罗格列酮对转移生长因子诱导的大鼠肺纤维化的影响及其作用机制研究

目的采用转化生长因子（TGF-β1）诱导肺成纤维细胞,给予罗格列酮（过氧化物体增殖活化受体γ激动剂）干预,明确其对肺纤维的治疗作用及其作用机制。方法以组织贴块法培养肺成纤维细胞。实验分为0.4%血清组、TGF-β1刺激组、罗格列酮＋TGF-β1处理组,采用免疫细胞化学染色法检测TGF-β1和罗格列酮对肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的作用;采用Westernblot法检测肺脏成纤维细胞ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白的表达。结果罗格列酮能够抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的增殖,抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达。同时磷酸化的ERK1/2蛋白的表达下降,而ERK1/2表达无明显改变,表明罗格列酮抑制了肺成纤维细胞的ERK1/2信号转导途径的活化。结论 TGF-β1能够通过激活ERK1/2途径促进大鼠肺成纤维细胞的增殖和胶原合成,而罗格列酮能够通过阻断TGF-β1介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成,对肺间质纤维化存在一定治疗作用。     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成

目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响.方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P＜0.05)和163%(P＜0.01);低氧12 h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达抑制作用的实验研究

①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清农度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加.表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成.与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.在10-10～10-8mol/L浓度范围内.AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用.并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用最强.同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用.④结论 AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用.     

高糖状态下心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的观察

目的探讨高糖对大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取心肌成纤维细胞,采用正常糖(5.5mmol/L,对照组)和高糖(25mmol/L,高糖组)干预。用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白水平的变化。结果与对照组比较,高糖刺激12h可使心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达增加,Ⅰ、Ⅲ前胶原mRNA表达在12h升高,在24h达高峰,Ⅰ型前胶原mRNA升高幅度高于Ⅲ型前胶原mRNA;高糖刺激48h可使Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达增加,Ⅰ型胶原蛋白升高幅度高于Ⅲ型胶原。结论高糖可促进大鼠心肌成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原。     

丹参素对肝星状细胞ERK1/2信号转导通路的影响

目的:观察丹参素对血小板衍生生长因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖、Ⅰ型胶原合成、磷酸化细胞外信号调节激酶1,2(Phosphoryhted extracellular signal-regulated kinase 1/2,P-ERK1/2)表达的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制.方法:四甲基偶氮唑盐法检测大鼠HSC增殖活性;免疫细胞化学染色法测定大鼠HSC Ⅰ型胶原合成的表达;Western blot测定大鼠肝星状细胞P-ERK1/2的表达.结果:丹参素有抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原表达,p-ERK1/2表达的作用.结论:丹参素可抑制PDGF-BB刺激的大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原合成,其机制可能与抑制ERK1/2信号转导通路有关.     

ERK1/2信号通路介导PDGF-CC诱导的鼠心肌纤维化及其机制

目的 研究ERK1/2通路在血小板源性生长因子(PDGF)-CC诱导的鼠心肌纤维化中的作用及其可能的机制.方法 取SD大鼠乳鼠心脏组织,差速贴壁法分离并纯化心肌成纤维细胞.按不同药物处理随机分成对照组(CON组)、PDGF-CC(P组)、PDGF-CC+ERK1/2抑制剂U0126(PU组).MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖,qRT-PCR法检测mRNA含量,Western blot法分析蛋白表达量.结果 MTT法显示P组细胞数较CON组显著增加(P＜0.01),而PU组细胞数较P组明显减少(P＜0.01).qRT-PCR法显示P组中PDGF-α受体(PDGFR-α)、ERK1、ERK2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅰ、ColⅢ)的mRNA表达水平均明显高于CON组(P ＜0.001),PDGFR-β的mRNA表达量在P组与CON组间差异无统计学意义.与P组相比,PU组中PDG-FR-α、ERK1、ERK2、Col Ⅰ和ColⅢmRNA表达均明显下降(P＜0.01).Western blot法显示P组中磷酸化PDGFR-α(p-PDGFR-α)、ERK1/2、p-ERK1/2、Col Ⅰ和ColⅢ的表达量均明显高于CON组(P ＜0.001),PU组中p-PDGFR-α、ERK1/2、p-ERK1/2、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白表达量均显著低于P组(P＜0.001).结论 PDGF-CC可能通过结合PDGFR-α激活ERK 1/2信号通路,诱导鼠心肌成纤维细胞过量增殖伴胶原蛋白的合成,参与心肌纤维化的发生.     

转化生长因子-β1对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原和TGF-β表达的影响.方法应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学法.结果经TGF-β1作用后,肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白的表达增强,也可见TGF-β的mRNA杂交信号和其蛋白的阳性反应.结论 TGF-β1能够促进大鼠肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型前胶原;TGF-β能促进肺成纤维细胞自身合成TGF-β.认为肺成纤维细胞自分泌TGF-β是肺纤维化进行性进展的重要原因之一.     

