同源盒基因在胶质瘤细胞中的表达

目的:观察胶质瘤细胞C6中同源盒基因(Hox基因组)的表达,及苯乙酸(PA)对Hox基因组表达的影响。方法:体外培养C6细胞并用PA诱导分化,提取细胞RNA。用Hox基因三对简并引物P1、P2和P3进行逆转录PCR(RT-PCR)。通过计算机图像分析,Hox基因组mRNA的表达水平用Hox基因(组)/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。应用PA前后基因表达的差异用t检验分析。结果:在胶质瘤细胞C6中,P1、P2和P3组Hox基因表达分别为0.8817±0.0731(n=16),0.6825±0.0987(n=9),0.8608±0.0881(n=16);应用PA后,分别为:0.8765±0.0667(n=8),0.8386±0.0811(n=14),0.8937±0.0598(n=11)。应用PA后,P2组Hox基因表达显著增强,与用药前比较,差异显著(P<0.001)。结论:在胶质瘤C6细胞中,PA对P2组Hox基因mRNA水平的表达有明显的上调作用。PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程可能有关。     

苯乙酸对胶质瘤细胞中HoxA10基因mRNA表达的影响

目的:观察苯乙酸(PA)诱导分化胶质瘤细胞C6过程中,同源盒基因HoxA3和HoxA10mRNA水平表达的变化。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)及图像分析法,分组检测原代培养的大鼠星形胶质细胞中及应用PA前后胶质瘤细胞C6中HoxA3和HoxA10基因mRNA水平表达。结果:HoxA3基因在正常大鼠脑组织和应用PA前后的胶质瘤C6细胞中,均存在明显表达,图像分析显示各组间差异无显著性。HoxA10基因在正常大鼠脑组织中未见表达;在胶质瘤C6细胞中存在明显表达;应用0.5mmol/LPA后,胶质瘤C6细胞中HoxA10基因弱表达,与未用药的C6细胞比较,图像分析显示差异有显著性(P<0.05);应用1.0mmol/LPA后,HoxA10基因未见表达,与未用药的C6细胞比较,图像分析显示差异有显著性(P<0.01)。结论:苯乙酸抑制胶质瘤细胞增殖的作用机理可能与降低胶质瘤细胞HoxA10基因mRNA水平表达有关。     

同源盒基因C10对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及在肿瘤微环境中的作用机制

目的探讨同源盒基因C10(HOXC10)对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其在肿瘤微环境中的作用机制。方法应用癌症基因组图谱(TCGA)与中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库分析HOXC10在高级别胶质瘤(胶质母细胞瘤)和低级别胶质瘤中的表达水平及其对患者生存的影响。按照HOXC10-siRNA转染操作说明书分别将HOXC10-siRNA 1(HOXC10-siRNA 1组)、HOXC10-siRNA 2(HOXC10-siRNA 2组)和siRNA NC(NC组)转染至U251细胞, 在转染组中分别加入100 ng/ml重组蛋白趋化因子配体2(reCCL2), 记为HOXC10-siRNA 1+reCCL2和HOXC10-siRNA 2+reCCL2组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测各组细胞中HOXC10 mRNA和目的蛋白的表达, 细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖能力, Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移能力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, 多因子检测各组细胞中趋化因子的表达。共孵育实验检测HOXC10和趋化因子配体2(CCL2)招募并...     

