叶酸对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉基因组总甲基化水平影响研究

目的探讨叶酸对高蛋氨酸饮食诱导高同型半胱氨酸血症(Hhcy)大鼠主动脉组织基因组总甲基化水平的影响。方法健康6周龄雄性Wistar大鼠36只,体质量(160±10)g,适应性喂养1周后随机分为对照组、高同型半胱氨酸组和叶酸干预组,每组12只。对照组给予AIN-93G配方饲料,高同型半胱氨酸组饲以含1.7%蛋氨酸的AIN-93G配方饲料,叶酸干预组饲以含1.7%蛋氨酸和0.008%叶酸的AIN-93G配方饲料。喂养18周后,全自动生化仪测定血浆Hcy、叶酸浓度;取大鼠胸主动脉进行苏木素-伊红(HE)染色,观察主动脉组织形态学变化;改进酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平。结果 18周蛋氨酸饮食可以诱导大鼠高同型半胱氨酸血症,叶酸干预可以拮抗血浆同型半胱氨酸(Hcy)升高(P0.01)及其介导的主动脉形态学变化;高同型半胱氨酸组主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平明显低于对照组(P0.01,P0.01);叶酸降低血浆Hcy的同时,主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平明显升高(P0.01,P0.05)。结论叶酸摄入不仅可以拮抗血浆Hcy水平升高,而且升高主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平。     

基因组DNA甲基化在同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制研究

目的 探讨基因组DNA甲基化变化在Hcy致VSMCs增殖的作用机制.方法 原代培养VSMCs并鉴定,用0、50、100、200、500μM浓度Hcy干预,MTF法检测VSMCs活性;Sssl甲基转移酶法分析基因组DNA甲基接受能力,甲基化敏感性限制性内切酶法分析基因组DNA甲基接受能力及DNA甲基转移酶活性.结果 MTT法表明在50μM Hcy时,VSMCs活性明显增加,其余活性下降,与各浓度组并不呈量效依赖关系;Hcy可增加DNA甲基接受能力,以50μM Hcy组效应最显著(P＜0.05);HpalI限制核酸内切酶消化,与对照组比较,基因组DNA甲基化接受能力减少了50.1%、41.7%、46.1%和25.5%(50、100、200、500μM Hcy组),BssHll限制核酸内切酶消化后,基因组DNA甲基化接受能力减少了约25.5%、18.1%、17.4%和18.0%(50、100、200、500μM Hcy组).结论 Hcy引起VSMCs基因组DNA去甲基化是平滑肌细胞增殖的重要机制之一,其效应偏重发生于CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小,其最大效应在50μM Hcy组,且无明显的量-效依赖关系.     

同型半胱氨酸对内皮细胞 DNA 总甲基化水平的影响

目的研究同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞总甲基化水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并经Ⅷ因子法对其进行鉴定,分别用含有0,2、8、32mmol·L-1 Hcy的RPMI1640培养液对其作用48h后,测定基因组总甲基化水平。结果O、2、8、32mmol·L-1 Hcy组HUVEC细胞总甲基化水平分别为：（9．25±0．15）％、（8．53±0．49）％、（6．24±O．27）％、（3．79±0．13）％,呈明显的剂量效应关系（P〈0．05）。结论Hcy可下调人脐静脉内皮细胞DNA的总甲基化水平,并可能是Hcy致动脉粥样硬化的重机制之一。     

DNA甲基化和动脉粥样硬化研究进展

DNA甲基化是基因组一个主要遗传外修饰方式,它能够调控基因表达.最近的研究表明在动脉粥样硬化发生过程中有DNA甲基化的异常发生.在动脉粥样硬化中DNA甲基化模式的紊乱表现为基因组广泛低甲基化和某些CpG岛的异常高甲基化共存.DNA甲基化的改变及其所引起的基因表达异常可能在高同型半胱氨酸血症和衰老致动脉粥样硬化发生过程中起了重要作用.进一步研究DNA甲基化在动脉粥样硬化中的改变,可能为动脉粥样硬化的诊断和治疗提供新途径.     

