O^6—甲基鸟嘌呤—DNA甲基转移酶研究进展

肿瘤耐药涉及多种耐药机制，其中Ｏ＾６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶是引起肿瘤细胞对亚硝脲等烷化剂类化疗药物耐受的的重要因素，本文仅就近年来有关该酶的最新研究进展作一综述。     

小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1表达的影响

目的 探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，Dnmt1）表达的影响。方法 应用免疫组织化学方法确定Dnmt1蛋白在小鼠输卵管的组织学定位；选取植入前胚胎的2细胞期、4细胞期和8细胞期作为3个观察点，采用实时逆转录-聚合酶链反应和Western印迹分别检测正常妊娠和假孕小鼠输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 Dnmt1蛋白主要表达于上皮层；妊娠组小鼠各期Dnmt1 mRNA表达水平均显著性低于同期假孕组（P〈0．05），妊娠组4细胞期Dnmt1蛋白表达水平显著性低于同期假孕组（P〈0．05）。结论 小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达存在调节作用，提示胚胎可能通过DNA甲基化间接调控输卵管上皮某些基因的表达，Dnmt1可能参与胚胎-母体交流的部分机制。     

DNA甲基转移酶在前列腺癌中的表达及其对体外细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在前列腺癌(PCa)组织及前列腺癌细胞系中的表达情况及其对体外前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法收集24例患者的前列腺组织样本,其中前列腺癌组织样本12例,良性前列腺增生组织样本12例。免疫组织化学染色检测DNMT1、DNMT3b的表达。通过Western blot及RT-qPCR检测前列腺癌细胞系(DU145、PC-3)及人正常前列腺上皮细胞系(RWPE-1)中DNMT1、DNMT3b的表达。采用siRNA分别下调DU145细胞系中DNMT1、DNMT3b表达,检测DU145细胞生物学行为的改变。结果 DNMT1、DNMT3b在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织(P0.05)。DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3细胞系中的表达高于RWPE-1细胞系(P0.05),且DNMT1、DNMT3b在DU145中的表达高于PC-3(P0.05)。下调DU145细胞中DNMT1、DNMT3b的表达,可显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,减弱细胞迁移及侵袭能力(P0.05),其中DNMT1抑制组效果最显著。结论 DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3b)在前列腺癌中的表达高于正常前列腺,其中DNMT1对细胞生物学行为影响最显著。     

DNA的甲基化修饰与DNA甲基转移酶

组织特异的DNA甲基化谱是哺乳动物基因组的显特征。DNA的甲基化修饰参与基因表达调控、发育调节、基因组印迹和X染色体灭活等诸多重要生物学过程。大多数印迹基因可以调节胚胎的生长和发育。印迹功能的紊乱将导致发育异常及死胎。基因组范围内的广泛的去甲基化及随后发生的重新甲基化,可能使胚胎消除其亲本特异的甲基化谱,从而进入政党发育程序。DNA甲基化异常与肿瘤等疾病有关。肿瘤细胞的总体甲基化水平比正常细胞低,但是伴有某些CpG岛甲基化程度增高。抑菌基因启动子的异常甲基化和癌基因的去甲基化均影响肿瘤发生发展过程。哺乳动物DNA甲基化谱的建立和维持需要维持DNA甲基化的甲基转移酶和DNA重新甲基转移酶。     

DNA的甲基化修饰与DNA甲基转移酶

组织特异的 DNA甲基化谱是哺乳动物基因组的显著特征。DNA的甲基化修饰参与基因表达调控、发育调节、基因组印迹和 X染色体灭活等诸多重要生物学过程。大多数印迹基因可以调节胚胎的生长和发育。印迹功能的紊乱将导致发育异常及死胎。基因组范围内的广泛的去甲基化及随后发生的重新甲基化 ,可能使胚胎消除其亲本特异的甲基化谱 ,从而进入正常发育程序。DNA甲基化异常与肿瘤等疾病有关。肿瘤细胞的总体甲基化水平比正常细胞低 ,但是伴有某些 Cp G岛甲基化程度增高。抑癌基因启动子的异常甲基化和癌基因的去甲基化均影响肿瘤发生发展过程。哺乳动物 DNA甲基化谱的建立和维持需要维持 DNA甲基化的甲基转移酶和 DNA重新甲基转移酶。     

