痰标本检测p53基因突变及其在肺癌早期临床诊断中的意义

目的　评价痰标本检测p53基因点突变方法及其作为肺癌早期临床诊断监测指标的真实性和可靠性。方法　用聚合酶链反应（PCR）-单链多肽性（SSCP）-银染法检测54例原发性肺癌患者和114例良性肺疾病患者痰标本中p53基因第5～8外显子的点突变,同时进行痰涂片细胞学检查。结果　p53突变在肺癌组检出率为55.56%(30/54),非肺癌组检出率为1.75%(2/114),P<0.001。痰标本检测p53基因突变作为肺癌临床诊断监测指标的灵敏性为55.56%,特异性为98.25%,阳性似然比为31.75。肺癌组p53阳性检出率（55.56%）与痰涂片瘤细胞阳性检出率（35.19%）比较,差异有显著性（P＜0.05）,关联性有极显著意义（P＜0.01）。肺癌组p53检出率与性别、吸烟指数、病理分型、疾病分期均无明显关系,但与年龄有密切关系,高龄患者（≥60岁）检出率高（P=0.02）。结论　PCR-SSCP-银染法检测痰标本p53突变可以在可疑肺癌患者（如吸烟并慢性肺疾患者）中作为一项随访监测指标,并将有助于肺癌的早期临床诊断。     

变性高压液相色谱法分析肺癌患者痰标本Rb2/p130、p53基因突变

目的 探讨变性高压液相色谱(DHPLC)法分析肺癌患者痰标本Rb2／p130和p53突变及其作为分子诊断标记的可行性。方法 DHPLC法分析47例患者痰标本[35例肺癌(男22例,女13例,年龄16～81岁;其中腺癌17例,鳞癌12例,小细胞癌4例,肺泡癌1例,腺鳞癌1例),12例对照(男7例,女5例,年龄38～68岁;其中结核1例,肺炎1例,支气管扩张症2例,肺泡蛋白沉积症1例,结节病1例,多发性软骨炎1例,慢性阻塞性肺疾病5例)]Rb2／p130基因Exon19～22和p53基因Exon5～9突变。结果 肺癌患者Rb2／p130突变检出率为22．86％(8／35),p53突变检出率为28．57％(10／35),对照者均未检出1例(P=0．049,P=0．046)。作为肺癌诊断分子标记,Rb2／p130特异度100％,灵敏度22．86％;p53特异度100％,灵敏度28．57％;联合检测Rb2／p130和p53特异度100％,灵敏度51．43％。结论 联合分析痰标本Rb2／p130和p53基因突变可提高诊断的灵敏度。     

肺活检和支气管肺泡灌洗标本p53、K-ras和p16基因检测在肺癌诊断中的意义

目的 探讨肺活检和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本p53、K-ras和p16基因检测对肺癌诊断的意义。方法 应用多聚合酶链反应(PCR)一单链构象多肽性(SSCP)—银染法和多重PCR分析，检测60例肺癌患者和18例良性肺疾病患者支气管肺活检组织和BALF标本p53基因和k-ras基因突变及p16基因变异(突变 缺失)状况。结果 肺癌组支气管肺活检标本中p53基因和k-ras基因突变、p16基因变异及三基因联合检测阳性率分别是60％、33．3％、41．7％和81．3％；相应的BALF标本阳性率为43．3％、33．3％、38．3％和73．3％。两种标本相应基因异常检出率比较差异无显著性(P值均＞0．05)。良性肺疾病组仅活检标本检出p53和K-ras基因突变各1例，而BALF标本良性疾病组三种基因异常的检出率均为0。良恶性疾病组比较差异有显著性(P＜0．05)。肺癌组BALF标本不论单基因检测还是联合检测异常率均高于癌细胞的检出率(P＜0.05)。BALF标本细胞学联合三种基因异常检测可将诊断率从单纯细胞学的16．6％提高到81．7％。结论 BALF标本基因检测可提高纤支镜检查对肺癌的诊断率。     

聚合酶链反应－单链构象多态性－银染方法检测肺癌患者支气管活检标本的p53基因突变

为了从基因水平进行肺癌诊断，我们用聚合酶链反应－单链构象多态性－银染方法，检测了肺癌患者支气管活检标本的ｐ５３基因突变。２５例病理诊断为肺癌的标本中检出了１５例ｐ５３基因外显子６、７和８的突变，阳性率为６０％。其中１０例小细胞肺癌检出了７例突变，１５例非小细胞肺癌检出了８例突变。这些与国外从手术肺癌标本用测序方法检测的ｐ５３基因突变率相符。临床资料分析认为，ｐ５３基因突变与年龄、性别、吸烟以及诊断时临床分期均无统计学关系     

