UPLC法检测染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征

目的 研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法 将染料木黄酮的细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-醋酸铵水溶液为流动相,以睾丸酮为内标,采用超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography,UPLC）法检测。考察时间、pH值等因素对染料木黄酮吸收的影响,测定透过Caco-2单细胞层的染料木黄酮浓度并计算其表观渗透系数（P_app）。结果 Caco-2细胞对染料木黄酮的吸收在1 h内呈线性,药物摄取时间定为1 h;pH值对染料木黄酮的吸收没有显著影响。染料木黄酮的线性范围为0.625～40 μmol/L,日间、日内精密度均小于15%。P_app从基顶侧（apical,AP）到基底侧（basolateral,BL）为1.51×10^?5 cm/s,从BL侧到AP侧为1.84×10^?5 cm/s,其渗透系数P_app（BL-AP）/P_app（AP-BL）为1.22。结论 染料木黄酮在肠道的吸收主要以被动扩散为主,UPLC检测方法简单、灵敏度高,可用于研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。     

Caco-2 细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在 Caco-2 细胞单层模型中的吸收转运机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型研究熊果酸在有或无 P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质 pH 值对 Caco-2 细胞摄取熊果酸的影响。采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数 (Papp)。结果 浓度在 10～40 μmol/L 内,Caco-2 细胞对熊果酸摄取量呈线性增加。双向转运研究发现加入 P糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后,其 Papp 发生显著改变,表观渗透率由 3.445 下降至 1.386。结论 熊果酸在 Caco2 细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程。     

人参皂苷Rb_2透过Caco-2单细胞层的吸收特征研究

目的测定人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法采用液相色谱-质谱联用（LC-MS-MS）法,测定人参皂苷Rb2浓度并计算其表观渗透系数（Papp）。结果人参皂苷Rb2从基顶侧至基底侧的表观渗透系数Papp（AP-BL）为3.27×10^-7cm·s^-1,从底侧至顶侧Papp（BL-AP）为3.16×10^-6cm·s^-1,Papp（BL-AP）/Papp（AP-BL）比值为9.63。结论本研究阐明了人参皂苷Rb2在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征,这在国内尚属首次报道。     

低氧对Caco-2细胞P-gp表达及功能的影响

目的：低氧会改变许多药物的口服生物利用度,其中也包括多种P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的底物(药物),提示低氧可能影响肠上皮细胞P-gp的功能。Caco-2细胞单层膜模型是当前研究肠上皮P-gp功能的经典模型。本研究通过结合Caco-2细胞单层膜模型与低氧处理,研究低氧对Caco-2细胞P-gp表达和功能的影响,有助于阐明高原低氧环境改变肠上皮药物转运的机制。方法：正常培养的Caco-2细胞在1%的O₂浓度条件下分别培养24、48、72 h,提取膜蛋白后,采用蛋白质印迹法检测P-gp的表达水平,选择表达变化最显著的缺氧时间用于后续研究。于transwell小室中培养Caco-2细胞21 d,建立Caco-2细胞单层膜模型后,将其分为常氧对照组与低氧组,常氧对照组以正常条件继续培养72 h,低氧组在1%的O₂浓度条件下继续培养72 h,通过跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)、荧光黄表观渗透系数(apparent permeability coefficient,P...     

利用Caco-2细胞模型研究新型Pim-1激酶抑制剂KY-C002的表观渗透系数

目的 利用人结肠癌Caco-2细胞模型研究新型Pim-1激酶抑制剂KY-C002的表观渗透系数,为药物制剂设计提供生物药剂学依据.方法 建立Caco-2细胞单层模型,通过细胞形态观察,跨上皮细胞电阻测定和酚红通透性实验验证Caco-2细胞单层完整性.考察不同浓度Pim-1激酶抑制剂KY-C002从绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧),BL侧到 AP侧两个方向的转运情况.应用高效液相色谱法对该化合物进行定量分析,计算其表观渗透系数(Papp).结果 建立的Caco-2细胞单层完整,适用于转运实验.Pim-1激酶抑制剂KY-C002浓度为5、10、20 μg/ml时,Pim-1激酶抑制剂 KY-C002 从 AP 侧到 BL 侧的 Papp分别为(4. 72 ± 0.05) × 10-5、(5.29 ± 0.20) × 10-5、(2. 10 ± 0.41) × 10-5 cm/s(P<0.05);从BL侧到AP侧的Papp分别为(7.59±0.78)×10-6、(1.08 ± 0.04) × 10_5、(6.23 ± 0.63) × 10-6 cm/(P<0.05).结论 成功构建Caco-2细胞单层模型并用于考察Pim-1激酶抑制剂KY-C002的透过细胞单层的性能.在考察的浓度范围内,无论从AP侧到BL侧,还是从BL侧到AP侧,Pim-1激酶抑制剂KY-C002的Papp均与其浓度有关,浓度为10 μg/ml时的Papp大于5 μg/ml和20 μg/ml时的 Papp .     