HOXB1与 miR-3175在人胶质瘤中的表达及临床意义

目的：探讨同源异型盒基因 B1（HOXB1）与微小 RNA-3175（miR-3175）在人胶质瘤中表达的关系及临床意义。方法通过实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测60例人胶质瘤组织和15例正常脑组织中 HOXB1与 miR-3175的表达,采用 Spearman 相关分析法分析人胶质瘤组织中 HOXB1、miR-3175表达的相关性,分析 HOXB1、miR-3175表达与临床病理特征的关系,采用 Kaplan-Meier 评估HOXB1、miR-3175与患者生存期的关系,采用 COX 回归模型分析患者预后因素。结果较正常脑组织, HOXB1在人胶质瘤组织中低表达（1．498±0．323∶0．946±0．588,t ＝－5．680,P ＝0．000）,miR-3175在人胶质瘤组织中高表达（1．008±0．355∶2．076±0．841,t ＝4．274,P ＝0．000）,并且在人胶质瘤组织中HOXB1与 miR-3175表达呈负相关（r ＝－0．601,P ＝0．000）。HOXB1表达与肿瘤分级相关（χ2＝4．848, P ＝0．028）,miR-3175表达与肿瘤分级（χ2＝5．640,P ＝0．018）、Karnofsky 功能状态评分（χ2＝4．785,P ＝0．029）相关。Kaplan-Meier 分析结果显示 HOXB1、miR-3175高表达组与低表达组中位生存期[HOXB1：（21．0±4．0）个月∶（7．0±0．8）个月;miR-3175：（6．0±0．6）个月∶（16．0±5．8）个月]差异有统计学意义（χ2＝7．495,P ＝0．006;χ2＝9．591,P ＝0．002）。COX 回归模型分析结果显示肿瘤分级（RR ＝6．556,95％CI 为1．196～35．952,P ＝0．002）、HOXB1（RR ＝0．018,95％CI 为0．001～0．312,P ＝0．006）和miR-3175（RR ＝2．098,95％CI 为1．663～7．513,P ＝0．037）是影响胶质瘤患者预后的独立因素。结论HOXB1与 miR-3175在人胶质瘤中的表达呈负相关,并与胶质瘤组织的恶性程度、胶质瘤患者的生存期及预后密切相关。     

HOXC基因在肿瘤中的表达与作用

HOXC基因簇作为同源盒(HOX)基因家族的一员,在多种器官中均有表达,具有调控基因表达、细胞分化和机体形态发生的功能,而其功能的异常与白血病、乳腺癌、肾细胞癌、前列腺癌等肿瘤的预后密切相关.     

基于数据挖掘分析同源盒基因C9在胃癌中的表达及意义

目的 通过数据挖掘分析同源盒基因C9(HOXC9)在人胃癌中的表达及其意义.方法 利用TIM-ER、Fire Browse数据库分析HOXC9基因在不同肿瘤类型的表达情况;利用Oncomine、基因表达谱数据动态分析(GEPIA)、肿瘤基因组图谱(TCGA)、基因表达汇编(GEO)等数据库分析HOXC9基因在胃癌中的表...     

RI基因真核表达载体的构建及其对C6胶质瘤细胞生长的影响

目的通过构建核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor, RI)基因的真核表达载体——pLNCX-ri, 并转染C6神经胶质瘤细胞,探讨RI抑制肿瘤生长的作用机制.方法用Nde I / Xho从已构建的pET-ri上切下1.4 kb的RI基因片段,再构建到pLNCX上,获得真核表达载体(pLNCX-ri),采用Lipofect AMINE辅助转染大鼠C6神经胶质瘤细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,用Western blotting 检测RI基因的表达水平.将转染阳性的C6神经胶质瘤细胞接种于大鼠皮下,观察肿瘤的生长情况.结果在转染的C6神经胶质瘤细胞中,RI基因的表达量明显高于未转染的C6神经胶质瘤细胞,转染阳性的C6神经胶质瘤细胞在大鼠体内的成瘤潜伏期23±5.7天(对照组14±3.5天),瘤组织重量转染组1.35±0.43g比对照组2.40±0.61g(P＜0.01)明显下降,瘤组织的血管密度转染组27.2±4.31比对照组47±6.54(P＜0.01)明显减少.结论RI基因的转染对肿瘤的生长有明显抑制作用,其作用机制可能是抑制肿瘤组织血管的形成.     

表皮生长因子对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的探讨表皮生长因子（EGF）在体外对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因（PTTG）表达的影响。方法不同浓度的EGF（10ng／mL、20ng／mL和30ng／mL）在体外作用于胶质瘤C6细胞,半定量逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测PTTG mRNA表达,Western检测其PTTG蛋白表达。结果与空白对照组比较,RT—PCR和Western检测结果显示PTTG mRNA及其蛋白的表达在各EGF作用组均显著增高,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论EGF可以量效的方式上调PTTG的表达。     

基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因

背景与目的:脑胶质瘤是神经系统常见肿瘤,其发病机制尚不清楚。本研究运用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌候选基因,并探讨胶质瘤的分子生物学发病机制。方法:从人脑胶质瘤组织标本中提取mRNA,反转录成cDNA,然后采用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因。结果:在肿瘤相关候选基因组克隆到人星形细胞内富含的磷酸蛋白PEA15(phosphoproteinenrichedinastrocytesof15)和酸性纤维蛋白生长因子(acidfibroblastgrowthfactor,aFGF)同源物等基因,在抑癌候选基因组克隆到干扰素诱导蛋白17和ndr2等。ndr2在正常脑组织中广泛表达,在胶质瘤组织内无表达。结论:ndr2基因是抑癌候选基因,可能在胶质瘤的发生中起一定作用。     

