成体小鼠脊髓实质神经干细胞的分离培养及其多能性的鉴定

目的从成年小鼠脊髓实质中分离培养并鉴定成体神经干细胞。方法采用无血清培养基及单细胞克隆技术，从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得大量具备单细胞克隆能力的细胞，经免疫荧光染色证实单克隆细胞表达Nestin抗原并在分化后表达各种特异性的神经细胞抗原。结果从成年小鼠脊髓实质中分离培养获得的具备连续克隆能力的细胞可表达神经干细胞的Nestin抗原，并且分化后表达神经元及胶质细胞的特异性抗原。结论成功地从成年小鼠的脊髓实质中分离出具备增殖分化能力的成体神经干细胞，为进一步利用其进行脊髓损伤治疗的研究提供了实验基础。     

重力对成体干细胞分化的影响

目的概述重力对成体干细胞分化影响的研究进展.资料来源与选择国内外本领域正式发表的研究论文和综述.资料引用引用文献20篇.资料综合重力对骨髓间质于细胞、造血干细胞和骨骼肌干细胞分化的影响.结论重力参与成体干细胞的分化,进一步丰富了干细胞分化调控理论,为干细胞定向诱导开辟一条新途径.     

兔MSCs移植对兔角膜缘干细胞形态、增殖、分化的影响

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对兔角膜缘干细胞形态、增殖、分化的影响。方法无菌条件下取兔骨髓,分离得到兔MSCs。取培养3代后MSCs消化后制成细胞悬液,接种于羊膜植片上,常规培养。建立兔角膜碱烧伤干细胞缺损模型4 w后,将18只新西兰兔随机分为空白组、MSCs移植组和模型组,每组6只。MSCs移植组和模型组分别用尼龙缝线将空白和带有兔MSCs的羊膜基质植片间断缝合固定于浅层巩膜上,空白组不做处理。术前、术后观察实验兔眼表形态,并进行评分。术后4 w处死动物,免疫组化检查细胞角蛋白AE5表达情况。结果筛选得到的兔MSCs细胞均一性达98.12%;术后MSCs移植组兔眼表形态综合评分显著降低,而模型组无显著变化,同期与模型组综合评分相比,均显著低于模型组(P<0.05);免疫组化检测结果显示,空白组和MSCs移植组AE5阳性表达率均为100.00%,显著高于模型组(P<0.05)。结论以羊膜基质为载体移植MSCs治疗角膜缘干细胞缺乏症,可增殖分化为角膜上皮细胞而发挥功能,疗效显著,可为其临床应用提供理论基础。     

成体心肌干细胞的研究进展

传统观点认为心脏是一个终末分化器官,然而随着成体心肌干细胞(CSCs)的发现,这种观点已受到广泛质疑.由于CSCs具有高度的自我更新能力和特异性心肌分化潜能,目前被认为是最有希望应用于缺血性心脏病及其他终末期心脏病替代治疗的干细胞类型.本文综述了目前关于人源CSCs、心外膜源细胞(EPDC)的研究概况,及其应用于心脏再生领域的治疗策略和研究中存在的问题.     

成体干细胞治疗160例的护理体会

为探讨成体干细胞对组织损伤再生修复的临床应用[1,2],我科自2008-03～2009-09对收治的160例难治性、疑难性患者进行了成体干细胞治疗,其中89例采用自体分选造血干细胞（AHSCT）治疗,71例采用脐带间充质干细胞（UCMSCs）治疗。现将160例患者成体干细胞的治疗护理体会,报告如下。     

成体神经干细胞在中枢神经系统疾病中的应用前景

神经干细胞由于具有多分化潜能、自我更新、持久性的特征，在临床医学具有广阔的应用前景，为目前一些难以根治的神经系统疾病带来了新的希望．成为近10多年来神经科学领域研究的热点。     

成体干细胞研究进展和临床应用前景

成体干细胞多向分化潜能，极大地冲击了传统有关干细胞分化的理论，成体干细胞的研究对揭示生命的本质和内在规律具有重要的意义，本文就成体干细胞概念的演变、多能分化性以及其他特征，临床应用前景和目前存在的问题做一简要概述。并指出应用成体干细胞治疗人类疾病具有广阔的应用前景。     

表皮干细胞及其与创面修复的研究进展

创面修复主要包括肉芽组织增生、创面再上皮化及瘢痕形成与创面愈合改建等过程。表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞 ,不仅是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞 ,而且与创面修复紧密相关 ,是皮肤及其附属器发生、修复、改建的基础[1 ] 。研究和应用干细胞的无限增殖和多向分化     

牙髓干细胞的研究进展

干细胞被定义为具有自我更新高度增殖和多向分化能力的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞由于伦理问题在很多国家被禁止研究,而成体干细胞的研究正受到越来越多的关注。1999年,《SCIENCE》杂志将有关干细胞的研究成果评定为世界十大科学进展榜首。干细胞可在多种组织中获得。目前,人类对骨髓间充质干细胞的研究较为成熟,其临床应用也取得一定成功,牙髓干细胞（Dental pulp stem cells,DPSCs）虽然还未在临床应用,但它已经成为全球口腔医学研究的热点之一。     