TGF-β1对新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅳ型胶原合成的影响

目的:探讨TGF-β1对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型与Ⅳ型胶原表达的影响。方法:取出生1-3天的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞;分别用不同浓度的TGF-β1(10 ng/mL、1ng/mL、0 ng/mL)干预心肌成纤维细胞,于干预后24h采用免疫细胞化学染色法检测Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达。结果:1.以胰酶与Ⅱ型胶原酶合用消化分离新生大鼠心肌成纤维细胞,可将心肌细胞和心肌成纤维细胞分离,心肌成纤维细胞抗波形蛋白(vimen-tin)染色阳性,抗α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)染色阴性。2.用0(对照组)、1、10 ng/mL的TGF-β1干预心肌成纤维细胞24h后,免疫细胞化学染色法发现心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原的表达随着TGF-β1浓度的增加而增加。结论:TGF-β1能促进细胞外基质的合成,增强Ⅰ型和Ⅳ型胶原的表达。     

丹参素对PDGF-BB刺激下肝星状细胞的抑制作用

目的观察丹参素对PDGF-BB刺激下大鼠肝星状细胞活化增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成与分泌,ERK1/2和PI3K通道蛋白表达的影响,探讨丹参素抑制肝纤维化的分子机制。方法用不同浓度丹参素(0.250、0.125、0.062 mmol/L)、ERK通道特异性抑制剂UO126(20 nmol/L)和PI3K通道特异性抑制剂LY294002(20 nmol/L)分别作用于经血小板衍生生长因子PDGF-BB(10 ng/ml)处理的大鼠肝星状细胞(HSC)48 h,CCK8法检测HSC增殖活性,免疫化学染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌,Western blot测定ERK1/2、p-ERK1/2、AKT和p-AKT蛋白表达。结果 PDGF-BB 10 ng/ml处理后,HSC增殖明显增加(0.139±0.009),丹参素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用,并随丹参素浓度增加(0.062、0.125、0.250 mmol/L)细胞增殖受到的抑制作用越强(0.102±0.008、0.083±0.007、0.066±0.014,P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌均显著减少(P<0.05),p-ERK1/2和p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论丹参素可通过抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖和活化,同时抑制与肝纤维化密切相关的MAPK、PI3K途径中ERK、AKT蛋白的磷酸化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能与抑制ERK1/2和PI3K信号转导通路有关。     

TGF-β_1/Smad通路在周期性牵张诱导大鼠成纤维细胞胶原合成中的作用

目的观察TGF-β_1/Smad通路是否参与机械牵张促进大鼠成纤维细胞胶原合成的影响。方法原代培养大鼠成纤维细胞,分成五组培养在细胞力学加载装置中,分别给予如下刺激:未加力组:不加力,培养条件同以下各组;加力1组:力学加载拉伸幅度10%,48 h;加力2组:力学加载拉伸48 h,幅度30%;4加力+抑制剂1组:先用10μmol/L LY2109761处理2 h后加力,力学加载拉伸幅度10%48 h;5加力+抑制剂2组:先用10μmol/L LY2109761处理2 h后加力,力学加载拉伸48 h,幅度30%。处理后采用western blot技术检测各组Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成情况。结果与未加力组比较,加力1组和加力2组均有显著的促进成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的作用,加力1组有显著的促进成纤维细胞Ⅲ型胶原合成的作用;与加力1组比较,加力+抑制剂1组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成显著减少,与加力2组比较,加力+抑制剂2组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成显著减少。结论周期性牵张刺激能够促进成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,TGF-β_1/Smad信号转导通路参与了这种促进作用。     

湖北产四种商品细辛的鉴别

对湖北产四种商品细辛的性状及显微特征进行了比较研究。并将其主要区别点列表说明。为湖北地区细辛的生产，销售及临床应用提供参考。     

颈迷走神经分离术治疗支气管哮喘

本文报告了我院4年来用颈迷走神经分离术治疗的6例支气管哮喘。经过3个月至4年随访,全部病例均获满意疗效。在介绍手术方法的同时,讨论了其作用机理。认为该手术,有方法简便、安全可靠、疗效显著等优点。强调了手术适应症的选择,病人的年龄以及迷走神经分离长度对手术效果影响很大。     

羊心室肌细胞的聚类分析

光学显微镜下观测了常规制作的羊心室组织标本中,33个心室肌细胞的各种形态学参量。应用模糊聚类分析对所观察的心肌细胞进行了软分类。作者认为,目前将心室肌分为:束细胞、兼性心肌,准工作心肌和终末工作心肌细胞四类更为适宜。对形态学观察及数学分析结果的生理学意义作了简要的讨论。     

