过表达CCAAT增强子结合蛋白α对HepG2细胞代谢能力的影响

HepG2细胞系具有较强的稳定性、增殖力、并且能分泌多种血浆蛋白等优点,而它的某些合成代谢功能远不能满足生物人工肝的要求.     

过表达CCAAT增强子结合蛋白α对HepG2细胞代谢能力的影响

HepG2细胞系具有较强的稳定性、增殖力、并且能分泌多种血浆蛋白等优点,而它的某些合成代谢功能远不能满足生物人工肝的要求.     

CCAAT/增强子结合蛋白家族与肝脏疾病

CCAAT/增强子结合蛋白(CCAAT enhancer-bindingproteins,CCAAT/EBPs)家族最初由McKnight及其同事在大鼠肝脏中发现,因其能与启动子的CCAAT区及多种病毒增强子相结合得名,属于碱性区亮氨酸拉链(basic region/leucine zipper,bZIP)蛋白家族,他们结合并转录激活特定     

肺癌组织中CCAAT/增强子结合蛋白-α的表达变化及意义

目的 观察转录因子CCAAT/增强子结合蛋白-α（C/EBPα）在肺癌中的表达变化,并探讨其意义.方法 采用PV-9000免疫组织化学法,检测30例肺癌患者肺癌组织及其正常肺组织中C/EBPα的表达水平.结果 C/EBPα在肺癌组织中的表达较正常肺组织表达下调（χ^2=28.71,P＜0.05）.C/EBPα表达与肿瘤大小和肿瘤分化程度有关（P＜0.05）.C/EBPα表达是肺癌患者5年总体生存率的独立预后影响因素,低表达患者平均生存期明显短于高表达患者.结论 C/EBPα在肺癌组织中低表达,与肺癌的大小、分化程度关系密切,可作为评估肺癌患者预后的有价值指标.     

CCAAT/增强子结合蛋白δ通过调控巨噬细胞向M1型极化抑制肝癌侵袭转移

目的:探讨CCAAT/增强子结合蛋白δ（CEBPD）对巨噬细胞极化的调控及通过巨噬细胞对肝癌细胞侵袭转移、凋亡的影响。方法:用慢病毒转染技术构建敲减CEBPD（shCEBPD）及阴性对照shNC的THP-1稳定转染细胞。用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）将转染后的THP-1细胞诱导为巨噬细胞,脂多糖（LPS）...     

敲减CCAAT/增强子结合蛋白α通过增加O-GlcNAc糖基化水平促进肝癌细胞体外增殖*

目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）在肝癌细胞增殖中的作用及其机制。方法 利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型。采用qRT-PCR和Western blot分别检测C/EBPα mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8检测敲减C/EBPα后对Hep3B细胞增殖的影响,采用在正常高葡萄糖（NG,4.5 g/L）和低葡萄糖（LG,1 g/L）条件下培养细胞的增殖变化,采用Western blot法检测不同葡萄糖浓度条件下在C/EBPα敲减细胞和对照细胞乙酰葡糖胺转移酶（OGT）、乙酰葡糖胺水解酶（OGA）和整个O-GlcNAc糖基化水平。结果 靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞后,C/EBPα mRNA水平下调了（7.5±2.3）倍（P<0.05）,蛋白表达水平下调了（8.8±0.25）倍（P<0.001）,提示C/EBPα敲减细胞系构建成功;敲减C/EBPα后明显促进肝癌细胞的体外增殖;在低葡萄糖条件下刺激48 h和72 h,敲减C/EBPα分别促进细胞增殖15.4%（P<0.05）和25.0%（P<0.01）;敲减C/EBPα后细胞OGA蛋白表达水平在正常高糖和低糖刺激24 h和48 h时分别下调了70.1% （P<0.01）、51.4%（P<0.05）和61.2%（P<0.05）,整体O-GlcNAc糖基化表达水平上调,在低糖刺激48 h时升高80.6%。结论 敲减转录因子C/EBPα可以提高细胞整体O-GlcNAc糖基化水平,从而促进肝癌细胞的体外增殖。     

噪声应激对大鼠心肌葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响与高血压及心肌重构的关系

目的 研究内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在噪声应激环境高血压大鼠模型心肌中的表达,并探讨GRP78和CHOP变化与高血压及其心肌重构的关系.方法 将成年雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠40只随机分为两组:噪声组(采用噪声环境建立高血压模型)和...     

过表达胰岛素增强子结合蛋白1对HIT-T15细胞增殖的影响

建立稳定表达pcDNA3.1-ISL1(胰岛素增强子结合蛋白1)质粒的HIT-T15细胞系并探讨对其增殖的影响.MTT及平板克隆实验检测结果表明转染pcDNA3.1-ISL1的细胞增殖明显加快,细胞数明显增多;流式细胞仪检测结果表明,转染pcDNA3.1-ISL1的细胞,在细胞周期中G0/G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞明显增多.ISL1能明显促进HIT-T15细胞增殖,其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关.     