牛磺酸对Hhcy家兔动脉粥样硬化的防治作用

目的探讨牛磺酸对高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,Hhcy）家兔动脉粥样硬化干预作用机制。方法采用高L-蛋氨酸饮食方法建立兔Hhcy血症模型,补充牛磺酸（taurine,Tau）,以正常家兔作为对照组（Normal control,NC）,分别于实验0、4、8周分别检测各组血清同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）含量,并通过血管超声观察腹主动脉血管变化。结果蛋氨酸组第4、8周时血清Hcy、TG、TC含量显著高于同期对照组（P〈0.01,P〈0.05）;Tau组Hcy含量低于蛋氨酸组,无明显差异（P〉0.05）,TG、TC含量Tau干预组均显著低于蛋氨酸组（P〈0.01,P〈0.05）。血管超声和组织学观察：蛋氨酸组腹主动脉内膜明显增厚、血管平滑肌细胞增生,弹力纤维断裂、排列紊乱、有斑块形成;Tau组血管内膜较光滑、结构排列整齐无斑块,与对照组比较无显著差异。结论Tau有明显的治疗Hhcy兔动脉粥样硬化的作用,其机制可能为降低血液中胆固醇和脂肪的含量而不是半胱氨酸的含量。     

同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究

目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响.方法 原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响.结果 内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),且以50或100μM Hcy组最明显.结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制.     

大鼠总基因甲基化状态改变相关危险因素的研究

目的：探讨高胆固醇血症（Hypercholesterolemia,HTC）对wistar大鼠主动脉基因组DNA总甲基化水平及总甲基转移酶活力的影响并比较高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocysteinemia,HHCY）和HTC在影响主动脉基因组DNA总甲基化水平、总甲基转移酶活力之间的差异。方法：将wistar大鼠33只,随机分3 组：对照组、蛋氨酸组、高胆固醇组,每组11只。对照组给予普通大鼠饲料,其余各组给予相应的配方饲料。持续喂养3个月后心脏取血检测血清同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）、总胆固醇（Total cholesterol,TC）等相关指标。提取主动脉基因组DNA检测基因组DNA总甲基化水平、提取主动脉核蛋白检测基因组DNA总甲基转移酶活力。结果：经多个样本均数间的多重比较（Dunnett-t检验）:高胆固醇组大鼠的血清TC水平明显高于对照组和蛋氨酸组,且差异有统计学意义（P＜0.05）,血清中甘油三酯（Triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）,差异无统计学意义（P ＞0.05）。蛋氨酸组大鼠血清Hcy水平明显高于对照组及高胆固醇组,且差异有统计学意义（P＜0.05）。HHCY和HTC均增加基因组DNA总甲基转移酶活力,可促使基因组DNA去甲基化,与对照组相比,各组均具有统计学意义（P＜0.05）,但两组之间差异无显著性。结论：HTC降低大鼠主动脉基因组DNA总甲基化水平可能是HTC导致动脉粥样硬化发病重要机制之一,且HHCY和HTC在影响基因组DNA低甲基化之间的差异无显著。     

细胞外超氧化物歧化酶DNA 甲基化对动脉粥样硬化的诱导作用及作用靶点

目的 探讨细胞外超氧化物歧化酶DNA（EC-DNA）甲基化水平改变在动脉粥样硬化发病中的作用。方法 16 只ApoE-/- 小鼠（ApoE-/- 组）给予高脂饲料喂养,16 只C57BL/6 小鼠（WT 组）给予不含任何高脂成分的普通饲料喂养,分别于喂养第8、12、16 和20 周检测小鼠血脂、主动脉组织形态及丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测主动脉组织细胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）、DNMT1 mRNA 水平,巢式甲基化特异性聚合酶链反应检测主动脉组织EC-SOD DNA甲基化程度。将THP-1 诱导为巨噬细胞,分为3 组：空白对照组（NC 组）、空白质粒组（pEGFP-N1 组）和重组质粒组（pEGFP-N1-DNMT1 组）,NC 组用不做任何处理,继续培养,pEGFP-N1 组加入10μl 脂质体Lipofectamine 和20μg 空质粒载体pEGFP-N1,pEGFP-N1-DNMT1 组加入10μl 脂质体Lipofectamine 和20μg pEGFP-N1-DNMT1 重组质粒载体,培养24 h 后检测细胞EC-SOD、DNMT1 蛋白表达和EC-SODDNA 甲基化程度。结果 第8、12、16 和20 周,ApoE-/- 组TC、LDL、TG 呈升高趋势,HDL 无明显变化;各时段ApoE-/- 组TC、LDL、TG、HDL 与WT 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TC、LDL、TG 高于WT 组,HDL 低于WT 组。第16 和20 周,WT 组动脉组织内皮细胞结构规则有序,ApoE-/- 组主动脉内膜明显增厚并伴炎症浸润。第8、12、16 及20 周,ApoE-/- 组MDA、ROS 呈升高趋势,各时段ApoE-/- 组MDA、ROS 高于WT 组。ApoE-/- 组EC-SOD mRNA 表达水平、DNMT1 mRNA 表达水平和EC-SOD 甲基化水平与WT 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,EC-SOD mRNA 表达水平低于WT 组,DNMT1 mRNA 表达水平和EC-SOD 甲基化水平高于WT 组。pEGFP-N1-DNMT1 组DNMT1 蛋白表达、EC-SOD 甲基化水平及EC-SOD 蛋白表达水平与pEGFP-N1 组和NC 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,pEGFP-N1-DNMT1 组DNMT1 蛋白表达、EC-SOD 甲基化水平高于pEGFP-N1 组和NC 组,EC-SOD 蛋白表达水平低于pEGFP-N1 组和NC 组,pEGFP-N1 组和NC 组EC-SOD、DNMT1 蛋白及EC-SOD 甲基化水平比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EC-SOD 甲基化程度升高,导致EC-SOD 表达降低,机体抵抗氧化应激反应能力减弱,最终发展成动脉粥样硬化。     

