绿茶多酚对表皮HaCaT细胞光损伤的干预作用研究

目的:本文旨在观察没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)引起的表皮HaCaT细胞损伤,以及对细胞着色性干皮病蛋白A(XPA)和切除修复互补交叉蛋白1(ERCC1)蛋白表达的影响。方法:以30mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞,照光前后加入50g/mL EGCG进行干预,Western blot法检测细胞XPA和ERCC1蛋白的表达水平。结果:UVB照射后细胞内XPA和ERCC1蛋白表达水平逐渐增高,在照光后4h达到峰值,后逐渐恢复至接近正常值;加入EGCG干预可明显降低XPA和ERCC1蛋白的表达水平。结论:EGCG对紫外线光损伤的干预作用可能与调控细胞内XPA和ERCC1蛋白的表达有关。     

虾青素对HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨虾青素对长波紫外线（UVA）辐射诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：采用人角质形成细胞HaCat细胞构建体外模型,MTT法测定细胞活力,酶生化法测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—px）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：虾青素能提高受UVA辐射的HaCaT细胞的增殖活力,提高胞质SOD和GSH-px的活性,降低细胞内MDA的含量。结论：虾青素对受UVA辐射的HaCaT细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。     

UVB辐射后HaCaT细胞光产物的产生和清除及EGCG的干预作用

目的:环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)是细胞受紫外线损伤后产生的特征性光产物之一。本文观察UVB辐射后HaCaT细胞光产物CPDs的产生和清除没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechingallate,EGCG)的干预作用。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞并用EGCG干预处理,采用免疫组织化学法在照光后不同时间点检测CPDs的产生和清除。结果:细胞损伤程度随UVB辐射剂量加大而增大。30mJ/cm2UVB辐射后HaCaT细胞开始产生CPDs,0.5h左右达到高峰。同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24h基本清除CPDs。EGCG处理UVB辐射的细胞CPDs少于单纯照光组(P<0.05)。结论:细胞损伤程度随UVB辐射剂量增大而加重,UVB辐射后HaCaT细胞对CPDs的清除存在快速期和慢速期;EGCG可以降低UVB辐射所致的光产物水平。     

杜仲对UVA致HaCaT细胞光老化保护作用的实验研究

目的：研究杜仲不同提取部位抗UVA致HaCaT细胞光老化的作用,并初步探讨其作用机制。方法：杜仲乙醇提取物经大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,分别作用于HaCaT细胞光老化模型,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞培养液中LDH、MDA、SOD活力,确定并筛选杜仲抗皮肤光老化的作用及有效部位。结果：与模型组相比,浓度为1255μg/ml的50%乙醇大孔树脂洗脱部位能提高细胞活性（P〈0.05）,使培养液中LDH降低（P〈0.01）、SOD活力提高（P〈0.05）、MDA活力降低（P〈0.05）;浓度为125μg/ml的水洗脱部位使细胞培养液中LDH活力降低（P〈0.05）。结论：杜仲抗皮肤光老化作用的有效成分主要集中在50%乙醇大孔树脂洗脱部位,其作用机制可能与其能清除氧自由基、保护细胞膜免受损伤有关。     

阿魏酸对UVB导致人角质形成细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨阿魏酸是否能对中波紫外线（UVB）诱导的人角质形成细胞（HaCaT细胞）氧化损伤和凋亡起保护作用以及其可能的作用机制。方法：将HaCaT细胞分成空白组、阿魏酸纽、UVB照射组、UVB照射＋阿魏酸纽。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度;检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量变化。结果：UVB照射组的SOD、CAT、GSH-Px明显下降,MDA相应上升。阿魏酸处理的细胞UVB照射后其活性以及上清液中的SOD、GSH-Px、CAT活性相对于未加药UVB照射纽明显增加,MI）A相应下降。结论：阿魏酸可以减少UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制可能与增强抗氧化成分活性和减少氧自由基有关。     

萝卜硫素对HaCaT细胞的影响研究

目的：探讨西兰花提取物的活性成分萝卜硫素（SF）对永生化角质形成细胞株（HaCaT细胞）的影响作用,以初步了解SF对HaCaT细胞的安全性。方法：采用培养至亚融合状态的HaCaT细胞,分别加入不同浓度的SF干预处理,24h后以MTT法检测细胞的生长活性,进一步对筛选组以ELISE法测定细胞上清液中TNF-α的水平,以流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果：MTT法检测结果提示200、400、600 nmol/L浓度组的细胞生长出现抑制,P〈0.05,并呈浓度相关性。50、100、150nmol/L浓度组的细胞生长没有受到明显影响,P〉0.05;进一步对501、001、502、00nmol/L浓度组的细胞进行流式细胞术检测凋亡率,仅有200nmol/L组P〈0.05;以ELISE法测定50,1001,502,00nmol/L各组细胞上清液中TNF-α的水平,均无明显统计学差异,P〉0.05。结论：50,100,150nmol/L浓度的SF对HaCaT细胞生长没有明显影响,200nmol/L以上的浓度对细胞的生长开始出现抑制。     

