应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术鉴定临床常见厌氧菌

目的：应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术对临床分离的厌氧菌进行鉴定,与传统Vitek32 ANI鉴定卡及16 S rRNA基因序列法鉴定进行比较,分析MALDI-TOF MS技术用于鉴定临床常见厌氧菌的可行性。方法收集从临床标本培养分离的厌氧菌56株,运用 MALDI-TOF MS 技术对其进行鉴定,同时运用 Vitke32 ANI 鉴定卡及16 S rRNA基因序列法分别进行鉴定,将三者的结果进行比较。结果56株厌氧菌中有41株采用 MALDI-TOF MS技术鉴定至种的水平（分值大于或等于2．0）,11株鉴定至属的水平（分值为1．7～2．0）,4株无可靠结果（分值小于1．7）。MALDI-TOF MS和16S rRNA基因序列法鉴定结果一致的占94．6％（53/56）,不一致的占5．6％（3/56）。MALDI-TOF MS与Vitke32 ANI 鉴定卡的鉴定结果一致的占80．4％（45/56）,不一致的占19．6％（11/56）。结论 MALDI-TOF MS与16S rRNA基因序列法鉴定的符合率高,可应用于临床常见厌氧菌的鉴定。     

用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行血清蛋白质组学分析中样品稳定性研究

目的 探索利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF Ms)技术,进行血清样品中蛋白质组学研究的稳定性和重复性.方法 采用德国布鲁克公司Microflex型号质谱仪,应用线性模式,采集范围800～10 000 m/z,以样品前处理(MB-wcx)试剂盒预处理样品,CLNPROT(TM)系统的FlexAnalysis和ClinproTools软件进行数据分析.结果 本研究是在方法学已经建立的基础上,对样品稳定性进行研究.分别对随机选取的2例肿瘤患者和1名健康人群血清样本进行的平行实验结果分析表明,在本实验条件下,所测样品的质荷比(即m/z比值)漂移在实验误差允许范围内,其变异系数(CV值)分别为12.7%、13.1%和18.8%,能够明确区分疾病与健康样本;同时扩大样本量对30名健康人进行验证,其整体峰型和特征性峰保持一致,平均CV值为25.5%,说明其稳定性和重复性完伞满足临床医学实验窒分析要求.结论 在已优化的实验条件下,利用生物质谱技术可获得稳定的血清多肽谱,具有潜在辅助诊断疾病价值.     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床病原菌鉴定中的应用

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)系统用于快速鉴定临床分离菌的可靠性和实用性。方法收集南京军区南京总医院2013年7~10月自临床标本分离的非重复细菌1 061株,分别使用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪系统进行鉴定,结果不一致的菌株采用16S r DNA测序验证。结果 1 061株临床分离菌中1 058株(99.7%)经MALDI-TOF MS系统正确鉴定到属水平,1 016株(95.8%)正确鉴定到种,其余3株(0.3%)未给出鉴定结果。5株鉴定结果不一致的菌株经16S r DNA测序确认,结果与MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact鉴定符合率分别为40.0%(2/5)和0(0/5)。结论 MALDI-TOF MS可以作为一个快速、准确和价廉的工具应用于临床分离菌的鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定布鲁菌1例

正布鲁菌病(布病,brucellosis)又称波浪热或马耳他热等,是由布鲁菌引起的人畜共患的烈性传染病,主要以牛、羊、猪为传染源。布鲁菌可通过皮肤、呼吸道、消化道进入人体引起感染,以长期发热、多汗、关节痛及全身乏力、疼痛为主要特征。该病以往多见于牧区,近年来散发于大中城市,以青壮年为主。我院近期从1例来自山西的反复发热的患儿血培     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物领域的应用进展

在临床微生物实验室,革兰染色、菌落形态、显微镜检查、选择培养基的生长特点、各种手工或自动的生化试验是细菌、酵母、真菌的主要鉴定方法。这些方法依赖细菌生产代谢过程,需要长时间的孵育,一般需要24～48h,不能满足临床对感     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定丝状真菌的影响因素分析