同型半胱氨酸致巨噬细胞TNFSF4基因启动子去甲基化并增加其mRNA表达

目的 探讨同型半胱氨酸对THP-1巨噬细胞TNFSF4基因甲基化及mRNA表达的影响.方法 在由0.1μmol/L佛波脂(phorbot 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞中加入不同浓度的高同型半胱氨酸(homocysteine, HCY),并孵育不同时间.另设空白对照组.应用MS-PCR技术检测TNFSF4基因甲基化状态, 应用RT-PCR检测TNFsF4基因表达水平差异.结果 与对照组比较,随时间和浓度的不断增加,各药物浓度组非甲基化条带越来越浓(P＜0.01),甲基化条带越来越淡(P＜0.01),72 h处理组全部只出现非甲基化条带,同时各药物浓度组24 h TNFSF4基因mRNA表达增加,且呈剂量依赖关系(P＜0.01).结论 同型半胱氨酸可致THP-1巨噬细胞TNFSF4基因启动子区去甲基化,同时其mRNA表达水平增加.     

ERO1α启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化相互作用调控ERO1α表达改变介导Hcy致肝脏脂代谢紊乱的分子机制

【目的】 探讨ERO1α DNA甲基化和组蛋白甲基化相互作用调控ERO1α基因表达介导同型半胱氨酸致肝脏脂代谢紊乱的分子机制。 【方法】 建立apoE-/-小鼠HHcy模型,分为对照组、ApoE-/-对照组、HHcy组和干预组。检测肝脏脂质沉积情况、TC、TG及DNMT1含量、ERO1α 及G9a的表达;ntMS-PCR法检测ERO1α DNA甲基化改变;CHIP-qPCR法检测H3K9me2含量;不同Hcy刺激HL-7702肝细胞,验证ERO1α表达及甲基化程度;构建ERO1α和DNMT1的重组表达及沉默载体,检测肝细胞内TC和TG含量变化;AZC及Bix01294干预细胞后,分别检测H3K9me2表达及ERO1α甲基化水平。 【结果】 HHcy组小鼠肝脏脂质面积和血脂水平显著高于对照组,TC、 TG与其血清Hcy水平呈正相关。与对照组相比,各组中ERO1α的表达下降,与HHcy组相比,干预组中ERO1α表达升高,均与蛋白检测结果趋势一致;HHcy组DNMT1及G9a表达显著高于对照组,HHcy组中ERO1α甲基化水平及H3K9me2显著高于对照组。各组中ERO1α的表达逐渐下降,与Hcy呈浓度依赖关系;其中,与100 μmol/L Hcy组比较,叶酸组中ERO1α的表达升高,差异有统计学意义。分别过表达和沉默ERO1α并以Hcy作用后,与对照组相比,ERO1α过表达组TC和TG分别下降48.5%和38.1%,沉默组分别增加39.3%和46.4%。分别过表达和沉默DNMT1,结果显示,与对照组比较,过表达DNMT1后ERO1α甲基化水平增加15.9%,沉默组则下降55.9%,差异均有显著性。AZC抑制DNMT1并以Hcy干预后,抑制剂组与100 μmol/L Hcy组比较,ERO1α DNA甲基化水平降低了51%,H3K9me2水平随之降低;Bix01294干预后,100 μmol/L Hcy+Bix01294组与100 μmol/L Hcy组比较ERO1α启动子区H3K9me2水平降低,ERO1α甲基化水平随之降低。 【结论】 HHcy调控ERO1α启动子区DNA甲基化,和组蛋白甲基化相互作用导致ApoE-/-鼠肝脏脂代谢紊乱。     