非小细胞肺癌患者痰中p53和K-ras检测的意义

目的　研究 p53和 K- ras基因在非小细胞肺癌患者痰中突变率及其意义。方法　研究组为各期非小细胞肺癌患者 ,其中 期 8例 , 期 1 2例 , 期 1 3例 , 期 9例 ;鳞癌 2 0例 ,腺癌 2 2例。对照组慢支、肺结核等良性病变患者 1 3例。两组患者均留取痰标本 ,采用 PCR- SSCP方法分别检测 p53和 K- ras基因 5- 8外显子和 K- ras1 2外显子突变 ,统计发生突变与未发生突变者例数 ,χ2 检验分析结果。结果　研究组和对照组 p53基因突变率分别为 40 .4%和 1 5.4% (P<0 .0 5)。不同分型和分期的患者 p53和 K- ras基因突变均无显著性差异 ,吸烟与未吸烟、化疗与未化疗患者 p53和 K- ras基因突变无显著性差异。研究组 p53和 K- ras基因突变率明显高于对照组 ;研究组 p53和 K- ras基因同时突变率显著高于对照组。结论　p53和 K- ras基因突变联合检测诊断肺癌特异度高。     

痰液中survivin、p53蛋白检测对肺癌的诊断价值

目的 探讨检测痰液中survivin、p53蛋白在肺癌诊断中的应用价值。方法 采用改良Saccomanno法收集40例肺癌患者、11例肺良性病变者和9名健康者痰液，用流式细胞技术检测痰液中survivin、p53蛋白的表达水平。结果 ①肺癌患者组痰液survivin、p53蛋白的表达量显著高于肺良性病变组和健康对照组（P〈0．05）；肺良性病变组和健康对照组痰液间无显著性差异（P〉0．05）；②痰液中p53蛋白的表达与吸烟指数有关。③痰液中survivin的表达与p53相关（r=0．575，P〈0．01）。结论 ①survivin、p53蛋白表达增高在肺癌的发生中起着重要作用。②痰或诱导痰中survivin、p53蛋白检测有可能为肺癌的诊断提供一个新的无创、安全的辅助方法。     

肺癌癌组织标本中微卫星DNA检测及临床意义

为研究肺癌癌组织标本中微卫星DNA改变及其对肺癌的诊断价值，采用聚合酶链反应（PCR）－银染法，对43例原发性肺癌（观察组）及10例良性肺疾病患者（对照组）纤支镜活检标本的3个微卫星位点进行了检测。结果观察组微卫星不稳定（MSI）发生率47％，杂合性丢失阳性率（LOH）30％，MSI加LOH阳性率为63％；对照组未发现微卫星DNA改变。提示肺癌组织微卫星DNA检测诊断肺癌有一定价值。     

肺癌组织p53基因突变与肿瘤耐药基因表达的相关性及其临床意义

目的探讨p53基因突变与肿瘤耐药基因表达状况及肺癌耐药的关系。方法应用免疫组织化学法检测66例肺癌及其癌旁组织的突变型P53蛋白及耐药相关蛋白的表达水平。其中31例肺癌及其癌旁组织应用聚合酶链测定单链构象多态性(PCRSSCP)银染法及逆转录聚合酶链测定(RTPCR)法检测p53基因第5～8外显子突变情况及各种耐药基因的mRNA表达水平;12例应用三磷酸腺苷肿瘤化疗敏感实验(ATPTCA)检测肺癌细胞对诺维本、卡铂、依托泊苷、表柔比星、5氟尿嘧啶、博莱霉素的敏感性。结果突变型P53蛋白与P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、谷胱甘肽S转移酶π(GSTπ)的表达状况存在着相关性(r分别为047、033、044,P均<005);ATPTCA结果显示突变型P53蛋白的表达状况及其与Pgp、MRP的共表达均和诺维本及卡铂的耐药相关(P均<005)。结论肺癌组织耐药相关蛋白的表达与p53基因突变有关,突变型P53蛋白的检出可以预示内源性耐药的存在,恢复野生型P53蛋白的功能可能有助于逆转耐药。     

