非乙型肝炎得以诊断,但仍有少部分肝炎患者的病因无法查明。早在１９６７年,美国Ｄｅｉｎｈａｒｄｔ教授等就开始了庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的研究［１］。用一位患急性黄疸型肝炎的外...     

庚型肝炎病毒全基因转基因小鼠的制备与遗传

目的：利用显微注射方法产生整合庚型肝火病毒（HGV）全基因的转基因小鼠，并研究HGV基因的遗传特性。方法：将含有HGV全长基因的载体线性化后，将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液，依常规方法进行显微注射，得到仔鼠后用PCR及基因组DNA Southern印迹法鉴定。阳性小鼠即为建立者（founder)上鼠，将founder小鼠与正常小鼠交配得到1代小鼠，随后将F1代阳性鼠与正常小鼠交配得到F2代小鼠。结果：共得到5只founder小鼠，其中4只与正常小鼠交配，得到F1代小鼠共41只，其中29只为阳性，阳性率为71％。F2代小鼠共21只，其中16只为阳性，阳性率为76％。结论：得到了整合有HGV全长基因的转基因小鼠，并证明HGV基因可以在转基因小鼠体内稳定传递。     

获取基因全长cDNA策略及应用

全长cDNA是研究基因功能的关键，获得全长cDNA也是基因组研究的重要内容之一，本文概述了近年来国内外获取未知基因cDNA全长的理论及其应用。     

新基因TMBP-1的全长cDNA克隆

目的：克隆胸腺细胞发育相关新基因。方法：本研究建立了抑制性差减杂交技术（SSH）、构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库。应用cDNA末端快速扩增方法（RACE）进一步克隆新基因的cDNA全长序列。结果：筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因,获得了新基因cDNA片段C91,应用RACE成功克隆新基因TMBP－1cDNA全长序列。它拥有一个969bp的开放读码框架,编码323个氨基酸。同源序列 比较发现,它编码一个未知功能的膜结合蛋白。Northem杂交分析显示,mRNA转录本长度为1．5kb;在两种胸腺基质细胞系中均有表达。新基因的cDNA全长序列。已被GenBank所接受。结论：抑制性差减杂交技术是克隆新基因片的有效方法;成功克隆新基因TMBP－1的cDNA全长序列。     

血清中乙型肝炎病毒全基因组及X基因的克隆与鉴定

目的:建立从血清样品直接扩增乙型肝炎病毒(HBV)全长DNA的方法,构建HBV全基因组克隆.方法:用长链PCR从血清样品一次性扩增HBV全长DNA,测序鉴定后插入质粒puc19构建含HBV全基因组的重组质粒,再从重组质粒扩增X基因并进行序列分析.结果:经DNA序列测定和酶切分析,获得HBV全基因组克隆,从克隆的HBV全基因组扩增到X基因.结论:从血清中可直接扩增到HBV全基因组DNA,为整体水平研究HBV基因组的变异与其致病及宿主抗感染免疫之间的关系奠定了实验基础.     

庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市部分献血员感染现状的研究

为了解乌鲁木齐市献血员庚型炎病毒的现状，本文采用酶地和聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒抗体（抗－ＨＧＶ）及其核酸（ＨＧＶＲＮＡ）〉结果在１００名献血员血清中检出９份血清抗－ＨＧＶ阳性，其中职业献血员抗－ＨＧＶ阳性率为１６％，非职业献血员抗－ＨＧＶ阳性率为２％，两组之间有显著性差异，９份抗－ＨＧＶ阳性血清中有２份血清ＨＧＶＥＮＡ同时阳性，二者的符合率为２２％，本研究首次在乌鲁木齐市献血员 实有庚型肝炎病     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。