DNA甲基转移酶1和组蛋白去乙酰化酶1在子宫内膜异位症在位内膜的表达

目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）在子宫内膜异位症患者子宫内膜中的表达及其两者在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法 选取子宫内膜异位症患者在位内膜18例, 无子宫内膜异位症的对照子宫内膜20例,应用免疫组织化学法测定DNMT1的分布,应用免疫印迹法检测内膜组织中DNMT1和HDAC1蛋白的表达。结果 免疫组织化学提示,DNMT1主要分布于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的胞核;子宫内膜异位症在位内膜中DNMT1的表达强度显著高于对照组子宫内膜（P<0.01）。免疫印迹发现,子宫内膜异位症在位内膜DNMT1和HDAC1蛋白的表达高于对照组子宫内膜, 差异有统计学意义（P<0.05）;且两者的表达呈正相关 （P<0.05）。结论 DNMT1和HDAC1在EMs患者的高表达可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用。     

急性重复低氧预适应小鼠海马组织DNA甲基转移酶表达的变化

目的:检测小鼠脑海马组织中三种DNA甲基转移酶在急性重复缺氧条件下的变化,探讨缺氧预适应过程中DNA甲基转移酶的变化在低氧神经保护中的作用。方法:昆明小鼠随机分成正常对照组(常氧组,H0)、低氧1次组(H1)或低氧4次(H4)组,实验后取海马组织,应用Real-time PCR技术、Western bolt技术和DNA甲基转移酶活性实验对三种DNA甲基转移酶的变化进行研究。结果:DNA甲基转移酶1的mRNA和蛋白质水平在三组之间无明显变化;DNA甲基转移酶3A和3B mRNA和蛋白质水平在三组之间有变化,DNA甲基转移酶3A和3B的mRNA在H4组中表达较H0组降低,差异有统计学意义(P<0.01),DNA甲基转移酶3A和3B的蛋白质变化与mRNA变化相似,H4组与H0组相比有所降低(P<0.05);DNA甲基转移酶活性在H4组较H0组降低。结论:DNA甲基转移酶的变化可能参与缺氧预适应小鼠获得脑保护。     

DNA甲基转移酶(DNMTs)SNP位点与肿瘤发病风险的相关性研究进展

单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism ,SNP)作为第三代遗传标记,分布广泛、数目多且相对稳定地存在于人类染色体上, 在肿瘤发病相关性的研究方面日益受到重视, 阐明其意义将有助于疾病的早期风险性评估,早期诊断,预防和治疗等。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(DNMTs)介导的一种重要的表遗传修饰,肿瘤细胞中表现为基因组整体水平的低甲基化和某些基因启动子区CpG岛的高甲基化。本文综述了DNMTs SNP与肿瘤相关性研究进展     

DNA甲基转移酶3B基因在早发性精神分裂症发生过程中的作用研究

目的 探讨DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)基因在早发性精神分裂症发生过程中的作用.方法 采用TaqMan等位基因分型技术分析279例早发性精神分裂症患者和395名健康对照者DNMT3B基因rs6119954位点与早发性精神分裂症的关联,及其与发病年龄的关系、并调查患者母亲怀孕早期的环境因素,进一步分析DNMT3B基因与环境因素的交互作用.结果 患者组与对照组间DNM73B基因rs6119954位点的基因型频率差异具有统计学意义(x2=12.27,P＜0.01),患者组rs6119954G等位基因频率显著高于对照组(x2=12.76,P＜0.01);携带rs6119954G等位基因患者发病年龄明显早于不携带该等位基因患者(P=0.026);未发现DNMT3B基因与环境因素间存在交互作用.结论 DNMT3B基因与早发性精神分裂症显著关联,rs6119954位点可能是导致发病年龄提前的重要因素.     

埃兹蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 通过检测埃兹蛋白在浸润性乳腺癌、乳腺导管内癌及正常乳腺组织中的表达,探究埃兹蛋白在乳腺癌组织中的表达的临床意义。方法 随机选取南昌大学第一附属医院40例浸润性乳腺癌患者及32例乳腺导管内癌患者,另外选择同期来我院健康体检者22例。通过免疫组化链霉亲和素-过氧化物酶法（S-P）法分别检测埃兹蛋白在22例正常乳腺组织、32例乳腺导管内癌组织和40例浸润性乳腺癌组织中的表达,参照病理结果进行分析。结果 埃兹蛋白在40例浸润性乳腺癌的阳性表达率为72.50%、在32例乳腺导管内癌的阳性表达率为40.63%、在正常乳腺组织中的阳性表达率13.64%,浸润性乳腺癌中埃兹蛋白的表达高于其他两种组织,差异具有统计学意义（P＜0.05）;埃兹蛋白在G3期乳腺癌组织中的表达高于在G1~G2期乳腺癌组织中的表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）;埃兹蛋白在淋巴结转移患者中的阳性表达率高于在无淋巴结转移的患者中的阳性表达率,差异统计学意义显著（P＜0.01）;埃兹蛋白在＜40岁的患者中的阳性表达率低于在年龄≥40岁的患者中的表达率,差异统计学意义显著（P＜0.01）;埃兹蛋白在PR阳性患者中的阳性表达率低于在PR阴性患者中的表达率,差异具有统计学意义（P＜0.05）;乳腺癌患者中埃兹蛋白的表达与组织学分级、腋窝淋巴结转移及年龄呈正相关（P＜0.05）,与PR呈负相关（P＜0.05）;埃兹蛋白在浸润性润腺癌中的表达与乳腺癌临床分期、脉管侵犯、肿瘤大小、患者月经状态以及Her-2、ER、Ki-67的表达无相关性（P＞0.05）。结论 埃兹蛋白在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达不同,对判断乳腺肿瘤性质具有重要参考意义;此外,埃兹蛋白能够帮助判断乳腺癌的转移潜能和预后,可能启发乳腺癌新的靶向治疗。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。     