  目的  评估菌株培养条件、培养天数以及结果判定截断值(cut-off value, COV) 3种因素对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)鉴定丝状真菌能力的影响。  方法  将78株受试丝状真菌分别接种到沙堡弱葡萄糖琼脂(sabouraud dextrose agar, SDA)、土豆葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)两种培养基及28、35℃两种培养温度共4种组合的培养条件下进行培养, 并于培养第2、3、4、5天以及第7天对其进行MALDI-TOF MS分析, 根据鉴定率的差异筛选菌株MALDI-TOF MS鉴定用最佳培养条件和培养天数; 下调MALDI-TOF MS结果判定COV, 分析其对MALDI-TOF MS丝状真菌鉴定率的影响。  结果  受试菌株在SDA和PDA两种培养基间的MALDI-TOF MS鉴定率无显著性差异(χ²=0.467, P=0.792), 但28℃培养温度下的鉴定率高于35℃培养温度(χ²=7.195, P=0.027);培养第2、3天种水平(40.3%和34.3%)和属水平(44.8%和46.3%)鉴定率均较高; 将MALDI-TOF MS种水平判定COV由 > 2.0下调至 > 1.7后, 受试菌株种水平判定率显著提升(85.9%比32.1%, χ²=40.119, P < 0.01)且不增加错误鉴定率。  结论  丝状真菌以SDA或PDA培养基28℃培养2~3 d, 并以分值> 1.7作为种水平判定COV, 可有效提高MALDI-TOF MS对丝状真菌的鉴定能力。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴定革兰阴性杆菌的研究

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionisation time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）技术检测临床常见革兰阴性杆菌的临床应用价值。方法1665株革兰阴性杆菌经VITEK2Compact鉴定到属和种,采用MALDI—TOF—MS对1665株革兰阴性杆菌进行种属检测,并计算鉴定正确率。结果1665株菌包括27个菌属,73个菌种。主要革兰阴性杆菌菌属鉴定整体正确率为95．7％,菌种整体正确率为85．5％。其中菌属鉴定正确率最高的是布鲁菌属和沙门菌属,正确率均为100．0％;菌种鉴定正确率最高的为危险罗尔斯顿菌和摩氏摩根菌,正确率均为100．0％。结论MALDI—TOF—MS技术鉴定细菌快速、准确、方便,且成本低,适用于临床实验室的快速鉴定诊断。     

不同基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统对链球菌鉴定性能的比较

目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对链球菌属临床菌株的鉴定能力。方法收集2015-2019年同济大学附属东方医院临床分离的链球菌,16SrRNA基因测序确定细菌种类。采用直接涂抹法平行使用Autof MS1000型质谱仪、VITEK MS质谱鉴定系统及Bruker Biotyper系统对菌株进行质谱鉴定。结果134株链球菌属细菌中,3套质谱鉴定系统对无乳链球菌、化脓链球菌、解没食子酸链球菌、戈登链球菌及变异链球菌的准确鉴定率均为100%。Bruker Biotyper和Autof MS1000型质谱仪对21株停乳链球菌及14株星座链球菌未能鉴定到亚种,5株缓症链球菌鉴定为口腔链球菌,肺炎链球菌和咽峡炎链球菌各有1株鉴定错误;Autof MS1000型质谱仪鉴定链球菌种水平置信度高于Bruker Biotyper系统。VITEK MS质谱鉴定系统可鉴定停乳链球菌的部分亚种,但14株星座链球菌未能鉴定到亚种,7株缓症链球菌鉴定为缓症链球菌/口腔链球菌,2株咽峡炎链球菌分别鉴定为星座链球菌和肺炎链球菌。结论3套质谱鉴定系统对链球菌属中临床常见的无乳链球菌、化脓链球菌可准确鉴定、直接报告,但是对一些种类菌株鉴定结果有误或不能鉴别亚种,需要DNA序列分析或结合血清学或其他补充实验来准确鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱微生物鉴定系统性能验证方案的建立