同源异型盒基因BP1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的BP1(beta-protein1)基因是新近发现的转录因子,定位于染色体17q21-22,属同源异型盒基因DLX家族,在急性髓系白血病和急性T淋巴细胞白血病中均呈过度表达。本研究通过观察BP1mRNA在乳腺癌中的表达情况,分析并探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法以β-actin基因作为参照,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测82例乳腺肿瘤组织、12例近端肿瘤旁组织和10例远端癌旁组织中BP1mRNA的表达。结果82例肿瘤组织中有53例BP1阳性(64.63%),而在近端癌旁组和远端癌旁组中则表达很弱(16.67%)或不表达(0%),差异具有统计学意义(P<0.05)。BP1基因的过表达与组织学分级有关(P<0.05),而与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理类型、肿瘤家族史、初潮年龄、初产年龄、怀孕次数、绝经状况、雌激素受体及孕酮受体状态无关。结论BP1基因在部分乳腺癌中上调,其表达与肿瘤组织学分级有关。     

Quantitative Real-Time Reverse Transcription-PCR Assay for the Expression of Tob mRNA in Human Colorectal Cancer

OBJECTIVE Tob is a member of Tob/BTG antiproliferative family. To date, Tob expression in human carcinoma using clinical specimens has not been studied in depth except for lung carcinoma and thyroid carcinoma. This study is the first to investigate the expression levels of Tob gene in human colorectal cancer tissues,and their corresponding para-cancerous tissues. The correlation of expression of the Tob gene with clinicopathological characteristics of colorectal cancer was also analyzed.METHODS Quantitative real time RT-PCR was used to detect the expression of Tob mRNA in 31 colorectal cancers.RESULTS Compared with normal tissues, up-regulation of Tob mRNA was observed in 31 colorectal cancer tissues (P = 0.020).The expression level of Tob at Dukes C + D phase was higher than Dukes A + B phase, and the difference was signifi cant (P < 0.05).However, in this study, it was found that the expression of Tob mRNA was not related with age, gender, and pathological type of colorectal cancer.CONCLUSION The up-regulation of Tob may be closely associated with tumorigenesis of colorectal carcinoma.     

Microarray Analysis of the Hypoxia-induced Gene Expression Profile in Malignant C6 Glioma Cells

Hypoxia is commonly featured during glioma growth and plays an important role in the processes underlyingtumor progression to increasing malignancy. Here we compared the gene expression profiles of rat C6 malignantglioma cells under normoxic and hypoxic conditions by cDNA microarray analysis. Compared to normoxicculture conditions, 180 genes were up-regulated and 67 genes were down-regulated under hypoxia mimicked byCoCl2 treatment. These differentially expressed genes were involved in mutiple biological functions includingdevelopment and differentiation, immune and stress response, metabolic process, and cellular physiologicalresponse. It was found that hypoxia significantly regulated genes involved in regulation of glycolysis and celldifferentiation, as well as intracellular signalling pathways related to Notch and focal adhesion, which are closelyassociated with tumor malignant growth. These results should facilitate investigation of the role of hypoxia inthe glioma development and exploration of therapeutic targets for inhibition of glioma growth.     

人脑胶质瘤细胞中IL-6mRNA的表达及意义

目的观察白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍＲＮＡ在人脑胶质瘤细胞中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对２０例新鲜人脑胶质瘤标本进行了检测。结果２０例标本中有１７例表达ＩＬ－６ｍＲＮＡ，恶性程度高的肿瘤中ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达量明显高于恶性程度低的肿瘤。结论脑胶质瘤细胞中ＩＬ－６基因的表达与脑胶质瘤的发生发展有关。     

人脑胶质细胞瘤中血管内皮生长因子基因的表达研究

目的　研究血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)在脑胶质细胞瘤中的表达及其与肿瘤病理分级、新生血管形成的关系。方法　采用Northern杂交和免疫组织化学染色检测 3 0例脑胶质瘤标本 ,2例脑胶质瘤细胞株 ,4例正常脑组织的VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　正常脑组织中VEGFmRNA的表达水平极低 ,而脑胶质瘤组织和细胞系中VEGFmRNA的表达水平高 ,P <0 .0 5。在正常脑组织中未见VEGF免疫组化染色阳性细胞 ,脑胶质瘤组织和细胞系中VEGF高表达 ,P <0 .0 5。随着脑胶质瘤恶性程度的增加 ,VEGFmRNA的表达增高 (γ =0 .85 ,P <0 .0 1)。VEGF的表达还与肿瘤的血管密度相关 (γ =0 .88,P <0 .0 1)。结论　脑胶质瘤中VEGF的异常表达 ,是判断脑胶质细胞瘤恶性程度和血管丰富程度的 1项客观指标。     