ATM基因与乳腺癌

目前国内外针对共济失调毛细血管扩张症的致病基因ATM基因的研究不断增多，自从Swift等第一次报道了ATM杂合子患乳腺癌的风险增加后，作为乳腺癌危险因子ATM基因受到国内外学者的关注。ATM基因位于人类染色体的11q22–23，其蛋白主要参与DNA 的损伤识别和修复、细胞周期的调控。ATM基因作为抑癌基因在乳腺癌的发生发展中起重要的作用。可把研究ATM基因与ATM杂合子的乳腺癌患病风险的关系作为研究ATM与肿瘤发生发展关系的契入点，并最终为肿瘤的预防和治疗带来新的理论与方法。本文对ATM基因结构，功能，增加癌症易感性的机制及其与乳腺癌患病风险的关系作一概述。     

AKT-1在乳腺良恶性病变中的表达及其临床意义

目的通过研究AKT-1在乳腺癌、癌旁正常组织、乳腺纤维腺瘤中的表达情况,探讨其在乳腺癌评估预后及治疗方面的价值。方法采用免疫组化SP法,检测61例乳腺癌、20例癌旁正常组织、20例乳腺纤维腺瘤中AKT-1的表达情况。结果 AKT-1在乳腺癌旁正常组织中无表达,在纤维腺瘤中低表达(阳性率为15%),在乳腺癌组织中高表达(阳性率为49.2%),差异具有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌组中,AKT-1的阳性表达率与HER-2表达情况呈正相关;在原发灶大小不同、腋窝淋巴结有无转移和TNM分期不同组中,AKT-1的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);在不同年龄、不同雌孕激素受体情况和不同组织学类型中,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AKT-1可能是导致乳腺癌发生、发展的因素之一,在乳腺癌细胞向周围组织浸润,远处转移中起一定作用,对判断乳腺癌的恶性程度及预后有重要意义。     

MAGE-A家族与NY-ESO-1在乳腺癌中的表达及免疫治疗前景

以肿瘤特异性抗原为基础的肿瘤免疫治疗已经成为乳腺癌的新的治疗模式,癌睾丸抗原(CTA)是肿瘤免疫治疗研究的热点.MAGE-A家族与NY-ESO-1作为癌睾丸抗原家族的重要成员,在乳腺癌的诊断、治疗、预后等各个方面发挥重要作用.MAGE-A家族不同成员在乳腺癌组织中有不同程度的阳性表达,其表达机制可能和DNA甲基化和组蛋白去乙酰化相关.目前MAGE-A的肿瘤疫苗研究尚处于起步阶段,而且其应用也有一定的局限性.有人认为通过去甲基化药物激活MAGE-A表达,可以增加MAGE-A的免疫原性,增强免疫治疗疗效.NY-ESO-1在不同类型肿瘤组织中均有阳性表达,它也是判断肿瘤预后的重要指标.基因甲基化可能是调控NY-ESO-1在肿瘤中表达的机制.以NY-ESO-1为基础的多种疫苗已相继进入临床研究阶段.综上,MAGE-A和NY-ESO-1可成为现在以及将来免疫治疗的理想靶标.     