不同来源的间充质干细胞生物学特性差异研究进展

各种来源的问充质干细胞（MSC）除满足国际细胞治疗协会（ISCT）规定的要求外,在表面标记物、增殖、分化、迁移、生物学功能方面有其差异性,骨髓MSC研究最早,最为透彻,但其增殖效率低,易被污染等劣势限制了其应用;脂肪、脐血、脐带、羊水、胎盘来源的MSC取材方便,传代能力强,免疫反应低,被污染的概率较小,无伦理学限制等优点逐渐被人们重视,且利用不同MSC的优劣势将其应用于不同的领域。笔者通过查阅国内外相关文献,从细胞表面标记物,增殖、分化、迁移能力,以及功能方面进行分析总结,初步探讨了各种来源的间充质干细胞的优缺点．为今后临床选取合适弹摁的种子细晌提供帮助。     

红细胞生成素(EPO)对脑源性神经干细胞增殖与分化的调控作用

目的探讨红细胞生成素(EPO)对大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外增殖和分化的影响。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSCs,在NSCs增殖和分化过程中添加不同剂量EPO,以免疫细胞化学方法对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果与对照组相比,不同接种密度条件下的NSCs加入EPO后,增殖期表达Nestin的细胞增加2～4倍,分化期表达Nestin的细胞数明显减少;表达Tuj1和GFAP的细胞出现早,且Tuj1阳性细胞较对照组明显增加(P<0.05),加入antiEPO后Tuj1阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01);相同细胞接种密度下,添加不同剂量EPO后Tuj1阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论EPO可促进大鼠海马源NSCs的增殖,并使其呈剂量依赖性的向神经元分化。     

锶对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

目的观察锶(Sr)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖及成骨分化的影响并探索其最佳作用浓度。方法抽取健康成年志愿者骨髓6ml,体外分离、培养原代hMSCs,流式细胞术鉴定细胞表型。取第4代细胞进行实验,共分为5组,A组为空白对照,培养液中仅加入骨诱导剂(地塞米松10-8mol/L、抗坏血酸50μg/ml、β-甘油磷酸钠10mmol/L,B、C、D、E组培养液在加入骨诱导剂后分别加入3.75×10-3、3.75×10-2、3.75×10-1、3.75mmol/L的SrCl2。定期测定各组hMSCs的增殖情况(MTT法)、碱性磷酸酶(ALP)活性(酶标法)和骨钙素(OCN)含量(放免法),并观察细胞茜素红钙结节染色情况,分析各组钙结节数量及面积。结果随培养时间延长,各组细胞增殖和成骨分化均明显提高(P<0.01)。组间比较显示,第7天时的细胞增殖水平,第7、14天的ALP活性,第14、21天的OCN含量以及第21天的茜素红钙结节数量和面积测定结果,B-E组均明显优于A组(P<0.05);D、E组第7天时的细胞增殖水平及第14天的ALP活性均明显高于A、B、C组(P<0.05),而D组与E组比较无显著差异(P>0...     

血管内皮祖细胞对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞脂肪化的影响

 目的 探讨血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)对骨质疏松(OP)大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)自主脂肪化的影响。方法 选6周龄雌性 SD 大鼠,建立OP模型。体外分离、培养大鼠EPC、BMSC。分别取第3、6代BMSC及原代EPC,建立EPC/BMSC 间接共培养体系。实验分组:假手术组BMSC(BMSC sham)、OP组BMSC(BMSC ovx)、OP BMSC /EPC共培养组(BMSC ovx/EPC);MTT法检测细胞增殖情况;油红 O染色检测成脂分化情况,real- time PCR检测成脂分化标志物PPARγ2的mRNA表达水平。结果 BMSC ovx/EPC 组BMSC的增殖能力显著高于BMSC ovx组;BMSC ovx/EPC组自主脂肪细胞分化水平明显低于BMSC ovx组。结论 EPC可通过间接接触提高骨质疏松大鼠BMSC的增殖能力,并能有效抑制OP大鼠BMSC的自主脂肪化。     

人脐带间充质干细胞来源的外泌体促进小鼠成骨前体细胞增殖与分化

 

目的 提取人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSCs)来源的外泌体(hucMSC-exo),观察其对小鼠成骨前体细胞(mouse osteoblast progenitor cells, mOPCs)的作用。方法 体外分离培养hucMSCs,超速离心法收集外泌体;采用CCK8试剂盒检测不同浓度梯度hucMSC-exo对mOPCs增殖的影响,碱性磷酸酶活性检测以及茜素红染色观察不同浓度梯度hucMSC-exo对mOPCs矿化的影响。结果 成功提取hucMSCs,呈现旋涡状贴壁式生长,形态呈长梭形,具有多向诱导分化潜能。HucMSCs来源的外泌体呈圆形、椭圆形,大小在80 nm左右最多,阳性表达CD9,CD63。CCK8法结果显示5、10 μg/ml的hucMSC-exo可以显著地促进mOPCs在体外的增殖(P<0.05),碱性磷酸酶和茜素红染色结果发现5、10 μg/ml的hucMSC-exo组可以明显提高mOPCs碱性磷酸酶活性及钙化结节的形成,且10 μg/ml的外泌体浓度作用强于5 μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 成功提取了hucMSCs及hucMSC-exo,hucMSC-exo可以以浓度依赖的方式促进mOPCs的增殖与成骨分化。