荞麦花叶总黄酮抗应激反应的实验研究

①目的研究荞麦花叶总黄酮（TFBFL）对小鼠抗急性应激反应的能力。②方法将小鼠随机分为正常对照组及TFBFL高、低剂量组。TFBFL组按40mg／（kg·d）和20mg／kg·d），灌胃给药7天，正常对照组灌胃等容量的去离子水。未次给药2小时，采用负重游泳法，观察游泳时间；常压耐缺氧和耐低温法，观察小鼠存活时间。③结果TFBFL能延长小鼠负重游泳时间，缺氧存活时闾及提高耐寒能力，TFBFL高剂量作用更为显著。④结论TFBFL具有明显的抗疲劳、耐缺氧、耐低温作用，可增加小鼠应激反应的能力。     

孕妇巨细胞病毒不同感染形式对母婴免疫状态的影响

①目的 探讨孕妇巨细胞病毒（CMV）不同感染形式对母婴免疫状态的影响.②方法 对门诊产前检查的孕妇行CMV血清IgG和IgM筛查,对IgG（＋）和/或IgM（＋）者分娩前采集孕妇静脉血,检测CMV IgM抗体.根据检测结果分为原发感染组、复发感染组和对照组.各组新生儿出生后采集脐静脉血,检测CMV IgM抗体.各组孕妇及新生儿检测免疫学指标IL-2、IFN-γ和IL-4.③结果 原发感染组孕妇与对照组相比IL-2、IL-4显著降低（P＜0.05）;原发感染组新生儿与对照组相比IL-2水平显著降低;垂直传播组新生儿IL-2、IFN-γ和IL-4水平均显著低于对照组（P＜0.05）.④结论 孕妇CMV原发感染可降低其机体的免疫力;新生儿先天感染及其母亲原发感染CMV可使其免疫状态受到抑制.     

一例血红蛋白G—Taipei的结构分析

用醋酸纤维素薄膜电泳在河南新乡普查血红蛋白病时,发现一例慢速血红蛋白变种。先证者21岁,女,河南籍,体健。其父携带有相同泳速的异常血红蛋白。化学结构分析,证明该变异体为HbG—Taipei[β22(B4)Glu—Gly]。     

氯沙坦对大鼠动脉损伤后平滑肌细胞凋亡及Fas抗原及其配体的影响

①目的探讨氯沙坦对大鼠颈动脉损伤后平滑肌细胞凋亡和相关基因Fas抗原与Fas配体的影响及其对临床预防经皮冠状动脉成形术后再狭窄的可行性。②方法将42只雄性W istar大鼠,随机分为氯沙坦实验组(n=21)及对照组(n=21),实验动物均行左侧颈总动脉球囊剥脱损伤内皮模型,术后于不同时间段取损伤段血管,均进行苏木精-伊红染色及计算机图像分析;Tunnel标记法检测平滑肌细胞凋亡率;免疫组化法测定Fas抗原及其配体在血管壁中的表达。③结果对照组于术后第7、14天损伤血管壁面积增加,相同时间段内两组比较,结果氯沙坦实验组管壁增生程度较对照组显著降低(P(0.05);术后第7、14天氯沙坦实验组的细胞凋亡率显著高于对照组(P(0.05);管壁中Fas抗原、Fas配体的表达较对照组明显增加。④结论血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦可以通过Fas系统调节损伤段血管平滑肌细胞的凋亡而抑制新生内膜的形成。     

硫氟酰胺的合成和药效观察

以辛烷磺酰氟为原料经电解氟化和胺化反应合成了硫氟酰胺化合物,它们对德国小蠊有良好的杀灭效果。     

The Significance of Anatomical Variations of Hepatic Artery and Multiple Arterial Supplies in Embolization of Liver Tumors

(胡国栋)(李小明)(黄志程)(胡道予)ＴｈｅＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＡｎａｔｏｍｉｃａｌＶａｒｉａｔｉｏｎｓｏｆＨｅｐａｔｉｃＡｒｔｅｒｙａｎｄＭｕｌｔｉｐｌｅＡｒｔｅｒｉａｌＳｕｐｐｌｉｅｓｉｎＥｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＬｉｖｅｒＴｕｍｏｒｓ￥ＨＵ...     

黄芪桂枝五物汤及单味药材中多糖成分的含量测定

①目的对黄芪桂枝五物汤及各单味药材中多糖成分含量进行测定,比较其差异。②方法采用硫酸-苯酚法(PSM),λ为4 9 0 nm,显色在4.5小时内稳定。③结果煎剂中多糖含量分别为黄芪3 5mg/g,桂枝0mg/g,芍药2 0.4mg/g,生姜0mg/g,大枣30.5mg/g。黄芪 桂枝 芍药 生姜 大枣合煎多糖含量为1150.76mg/g;单煎得到的多糖等于各单味药多糖之和:黄芪 桂枝 芍药 生姜 大枣含量为1658.66mg/g。④结论黄芪桂枝五物汤中多糖的含量可因不同配伍发生变化,5种药合煎比单煎多糖含量减少。