KiSS-1 Expression in Human Breast Cancer

The KiSS-1 gene encodes a 145 amino acid residue peptide that is further processed to a final peptide, metastin, a ligand to a G-coupled orphan receptor (OT7T175/AXOR12). KiSS-1 has been identified as a putative human metastasis suppressor gene in melanomas and in breast cancer cell lines. This study aimed to determine the expression and distribution of KiSS-1 and its receptor in human breast cancer tissues and to identify a possible link between expression levels and patient prognosis. Frozen sections from breast cancer primary tumours (matched tumour 124 and background 33) were immuno-stained with KiSS-1 antibody. RNA was reverse transcribed and analyzed by Q-PCR (standardized using β-actin, and normalized with cytokeratin-19 levels). Levels of expression of KiSS-1 were higher in tumour compared to background tissues (3124±1262 vs 2397±1181) and significantly increased in node positive tumours compared to node negative (3637±1719 vs 2653±1994, P = 0.02). KiSS-1 expression was also increased with increasing grade and TNM status. There were no such trends with the KiSS-1 receptor. Expression of KiSS-1 was higher in patients who had died from breast cancer than those who had remained healthy (4631±3024 vs 2280±1403) whereas expression of the receptor was reduced (480±162 vs 195±134). Immunohistochemical staining showed increased expression of KiSS-1 in tumour sections. Insertion of the KiSS-1 gene into the human breast cancer cell line MDA-MB-231, resulted in cells that were significantly more motile and invasive in behaviour, with reduced adhesion to matrix, using respective assays. In conclusion, KiSS-1 expression is increased in human breast cancer, particularly in patients with aggressive tumours and with mortality. Over-expression of KiSS-1 in breast cancer cells result in more aggressive phenotype. Together, it suggests that KiSS-1 plays a role beyond the initial metastasis repressor in this cancer type.     

探讨乳腺癌保留乳房术后放疗的临床经验及体会

目的：探究乳腺癌保留乳房术后放疗的临床疗效。方法本次研究选择对象共50例,均为2009年5月~2012年5月在我院进行全乳放疗的保留乳房手术后的乳腺癌患者,对其临床资料进行回顾性分析。结果随访发现,患者生存率为96.7%,病变复发率为5.0%;无严重放疗反应和并发症出现;乳房外观优良率为75.0%。结论乳腺癌保留乳房术后放疗的临床疗效与根治术相当,患者生存率高,病变复发率低,有利于乳房美观。     

乳腺癌合并肥胖症患者血浆瘦素水平与乳腺癌组织中瘦素受体mRNA的表达及临床病理的关系

检测乳腺癌合并肥胖症患者乳腺癌组织中瘦素受体(leptin receptors)mRNA的表达情况和血浆瘦素水平,并探讨二者之间及其与临床病理之间的关系.对124例单纯肥胖者,或乳腺癌合并肥胖者,或乳腺良性病变合并肥胖者同时采集病史、进行体格检查并留取血浆,测定其瘦素的水平.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测瘦素受体mRNA的表达.结果显示,乳腺癌合并肥胖组血浆瘦素水平显著高于乳腺良性病变合并肥胖组及单纯肥胖组(P＜0.05).瘦素长型受体[Lep-R(L)]mRNA及瘦素短型受体[Lep-R(S)]mRNA在乳腺癌合并肥胖组中的表达水平均明显高于乳腺良性病变合并肥胖组(P＜0.05).血浆瘦素水平与乳腺组织中Lep-R(L)mRNA及Lep-R(S)mRNA水平呈显著正相关.血浆瘦素和瘦素受体mRNA的表达与腋窝淋巴结转移、绝经、TNM分期及病理类型均无显著相关性(P＞0.05).结论:瘦素可能参与了乳腺癌的发生.     

长链非编码RNA LINC00993在不同分子亚型乳腺癌中的表达特点及与临床特征的关系研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)LINC00993在不同分子亚型乳腺癌中的表达特点及与临床特征的关系。方法收集解放军总医院和河北省张家口市怀来县医院2015年9月至2017年12月确诊的乳腺癌患者80例,其中Luminal A型、Luminal B型、HER2阳性型和三阴性乳腺癌各20例。采用Trizol试剂将手术切除下的肿瘤及癌旁组织(距离肿瘤边缘> 1cm)分别提取RNA,逆转录RNA为cDNA,经RT-qPCR法检测LINC00993表达水平。结果乳腺癌组织中LINC00993的表达水平显著低于癌旁组织(P<0. 05)。癌组织中LINC00993表达水平与淋巴结转移、TNM分期与肿瘤数量均呈线性关联(P<0.001)。此外,癌组织中LINC00993表达水平与ki67表达量呈负性相关((R^2=0.302,P<0.001)。在不同分子分型患者中,三阴性乳腺癌患者LINC00993表达水平显著低于其他三型(P<0.05),Luminal B型患者LINC00993表达水平显著低于Luminal A型和HER2阳性型(P<0.05),而Luminal A型和HER2阳性型患者癌组织中LINC00993表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。多项Logistic回归分析显示,癌组织中低LINC00993水平仍是乳腺癌的独立危险因素。结论 LINC00993在乳腺癌特别是三阴性乳腺癌和Luminal B型中表达显著下降,且其低表达在乳腺癌患者发生淋巴结转移、肿瘤增殖等中发挥潜在作用,有望成为乳腺癌患者个体化治疗提供新的依据。