乙型肝炎病毒X蛋白对HepG2细胞羧末端结合蛋白反应蛋白表达的影响

目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对博莱霉素诱导HepG2细胞DNA双链断裂(DSB)损伤修复关键因子羧末端结合蛋白反应蛋白(CtIp)的影响.方法 建立稳定表达HBx的HepG2肝癌细胞株(HepG2-HBx)及空质粒对照细胞株(HepG2-vec).用博莱霉素诱导细胞DSB损伤后,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,用实时定量PCR及Western blot检测CtIP的mRNA与蛋白表达水平,并用激光共聚焦显微镜观察CtIp蛋白在细胞内的定位情况.多组数据采用单因素方差分析和SNK-q检验;两组数据间比较用t检验.结果 经检测转染HBx基因的HepG2细胞(HepG2-HBx)能稳定表达HBx.博莱霉素处理后,HepG2-HBx细胞与HepG2-vec细胞的凋亡比例分别为16.90%±0.89%和15.30%±0.86%,差异无统计学意义(q=2.074,P＞0.05),但死亡细胞比例分别为8.71%±0.74%和4.90%±0.46%,差异有统计学意义(q=7.126,P＜0.01) ;同时两种细胞株都出现了细胞周期G2/M期阻滞,差异有统计学意义(F=11.401,P＜0.05).HBx使CtIP蛋白表达水平和mRNA表达水平均下调,HepG2-HBx细胞与HepG2-vec细胞CtIp蛋白的相对表达量分别为0.66±0.04、0.73±0.05,差异有统计学意义(t=2.314,P＜0.05); CtIP mRNA相对表达量分别为1.00±0.06、1.23±0.08,差异有统计学意义(t=2.732,P＜0.05).同时观察到CtIP蛋白主要在细胞胞核内表达.结论 HBx能干扰肿瘤抑制蛋白CtIp的表达,可能影响细胞DSB损伤的修复.     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激通路相关分子葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 探讨AT1受体自身抗体(AT1-AA)对DN大鼠肾脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响. 方法 制备DN大鼠模型,ELISA检测血清AT1-AA,根据ELISA结果随机选择AT1-AA阳性和阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时设立正常对照组(NC,n=6).电镜观察肾脏超微结构变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;RT-PCR测定大鼠肾组织GRP78和CHOP mRNA水平;Western blot分析肾组织中GRP78和CHOP蛋白的表达量. 结果 DN组肾脏细胞凋亡率较NC组升高,其中,AT1-AA阳性大鼠凋亡率高于AT1-AA阴性大鼠[(20.05±1.71)％vs(13.24±4.93)％](P＜0.01).与NC组相比,DN组肾组织GRP78、CHOP蛋白和mRNA水平均上调;进一步比较发现,AT1-AA阳性DN大鼠GRP78,CHOP蛋白及mRNA水平升高较AT1-AA阴性DN大鼠更明显. 结论 AT1-AA可能通过诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并经ERS相关的CHOP凋亡信号通路而促进肾脏细胞凋亡,加重肾脏损害.     

CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析

目的:探讨基因转录水平CCAAT增强子结合蛋白(CEBPs)及其调节基因在肝再生(LR)中的作用.方法:将与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化的大鼠同源基因.用Rat Genome 230 2.0芯片检测他们在大鼠再生肝中的表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因.结果:27个基因与肝再生相关,其中11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍.肝再生启动[部分肝切除(PH)后0.5-4 h]、G_0/G_1过渡(PH后4-6 h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段起始表达的基因数分别为18,3,8和1;基因的总表达次数分别为18,11,25和16.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.他们共表达上调126次,下调76次.表明肝再生中表达上调基因多于表达下调基因.结论:CEBPs及其调节的基因与肝再生中细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等密切相关.     

Induction of CCAAT/enhancer binding protein-delta by cytokinins, but not by retinoic acid, during granulocytic differentiation of human myeloid leukaemia cells

Cytokinins, purine derivatives that act as hormones to control many processes in plants, are very effective at inducing the granulocytic differentiation of human myeloid leukaemia cells. Isopentenyladenine (IPA), a potent cytokinin, significantly induced the expression of CCAAT/enhancer-binding protein (C/EBP)delta, but not C/EBP alpha protein, whereas all-trans retinoic acid, a well-known inducer of granulocytic differentiation, induced C/EBP alpha but not C/EBP delta protein. Antisense oligonucleotide for C/EBP delta, but not C/EBP alpha or C/EBP beta, effectively suppressed IPA-induced differentiation, suggesting that the expression of C/EBP delta protein is necessary for cytokinin-induced differentiation. Although C/EBP alpha is known to be crucial for granulocytic differentiation, the function of C/EBP delta has not been well documented in the regulation of haematopoiesis. The role of C/EBP delta in the granulocytic differentiation of myeloid leukaemia cells is discussed.     