慢性淋巴细胞白血病患者外周血p53基因突变观察

目的观察慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中p53基因突变情况,并探讨其临床意义。方法采用PCR联合测序技术检测80例CLL患者及10例健康体检者外周血中的p53基因,CLL患者中25例应用FC方案(氟达拉滨25 mg/m2,环磷酰胺250 mg/m2,第1～3天静滴)化疗,28 d为1个疗程,治疗2～6个疗程。结果 80例CLL患者中12例(15.0%)检测到p53基因突变,其中错义突变11例、无义突变1例,未检测到插入和缺失;突变位点均发生在外显子(exon)5～9,其中发生在exon 5 2例、exon 6 3例、exon 7 1例、exon 8 5例、exon 9 1例,exon2～4、exon 10、exon 11未检测到突变。健康体检者中均未检测到p53基因突变。二者p53基因突变率比较,P<0.05。p53基因突变与Binet分期、p53基因缺失、IgVH突变有关(P均<0.05)。80例CLL患者中25例化疗后CR5例、PR 11例,总反应率(OR)为64.0%;p53基因突变者OR为14.3%,低于p53基因无突变者的83.3%(P<0.05)。结论 CLL患者外周血中存在p53基因突变,其可作为预后判定的指标。     

p53基因突变及p53,APC基因缺失与胃癌关系的研究

为明确ｐ５３基因突变，缺失，ＡＰＣ基因缺失在胃癌发病机制中的作用，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对抑癌基因ｐ５３第４，５，６，７，８外显子，第６内含子在８７例胃癌及癌前病变中的突变规律以及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对ｐ５３基因第４外显子，第６内含子，ＡＰＣ基因在２５对胃癌及癌旁组织的杂合缺失规律进行了探讨，结果发同，ｐ５３突变率在肠化，不典型增生，胃癌分别为３７．５％（３／８），４２．１％（８／１９），５３．     

p16、p53、p21基因对肺癌细胞增殖的影响

目的 观察肿瘤抑制基因ｐ１６,ｐ５３及细胞周期信赖激酶抑制物ｐ２１基因单独或联合应用时对肺癌细胞增殖的影响。方法 应用十八酰基胺阳离子脂质体介导ｐ１６,ｐ５３,ｐ２１基因单独或共转染到非小细胞肺癌细胞系Ａ５４９和小细胞肺癌细胞系ＳＨ７７,观察转染后１,３,５日该细胞增殖的活力。采用四甲基偶氮唑 盐微量酶反应比色法（ＭＴＴ法）测定吸光度（Ａ）,以检测细胞增殖活力,结果 Ａ５４９细胞系：Ａ均值分别为：     

非小细胞肺癌患者外周血细胞中p53基因突变的研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血细胞中p53基因突变检测的临床意义。方法收集32例NSCLC患者和30例健康者的外周血标本,采用PCR结合DNA测序方法检测血标本中p53基因突变,然后进行统计学分析。结果①肺癌组32例患者血标本共有12例检测到p53基因突变,突变率为37．5％;健康组30例血标本没有检出p53基因突变。②肺癌患者血液p53基因突变率在（Ⅰ＋Ⅱ）期为9．1％、（Ⅲ＋Ⅳ）期为52．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论检测外周血中p53基因突变对于肺癌的诊断、发现远处转移和估计预后具有重要的意义。     

外源性野生型p53基因对人肺癌细胞生长的抑制

目的观察外源性野生型ｐ５３基因对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法用多聚酶链反应单链构象多态性及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３基因突变的人肺巨细胞癌系８０１Ｄ为受体细胞。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺＩＰｎｅｏＳＶｐ５３。用基因枪介导外源基因。建立转染细胞系８０１Ｄｐ５３。用聚合酶链反应检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果转染细胞系８０１Ｄｐ５３体外长期传代有ｎｅｏ基因及外源ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显受到抑制，克隆形成抑制率达９６％，裸鼠异种移植致瘤性降低，肿瘤生长明显缓慢。结论外源性野生型ｐ５３经基因枪导入有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中，且明显抑制转染细胞的恶性生长     

肺癌患者呼出气冷凝液中基因微卫星改变和p53基因变异的检测及其意义

呼出气冷凝液(exhaled breath condensate,EBC)检测是一种新的肺部病变诊断技术.通过检测EBC中相关基因.从而寻找早期诊断肺癌的新方法是目前肺癌研究的热点.采用聚合酶链式反应,对肺癌患者EBC中3号染色体短臂上基因的微卫星异常以及p53基因变异进行检测,结果发现肺癌患者EBC中基因微卫星改变和p53基因变异较正常对照者阳性率明显为高.目前对于EBC基因检测尚属探索阶段,但随着检测技术的不断完善,检测EBC中肺癌的基因标志物是一个较为有希望提高肺癌早期诊断率的方法.     