人脑胶质瘤中CD147的表达及其意义

背景与目的：以往研究发现CD147与某些恶性肿瘤存在相关性。本研究探讨CD147在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性。方法：收集61例星形细胞肿瘤及18例瘤旁脑组织标本．制作组织芯片。进行免疫组织化学染色,用半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）进行CD147mRNA检测。结果：（1）胶质瘤组织中CD147蛋白的阳性表达率为74．3％．正常脑组织中仅血管内皮细胞浆有阳性着色。（2）Ⅲ、Ⅳ级星形细胞肿瘤瘤细胞胞浆CD147着色显著强于Ⅰ、Ⅱ级低级别星形细胞肿瘤。（3）CD147mRNA在胶质瘤组织中阳性率为83．3％,明显高于正常脑组织中的阳性率25％（P〈0．05）。CD147mRNA在星形细胞肿瘤组织中的表达量为0．274±0．087,明显高于正常组织0．081±0．043,两者差异具有显著性（P〈0．05）。结论：CD147的表达可能在人脑胶质瘤的发生发展中起重要作用．     

去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的：观察去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理。方法：采用MTT（methy thiazolyl tetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况。利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学,原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：（1）一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;（2）免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;（3）原位杂交结果显示;NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究。     

胶质瘤中MicroRNA-184的表达及其预后价值

目的 研究人脑胶质瘤石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE）中微小RNA-184（microRNA-184, miR-184）的表达及其与临床病理特征之间的关系,探讨其在预测胶质瘤患者预后中的价值。方法 采用微阵列芯片法和RT-PCR检测108例胶质瘤FFPE和32例正常脑组织中的miR-184表达,同时Kaplan-Meier法分析胶质瘤患者总生存期和无病生存期情况。结果 胶质瘤组织中miR-184的表达下调,并用RT-PCR进一步验证; miR-184低表达与WHO分级（P=0.007）、Karnofsky 评分（KPS）（P=0.029）、复发时间（P=0.037）和生存时间（P=0.019）显著相关;Kaplan-Meier 分析结果表明,miR-184低表达与高表达患者总生存期（OS）（P=0.001）和无病生存期（DFS）（P=0.006）差异有统计学意义,miR-184低表达患者预后较差。多因素分析显示胶质瘤中miR-184的差异表达是预测OS[风险比（HR）：7.52;95％CI：2.63~21.42;P=0.002]和DFS[HR：11.56;95％CI：5.17~25.93;P<0.001]的独立危险因素。结论 miR-184的表达与胶质瘤患者预后显著相关,表明miR-184可作为预测胶质瘤患者预后的独立标志物。     

顺铂耐受胶质瘤细胞株诱导和细胞自噬的观察

背景与目的:明确胶质瘤耐药相关分子机制,有助于寻找新的治疗对策。我们将诱导对顺铂耐药的脑胶质瘤细胞株,探讨细胞自噬和胶质瘤细胞顺铂耐受的关系。方法:应用人胶质瘤细胞株U251,采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法,诱导耐药胶质瘤细胞株;用MTT法测定该耐药细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);电镜和GFP-LC3荧光染色检测细胞内自噬体;AnnexinV-FITC染色检测细胞凋亡;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1以及凋亡分子Caspase-3水平。结果:我们诱导获得的耐药胶质瘤细胞株U251/CP2对顺铂半数抑制浓度(IC50)较亲代U251增加了62.7倍(分别是1.2±0.4μg/ml和76.5±22.5μg/ml)。电镜和GFP-LC3荧光染色观察表明胶质瘤细胞呈现典型的自噬特征,表现为电镜下广泛的自噬性空泡的出现和GFP-LC3斑点状分布,且能够被自噬抑制剂3-MA和ERK抑制剂PD98059抑制。凋亡检测表明,经顺铂处理后,U251/CP2较U251凋亡率低,3-MA和PD98059能够显著增强顺铂对U251/CP2的凋亡诱导作用。Western blot检测表明,U251/CP2较U251具有显著上调的LC3和Beclin1水平,而Caspase-3水平较低。结论:U251胶质瘤细胞能够通过自噬作用保护细胞免受化疗药物顺铂的杀伤,从而免于发生细胞凋亡。