蛋氨酸负荷对去卵巢大鼠血脂及一氧化氮的影响

目的:探讨蛋氨酸负荷对去卵巢大鼠血脂及一氧化氮水平(NO)的影响。方法:将4个月月龄雌性SD大鼠24只随机分为三组:假手术组(SHAM组)、去卵巢组(OVX组)、蛋氨酸组(去卵巢加蛋氨酸,MET组)。去卵巢术后1周,给予蛋氨酸灌胃,测定血清同型半胱氨酸(Hcy)、血脂和NO水平。结果:MET组血清Hcy、总胆固醇及低密度脂蛋白水平较SHAM组、OVX组明显升高,NO水平较SHAM组、OVX组明显降低。结论:蛋氨酸负荷加重去卵巢大鼠的高同型半胱氨酸血症,诱发脂代谢紊乱,引起NO水平降低,继而促发了去卵巢大鼠动脉粥样硬化的发生。     

DNA甲基化与肿瘤

DNA甲基化是一种重要的基因调控方式，DNA甲基化水平的改变在肿瘤的发生、发展中有重要的作用，DNA甲基化改变引起细胞中C→T突变、癌基因的低甲基化、抑癌基因的高甲基化、错配修复基因异常以及诱导染色体不稳定从而导致肿瘤的发生，利用肿瘤发生中DNA甲基化特征可对其进行有效的治疗。     

DNA甲基化、lncRNA在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症是育龄期女性常见的妇科疾病,其发病机制尚不明确.近年来研究表明表观遗传调控在子宫内膜异位症的发病过程中发挥了一定的作用,如DNA甲基化、组蛋白修饰、mircoRNA和lncRNA的调控.本文主要对DNA甲基化、lncRNA在子宫内膜异位症中的研究进展做一综述.     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞基因组范围DNA甲基化表达的影响

目的研究甜菜碱对人肝癌细胞HepG2内基因组范围DNA甲基化的影响。方法以浓度0.1、0.2、0.4mol/L甜菜碱作用于人肝癌细胞HepG2 24、48 h后,通过高效毛细管电泳仪(HPCE)检测肿瘤细胞中DNA水解产物中5-甲基-2′-脱氧胞嘧啶(5-methyl-2′-deoxycytidine,5 mdC)水平,来检测甜菜碱对HepG2内基因组范围DNA甲基化表达的影响。结果随着甜菜碱的浓度增大,5 mdC占总体胞嘧啶的峰面积的百分比也相应增大,且有剂量依赖性。结论甜菜碱作为甲基供体,促进HepG2细胞基因组范围DNA甲基化的表达,从而调控细胞周期抑制肿瘤的生长。     

NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义

目的 了解去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic acid,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHC-5、SHC-44甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)活性、DBNT mRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDAG处理人恶性胶质瘤细胞系CHC-5及SHC-44，观察两种细胞增殖和分化状态；采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度；应用RT-PCR法测定洲DNMT mRNA表达水平。结果 NDMT处理后两种细胞增殖速度明显减缓，分化水平升高；DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高；而DNMT mRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性，升高基因组甲基化水平，这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。     

结直肠癌与DNA甲基化

表观遗传调控是真核基因的表达调控之一,在结直肠癌的发生发展中具有重要作用。DNA甲基化修饰是表观遗传调控中目前研究较多的部分,DNA甲基化异常引起抑癌基因失活和癌基因激活是结直肠癌形成的分子机制之一。DNA异常甲基化的逆转可能有助于结直肠癌的诊断和治疗。     

胆固醇对血管内皮细胞基因组DNA甲基化的影响

目的:研究胆固醇对人血管内皮细胞基因组DNA甲基化水平的影响.方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞ECV304,以50.00 mg/L的胆固醇作用于ECV304 48 h,提取细胞基因组DNA,用高效液相色谱法(HPLC)检测基因组DNA甲基化水平.结果:与无胆固醇的对照组比较,50.00 mg/L胆固醇使ECV304细胞中DNA甲基化水平显著下降(P＜0.01).结论:一定浓度的胆固醇能降低血管内皮细胞中DNA甲基化水平.     

环境内分泌干扰物对胚胎发育调控基因DNA甲基化的影响

 DNA甲基化(DNA methylation)是一种重要的遗传修饰,是表观遗传学研究的重要内容。许多研究证实环境内分泌干扰物能够影响DNA甲基化的水平,有关环境内分泌干扰物对DNA甲基化的影响已经成为当前胚胎发育学的研究热点。本文就环境内分泌干扰物（environmental endocrine disruptor,EED）对胚胎发育调控基因DNA甲基化的影响进行综述,为今后的机制性研究提供参考。     

精神分裂症的DNA甲基化研究进展

环境因素在精神分裂症发生过程中具有重要作用。研究发现,环境因素可能通过DNA甲基化机制调控基因表达,导致精神分裂症的发生风险增加。文章就DNA甲基化对环境因素影响及其在精神分裂症发生中作用的相关研究进展作一综述。