肺癌组织中几种相关基因的研究

目的研究几种基因的异常在肺癌过程中所起的作用。方法采用免疫组化、ＤＮＡ／ＰＣＲ直接测序及ＲＴ－ＰＣＲ方法对５９例原发性肺癌组织ｐ５３、ｍｙｃ基因和ｍｄｒｌ基因进行检测。结果在肺癌组织中ｐ５３基因突变或过表达占６５％（３７／５７），ｍｙｃ基因过表达占５９％（２７／４６），ｍｄｒｌ基因过表达占３１％（１５／４８）。其特点是：ｐ５３基因异常与肿瘤大小、淋巴结转移、病期和复发无相关性，而ｍｙｃ基因的过表达与之呈正相关，ｍｄｒｌ基因过表达在腺癌中占有较高比例，它与淋巴结转移及病期无相关性。ｐ５３和ｍｙｃ二者均异常者占６３％（１９／３０），其复发率为７６％，ｍｄｒｌ和ｍｙｃ均异常者为６２％，其复发率为８３％。结论ｐ５３、ｍｄｒｌ与ｍｙｃ基因的异常在肺癌中可能具有协同作用，影响肺癌预后的主要因素是ｍｙｃ基因高表达     

胃癌活检标本中p53基因突变的研究

目的探索胃癌癌变过程中抑癌基因p53的变异规律．方法用聚合酶链反应，单链构象多态性，银染方法，检测胃癌活检标本30例（男20例，女10例，平均年龄56．8岁）的p53基因突变．结果病理诊断为胃癌的标本中检出的30例p53基因外显子5～8的突变18例，阳性率为60％．其癌基因的扩增和重排多发生于胃癌进展期，而p53基因的点突变发生于癌变各期结论胃癌癌变是多基因异常累积所引起的渐进过程，基因改变的数目，肿瘤的恶变性表现密切相关     

肺癌支气管冲洗液微卫星DNA的检测及意义

目的　探索肺癌支气管冲洗液中微卫星DNA的改变及其在肺癌诊断中的价值。方法　收集肺癌及良性肺病患者支气管冲洗液和外周血 ,提取DNA ,利用聚合酶链反应、变性聚丙烯酰胺凝胺电脉及银染法检测冲洗液中的微卫星DNA改变 ,并与纤维支气管镜活检 ,刷检作比较。结果　肺癌冲洗液中微卫星DNA改变阳性率5 8% ,其中中心型 5 6% ,低于活检及刷检 ;周围型 61% ,高于活检及刷检。良性肺病未发现微卫星DNA改变。结论　肺癌支气管冲洗液微卫星DNA改变的检测阳性率较高 ,特异性好 ,对于肺癌尤其周围型肺癌的早期诊断具有较好的应用价值     

肝细胞癌基因P53异常的研究

目的：分析我国重庆地区肝细胞癌Ｐ５３基因失活机制及突变谱。方法：采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰＰＣＲＳＳＣＰ和ＰＣＲ直接测序技术对来自我国重庆地区２８例肝细胞癌Ｐ５３抑癌基因结构异常进行了分析。结果：６１．５１％的肝癌存在ｐ５３的杂合缺失：５０％肝癌伴有ｐ５３基因突变，其突变模式为突普通散在于５６７和８外显子，其中第７外显子２４９们密友情子突弯率最高（２１％）；具有突变的肝癌多同时伴夺缺失。伴有ｐ５３基因结构异常的肝癌均属进展期。结论：我国重庆地区肝癌存在Ｐ５３基因结构异常，Ｐ５３基因结构异常，ｐ５３基因突变模式反映了该地区肝癌发生可能与肝炎病互和黄贡互素两种因素及其相互作用有关；ｐ５３基因结构异常属肝癌晚期事件，可能参加与肝癌的进展过程。