咖啡因增强UVB辐射诱导的HaCaT细胞凋亡的研究

目的：观察咖啡因对中波紫外线（Ultraviolet B,UVB）辐射诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。方法：在DMEM中培养HaCaT细胞,将细胞分成空白对照组（A组）,1mM咖啡因处理组（B组）,5mM咖啡因处理组（C组）,UVB（20mJ/cm2）辐射组（D组）,UVB辐射（20mJ/cm2）＋1mM咖啡因处理组（E组）,UVB辐射（20mJ/cm2）＋5mM咖啡因处理组（F组）,Annexi n V/PI观察各组细胞凋亡比例,Westernblot检测各组细胞p21和BCL-2表达情况。结果：20mJ/cm2UVB能诱导HaCaT细胞凋亡增加（A组凋亡率5.43%,D组凋亡率20.67%）,而1mM和5mM咖啡因能进一步促进HaCaT细胞凋亡（E组凋亡率22.25%,F组凋亡率36.61%）,UVB抑制细胞p21和BCL-2蛋白表达,咖啡因能进一步抑制21和BCL-2蛋白表达。结论：UVB辐射能诱导HaCaT细胞凋亡,抑制p21和BCL-2蛋白表达,咖啡因则能进一步促进凋亡,抑制p21和BCL-2蛋白表达。     

一氧化氮对HaCaT细胞迁移功能的影响

目的 了解外源性NO对HaCaT细胞迁移功能的影响及其机制.方法 以硝普钠作为NO的供体,在HaCaT细胞培养液中加入0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0 μmol/L硝普钠,分别于划痕0 h(划痕即时)及划痕后6、12、24、48 h观察并计算细胞迁移率.根据该结果筛选出硝普钠最佳作用浓度及作用时间,以此为实验刺激条件,应用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变,采用蛋白质印迹法、PCR等方法检测实验组(加入10.0 μmol/L硝普钠培养24 h)及阴性对照组整合素β_1、RhoA、cdc42、Rac1蛋白及RhoA、cdc42、Rac1 mRNA表达情况.对各实验结果行单因素方差分析和重复测量的方差分析.结果 加入硝普钠处理后各浓度组细胞迁移率随划痕时间的延长而逐渐增加.加入10.0 μmoL/L的硝普钠划痕后6～48 h与划痕0 h比较,差异均有统计学意义(F=31.002,P值均小于0.05).激光共聚焦显微镜显示,阴性对照组细胞纤毛稀少,胞内应力纤维束纤细,而实验组纤毛明显增多,胞内应力性纤维束增粗.实验组整合素β_1蛋白表达水平明显低于阴性对照组(F=8.25,P=0.015);而RhoA的蛋白表达水平为0.92±0.04,高于阴性对照组的0.64±0.04(F=7.25,P<0.05),cdc42、Rac1蛋白表达也高于阴性对照组(F值分别为14.10、6.50,P值均小于0.05).实验组RhoA、cdc42、Rac1的mRNA水平均高于阴性对照组(F值分别为23.67、10.39、9.52,P值均小于0.05).结论 适宜浓度的外源性NO可促进HaCaT的增殖及迁移,提示其在皮肤创面修复中起重要作用.其机制可能与整合素β_1表达下降、细胞骨架的改变有关.     

牛磺酸对白蛋白诱导的鼠肾小管细胞凋亡的保护作用

白蛋白诱导肾小管细胞凋亡是蛋白尿导致肾小管间质损害的重要因素之一，因此，探索干预肾小管细胞凋亡的途径非常必要。已有研究发现牛磺酸对细胞损伤具有保护作用。本研究通过评价牛磺酸对白蛋白诱导的肾小管细胞凋亡作用的影响，探讨其信号传导机制。     