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)在常规临床微生物鉴定中的性能验证方法,指导临床实验室规范微生物鉴定程序。方法选取标准菌株、质控菌株和临床菌株共115株,包含革兰阳/阴性球菌30株、革兰阳/阴性杆菌31株、真菌30株,厌氧菌、苛养菌各12株,所有菌株均经Vitek Compact鉴定和/或细菌16S r DNA、真菌ITS DNA测序分析验证。任意选择3种MALDI-TOF MS微生物鉴定系统厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱,采用检测系统推荐方法进行菌株鉴定,进行准确度验证试验。精密度验证:选取标准菌株和临床菌株10株,1位操作者使用3个检测系统对10株菌株分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d; 3位操作者使用3个检测系统对10株菌株每d分别进行质谱鉴定3次,连续鉴定3 d,从而验证鉴定结果的重复性。结果厦门质谱、布鲁克质谱、安图质谱对标准/质控菌株(除外厌氧菌)的鉴定符合率为100%;对临床菌株的属水平鉴定符合率为100%;对革兰阴/阳性杆菌的种水平鉴定符合率分别为100%、100%、96.77%;对革兰阳性球菌的种水平鉴定符合率分别为96.67%、96.67%、100%;对真菌的种水平鉴定符合率均为90%一致;对苛养菌的种水平鉴定符合率均为100%;对厌氧菌鉴定符合率为91.67%种水平一致。精密度验证试验结果重复性100%。结论 3种MALDI-TOF MS系统在革兰阳/阴性球菌、革兰阳/阴性杆菌、真菌、苛养菌鉴定的准确度和精密度符合要求,验证通过。本文建立的微生物鉴定质谱仪性能验证方案可满足综合性医院临床微生物实验室常规鉴定基本要求。     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

MALDI-TOF MS在临床常见菌快速鉴定中的应用研究

目的 评价MALDI-TOF MS在临床常见细菌快速鉴定中的应用.方法 选择浙江大学医学院附属第二医院2008年12月至2009年8月分离自血液、痰液、分泌物和尿液的临床常见细菌和浙江省疾病预防与控制中心收集的沙门菌共426株.包括革兰阳性球菌76株和革兰阴性杆菌350株.采用Vitek系统将细菌鉴定到种,血清凝集试验对沙门菌和志贺菌进行血清分型.PCR扩增91株细菌的16S rDNA基因并测序,所得核苷酸序列与GenBank中的数据库进行比对,确定细菌种类.用MALDI-TOF MS对所有细菌进行快速鉴定,比较不同鉴定方法 之间的符合情况.结果 除沙门菌和志贺菌外的所有革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的Vitek和MALDI-TOF MS两者的鉴定结果 完全符合.23株沙门菌中只有2株肠炎沙门菌鼠伤寒血清型的3种鉴定方法 结果 相符,另有1株伤寒沙门菌、3株甲型副伤寒沙门菌、1株乙型副伤寒沙门菌、1株肠炎沙门菌和1株肠炎沙门菌病牛血清型的血清凝集结果 与16s rDNA基因测序结果 相符.Vitek及血清凝集试验鉴定为福氏志贺菌的4株菌16s rDNA基因测序和MALDI-TOF MS的鉴定结果 均为大肠埃希菌.结论 MALDI-TOF MS可快速、准确地对细菌进行鉴定,具有良好的重复性,但对沙门菌和志贺菌效果不佳.     

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法检测高危型人乳头瘤病毒基因型及临床应用

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MALDI-TOF 质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

目的：探讨两种质谱仪 Biotyper MS 和 Vitek-MS 系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法收集沈阳军区总医院2012年3月至2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌149株（包括14个菌属和30个菌种）。同时采用两种 MALDI-TOF-MS 系统对上述菌株进行鉴定,结果与 Vitek2 compact 常规生化鉴定进行比较,对3种方法检测结果不一致菌株用16S rRNA 测序进行确认。结果在149株常见细菌中,Bruker Biotype 属和种的正确鉴定率分别为98％和96％,Vitek-MS 属和种的正确鉴定率分别为97％和95％。两者均无错误鉴定菌株。结论对该组常见细菌,两种质谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义（P ＞0．05）,均呈现出优异的鉴定水平,适合用于临床微生物的常规鉴定。     

Mycobacterium heckeshornense lung infection diagnosed by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS)

Identification of microorganisms by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been widely accepted. However, the significance of MALDI-TOF MS for identifying mycobacteria, particularly rare nontuberculous mycobacteria, has not been established. M. heckeshornense is one such bacteria, and distinguishing it from M. xenopi is difficult. The patient was a 40-year-old man with Beh?et's disease who had started treatment with prednisolone and azathioprine. A lung nodule in the right lower lobe was pointed out, and it increased in size 6 months later. Bronchoscopy was performed, and was culture positive for mycobacteria. It was identified as M. heckeshornense by MALDI-TOF MS with a score value of 1.928. Analysis of the 16S rRNA, rpoB, and hsp65 genes confirmed the result of MALDI-TOF MS. MALDI-TOF MS seems reliable for the diagnosis of M. heckeshornense infection.