乙型肝炎病毒/P22蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

目的研究HBV／P22蛋白对肿瘤坏死因子（TNF）α诱导的HepG2细胞凋亡的影响。方法用放线菌素D和TNFo【分别诱导表达HBV／P22蛋白的HepG2细胞（实验组）、表达空载体的HepG2细胞（阴性对照组）和HepG2细胞（空白对照组）凋亡，雅培试剂检测细胞上清液中HBeAg的表达，Westernblot及免疫细胞化学法检测HBV／P22蛋白表达，流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。体内实验：将前述三种细胞分别注射入裸鼠皮下，放线菌素D、TNF仅注射瘤体后，免疫组织化学法检测组织HBV／P22蛋白的表达，TUNEL法检测组织细胞凋亡率。结果实验组细胞培养上清液中HBeAg表达阳性，两对照组阴性；Westernblot及免疫细胞化学法检测均显示实验组细胞有HBV／P22蛋白表达，两对照组均为阴性；流式细胞仪和TUNEL结果均显示实验组细胞凋亡率明显低于两对照组（P〈0．05）。体内实验：实验组瘤体组织免疫组织化学检测结果显示HBV／P22蛋白表达阳性，TUNEL检测结果显示接种表达HBV／P22蛋白的HepG2细胞裸鼠瘤组织细胞凋亡率明显低于两对照组（P〈0．05）。结论HBV／P22蛋白在体内外均可抑制TNFα诱导的HepG2细胞凋亡。     

脂筏介导的内源性大麻素对HepG2细胞的作用及其机制

目的 研究内源性大麻素(AEA)以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞株HepG2的作用机制,探讨AEA在肝癌发生和发展中的作用.方法 免疫荧光检测脂肪酸水解酶、大麻素受体(CB)1和CB2在胎肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2中的定位.以不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精(MCD)处理,分为AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA40 μmol/L组,MCD 10 mmol/L+AEA 10 μmol/L组、MCD 10 mmol/L+AEA 20 μmol/L组和MCD 10 mmol/L+AEA 40 μmol/L组,分别孵育L02细胞和HepG2细胞,流式细胞术碘化丙啶单染法检测细胞的坏死率.Western Blot检测L02和HepG2细胞中脂肪酸水解酶、CB1和CB2的蛋白表达及其下游信号通路磷酸化P38促分裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(P-JNK)的表达变化.组间均数的比较采用独立样本t检验或单因素方差分析.结果 AEA可有效地导致肝癌细胞坏死,以浓度为AEA 40 μmol/L组达到最大效应,F=108.594,P<0.05,差异有统计学意义.MCD 10mmol/L预孵育后的HepG2细胞坏死率在AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组和AEA 40 μmol/L组分别为7.83%±2.13%,16.30%±0.94%,43.09%±5.10%,MCD处理前AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA 40 μmol/L组分别为13.64%±1.69%、20.28%±0.91%,52.71%±4.29%,处理前后比较,t值分别为3.702,5.274和3.503,P值均<0.05,差异均有统计学意义.同时,AEA能激活HepG2细胞中P38 MAPK和JNK,以AEA 40 μmol/L组作用明显,F值分别为11.908和26.054,P值均<0.05,差异均有统计学意义,MCD作用前p-P38 MAPK和p-JNK/β-肌动蛋白灰度值分别为1.63±0.06,1.60±0.31,MCD作用后p-P38 MAPK/β-肌动蛋白、p-JNK灰度值分别为1.14±0.01、1.17±0.29,作用前后相比,t值分别为2.801和12.829,P值均<0.05,差异均有统计学意义.结论 AEA可以有效地导致HepG2细胞坏死而对L02细胞无影响,AEA激活了HepG2细胞p-P38 MAPK和P-JNK相关信号传导途径,且此过程与脂筏有关.     

离散因子/肝细胞生长因子cDNA转染对肝癌SMMC7721细胞生长和转移的影响

目的 通过离散因子／肝细胞生长因子（scatter factor/Hepatocyte factor,SF/HGF）cDNA转染肝癌SMMC7721细胞来探讨SF／HGF对肝癌生长和转移的影响。方法 用脂质体法进行基因转染,以ELISA和western blot检测SF／HGF及其受体c-met的表达,通过生长曲线、划良实验比较转染前后细胞的增长状况及细胞的运动能力。以转染前后细胞分别接种裸鼠,观察移植的生长及转移情况。结果 转染后细胞表达SF／HGF的量为694pg/ml,其受体c-met量未见明显变化;转染后细胞增殖明显加快,运动能力增强,并伴明显的形态学变化。初步动物实验显示转染后细胞生长较快,瘤组织中有瘤栓形成,并在肺内发现转移灶。结论 SF／HGF在肝癌细胞中的高表达能促进肝癌细胞生长、侵袭及转移。     

NS-398对HepG2细胞的放射增敏作用及其机制

有研究显示环氧合酶-2(COX-2)在许多肿瘤中高表达,推测与肿瘤的发生、发展、转移密切相关.研究还发现抑制COX-2的表达和(或)对抗COX-2的活性可以阻滞COX-2的促癌作用[1],提示COX-2可能成为肿瘤诊治的一个新靶点.本研究采用COX-2选择性抑制剂NS-398处理人肝癌细胞株HepG2细胞,旨在探讨其对肝癌放射敏感性的影响及其可能作用机制.