苯那普利对阿霉素肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

随着足细胞生物学的研究进展,足细胞已被认为是各种原发和继发性肾小球疾病起始与进展的关键。本研究使用大鼠阿霉素肾病模型,探讨苯那普利对足细胞损伤的保护作用。一、材料与方法1.实验动物模型及分组:清洁级SD雄性大鼠,体重190～210g,购自华中科技大学同济医学院。动物随机分为3组:肾病组12只、治疗组12只和对照组12只。肾病组和治疗组一次性尾静脉注射盐酸阿霉素7.5mg/kg。注射后第2天治疗组给予苯那普利10mg·kg-1·d-1灌胃。2.标本收集:各组大鼠于制模后4、7周收集24h尿液,并于第4、7周麻醉后,分离血清行血生化分析。迅速分离肾皮质,…     

中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的：探讨中波紫外线（UVB）对HaCaT细胞损伤的影响。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在30～60mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,细胞的增值活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论：UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

Protective effects of adipose-derived stem cells against UVB-induced skin pigmentation

Background: Hyperpigmentation, mainly following UV-irradiation, can cause major cosmetic concerns. Human adipose tissue-derived stem cells (ASCs) have been reported to serve as whitening agents through a paracrine effect. However, there have been few reports on the direct effects of ASCs on skin pigmentation following UVB-irradiation.

Methods: To evaluate the effect of ASCs on UVB-irradiated mouse skin, UVB-irradiation alone was applied to one side of the backs of mice (melanin-processing hairless mouse, HRM-2) as a control, and UVB-irradiation plus injection of ASCs was applied to the contralateral side. Skin pigmentation and histology were evaluated and the number of DOPA-positive melanocytes in the mouse skin was counted. The absolute value of ΔL* via a colorimeter was measured to evaluate the degree of skin pigmentation. The effects of ASCs on the melanogenic activities of mouse skin were examined by measuring the tyrosinase activity and the melanin contents in the epidermis of the mouse skin.

Results: Skin pigmentation was suppressed in the ASC-injected side. Moreover, the change in skin thickness following UVB irradiation was reduced in the ASC-injected side. The number of DOPA-positive melanocytes in the ASC-injected side (139?±?18 cells/mm²) was significantly lower than that in the control side (239?±?48 cells/mm²). The tyrosinase activity (67.4?±?9.8% of that of the control side) and melanin content (63.4?±?5.7% of that of the control side) of the ASC-injected side were also significantly reduced.

Conclusions: Collectively, these results suggest that ASCs injected subcutaneously into the backs of mice can attenuate tanning following UVB-irradiation, through suppression of tyrosinase activity.     

中波紫外线对人角质形成细胞MMP-9 mRNA的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）诱导的永生化人角质形成细胞中MMP-9 mRNA的表达,探讨其与UVB照射所致的细胞损伤的关系。方法：绘制细胞生长曲线,采用MTT方法测定UVB照射后细胞的增殖活性,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定UVB照射后HaCaT细胞中MMP-9 mRNA的表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活性受到抑制,MMP-9 mRNA表达增强;随UVB剂量增加,照射组的MMP-9 mRNA表达逐渐增多,与未照光组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：UVB照射可引起HaCaT细胞中MMP-9 mRNA表达显著增加,且与UVB照射剂量呈正相关,与光老化的发生有一定的关系。     

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p5 3mRNA和p53蛋白表达的影响.方法：以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p5 3mRNA和p5 3蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p5 3mRNA和p53蛋白的表达水平.结果：30mJ/cm^2的UVB照射后HaCaT细胞的p5 3mRNA和p5 3蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mR-NA和p53蛋白表达随剂量增加而增加.结论：HaCaT细胞p5 3mRNA和p5 3蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系.     

MTT法和水溶性四氮唑(WST-1)法检测中波紫外线照射HaCaT细胞后活力的比较

目的:观察中波紫外线照射后HaCaT细胞活力的变化并探讨水溶性四氮唑(WST-1)法检测的适用性.方法:将HaCaT细胞分为对照组(假照射组)、300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射后24h组(每组6个样本).600J/m2紫外线照射后4h组、8h组、1 2h组、24h组、48h组、72h组(每组6个样本).血球计数板计算HaCaT细胞数量.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和水溶性四氮唑(WST-1)法活性测定HaCaT细胞活性.结果:MTT法显示300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射HaCaT细胞24h后光密度(OD)值明显较0J/m2组低;WST-1法各组OD值明显比0J/m2组低.MTT法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞4h后OD值较0J/m2组低;600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法的OD值与细胞计数、MT法OD值呈正相关.结论:随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长,HaCaT细胞数量减少,细胞的活力下降,WST-1代谢活性亦降低,呈时间和剂量依赖性.HaCaT细胞可对WST-1进行代谢,适用于该细胞增殖研究.