     

富勒醇对基于悬滴培养的脂肪间充质干细胞成骨分化的影响

目的 探讨富勒醇对基于悬滴培养的大鼠脂肪间充质干细胞(rADSCs)向成骨细胞分化的影响.方法 将rADSCs通过悬滴培养3d形成大鼠脂肪间充质干细胞球,将细胞球用胰酶消化分散成单细胞,对获得的单细胞进行二维贴壁培养24h,然后更换为成骨诱导培养基培养,其中未添加富勒醇组为对照组,添加1.0μmol/L富勒醇组为实验组,诱导分化14d及21d后利用茜素红染色和实时定量PCR检测脂肪干细胞球来源的单细胞向成骨细胞分化的能力.结果 悬滴培养3d的rADSCs可形成大小均一的微球结构,经胰酶消化分散可获得细胞球来源的单细胞.与对照组相比,在成骨诱导培养基中添加1.0μmol/L富勒醇可使所获单细胞形成更多的矿化的钙结节,且相关成骨基因Runx2、OCN、Col I的表达增强.结论 富勒醇可以显著增强基于悬滴培养获得的rADSCs的成骨分化,有助于提高其成骨诱导的效率.     

人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内分化为肝细胞的研究

目的：观察人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)在受体大鼠体内的分化演变，研究人胚胎骨髓间充质干细胞在活体大鼠体内转化为人肝细胞的可行性。方法：将人胚胎MSC移植到肝损伤合并自身肝细胞再生抑制大鼠的脾脏。术后分时段取脾脏进行免疫组化染色，了解人白蛋白(ALB)、人角蛋白(CK8)、人CK18、人CK19的表达情况。结果：人胚胎MSC移植后10d大鼠脾脏的人CK8、人CK18、人CK19免疫组化染色可见阳性细胞；移植后15d大鼠脾脏组织内人ALB免疫组化染色可见阳性细胞。结论：人胚胎MSC能够在自身肝细胞再生抑制的肝损伤大鼠脾脏内分化为肝细胞。     

大鼠肝干细胞体外诱导分化的实验研究

目的 分离成体大鼠肝干细胞,观察体外培养条件下肝干细胞分化为肝细胞和胆管细胞的过程以及形态学变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,通过胶原酶Ⅳ分步消化分离和Percoll梯度离心纯化的方法得到肝干细胞,联合应用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF等生长因子诱导肝干细胞增殖并分化为肝实质细胞.结果 分离得到的肝干细胞呈卵圆型,直径是肝细胞的1/4～1/6,免疫荧光检测显示其表达c-kit和OV6两种干细胞抗原,PCR分析显示其表达CK19和白蛋白mRNA.体外诱导培养条件下细胞首先分化成大而圆的成熟肝细胞,继而出现分支样的胆管细胞,而且可见从卵圆形细胞到成熟肝细胞的中间变化过程.结论 新分离的肝干细胞同时表达c-kit、OV6、CK19和白蛋白多种抗原,诱导分化条件下可见从体积较小的卵圆形肝干细胞到体积大许多倍的肝细胞的形态学变化过程.     

骨性关节炎滑膜间充质干细胞分化能力研究

目的探讨从骨性关节炎(OA)滑膜组织分离、培养滑膜间充质干细胞(SDSCs)的可行性,并分析其细胞增殖能力及成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化能力。方法选取临床中因膝关节OA行关节置换的患者,提取手术中正常切除的滑膜组织,进行SMSCs的分离和培养。然后,对其进行成脂诱导、成骨诱导和成软骨诱导。结果来源于OA关节的滑膜组织,同样可以分离出SDSCs,进行传代培养,并向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化。结论 OA关节的滑膜组织中提取的SDSCs具有良好的增殖和多向分化能力。     

干细胞基础研究热点及应用难题

近年来干细胞研究的发展快速、深入,基础和临床应用概念也不断更新。本文就近年来干细胞研究出现的一些热点和新概念,如成体干细胞,干细胞生长的微环境,干细胞增生与分化信号传导通路,诱导多能干细胞,肿瘤干细胞等进行介绍和评述。对干细胞的临床应用进行回顾,探讨未来干细胞从研究到临床应用的可能性。同时,总结干细胞应用中的难题和障碍,如干细胞扩增、特异性分化诱导和伦理学等。虽然我国的干细胞基础研究和临床应用都取得了一定成绩,但由于目前尚无技术标准和相应的管理制度,所以在研究和应用中出现了标准不统一、结果判断欠科学等问题。通过总结既往的经验教训,提出了干细胞研究的科研忠诚和医者仁心的严肃命题,希望我国能够建立起针对干细胞基础研究和临床应用的规范化管理制度,使干细胞研究及由此衍生的干细胞临床应用展现出更加光明的前景。