川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征以及对P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 MTT法确定川芎嗪对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;以Caco-2细胞单层模型研究川芎嗪的双向转运机制,以表观渗透系数（P_app）为检测指标,考察时间、药物浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对川芎嗪转运的影响;Western blotting法检测川芎嗪对P-gp表达的影响。结果 从顶侧（AP）到底侧（BL）（AP→BL）,川芎嗪的P_app＞10^?6 cm/s,表明其吸收性良好;川芎嗪的转运量与其浓度和时间呈正相关,且川芎嗪AP→BL的转运量明显大于BL→AP的转运量;川芎嗪不仅受到P-gp的外排作用,同时也抑制P-gp表达。结论 川芎嗪在Caco-2细胞模型的转运方式为被动转运,且受到P-gp的外排作用,并对P-gp的表达有抑制作用。     

应用Caco-2细胞模型观察介质pH和氨氯地平对替米沙坦跨膜吸收转运的影响

目的 探讨介质pH值和常用合并用药氨氯地平对血管紧张素Ⅱ受体(AT1型)拮抗剂替米沙坦跨膜吸收转运的影响.方法 体外培养人结直肠癌Caco-2细胞,通过细胞形态观察、跨上皮细胞电阻(TEER)测定和荧光黄通透性实验验证Caco-2细胞单层完整性;通过ATP酶活性测定和双向转运实验分析替米沙坦是否外排糖蛋白(P-gp)底物;观察改变介质pH及合并使用氨氯地平时对替米沙坦跨膜吸收转运的影响.结果 建立的Caco-2细胞单层完整,适用于转运实验.替米沙坦ATP酶活性与空白对照ATP酶活性的比值为1.73,双向转运实验结果显示外排比率为4.53.随着pH值(8.0～5.0)的降低,替米沙坦吸收表观通透性逐渐增强,跨膜吸收转运呈现明显的pH依赖性.在pH 7.4且合并氨氯地平时,替米沙坦吸收表观通透性明显增强.结论 P-gp可能参与替米沙坦跨膜分泌转运,介质pH酸性环境和氨氯地平可易化替米沙坦跨膜吸收转运.     

辽东楤木根皮皂苷对硫酸软骨素在Caco-2细胞单层和大鼠体内转运的影响

硫酸软骨素（CS）常用于治疗关节炎，但由于其较高的分子量、电荷密度以及亲水性，导致在小肠内的吸收很少。曾有研究显示，辽东楤木Araliaelata Seem．根茎皂苷（SRBAE）对Caco-2细胞单层显示良好的减小跨上皮细胞电阻（TEER）值和促进亲水性大分子摄取的作用，且无细胞毒性。为此作者研究了SRBAE对CS在Caco-2细胞单层和大鼠体内转运的增强作用。     

Caco-2细胞模型在中药转运机制及相互作用机制中的研究进展

<正>Caco-2细胞是通过克隆人类的结肠癌细胞而来。Caco-2细胞不仅在显微镜下形态、极性及胞饮功能与小肠上皮细胞相似,而且其含有的转运系统和代谢酶也与小肠刷状缘上皮相似[1]。药物在透过Caco-2细胞模型的体外过程与药物口服后,在小肠内的吸收和代谢有良好的相关性[2]。因此,Caco-2细胞模型常用于药物的跨膜转运实验,从而可进一 更多还原     

穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度、温度和抑制剂对穿心莲内酯吸收的影响。用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且受温度和碘乙酰胺影响,但不受外排抑制剂维拉帕米和MK-571的影响。结论 穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收主要是由载体介导的主动转运。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.3...     

芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收机制的研究

目的 研究芍药苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法 用Caco-2细胞单层模型研究芍药苷的双向转运,考察时间、药物质量浓度对芍药苷吸收的影响.采用高效液相色谱法检测芍药苷质量浓度,计算其表观渗透系数(Papp).结果 芍药苷在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运大致相同;随着芍药苷质量浓度的增加,顶端到基底端方向的吸收量近似线性增加,基底端到顶端方向的分泌量近似线性增加.结论 芍药苷在Caco-2细胞模型中吸收主要是被动转运.     

黄芩苷-小檗碱复合物及纳米晶在Caco-2细胞单层模型的吸收特性研究

[目的]研究黄芩苷(BA)-小檗碱(BBR)复合物及纳米晶的吸收特性,探讨纳米晶技术对BA-BBR复合物吸收特性的改善。[方法]利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法筛选BA-BBR复合物及纳米晶对人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞的给药浓度,构建Caco-2细胞单层模型探究BA-BBR复合物及纳米晶的跨膜转运方式,并且加入P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米研究对其累积转运量和表观渗透系数(P_app)的影响。[结果]复合物组中BA和BBR的P_app值均低于物理混合物组;与复合物组相比,纳米晶组中BA和BBR的累积转运量和P_app值均提高,P_app值为复合物组的1.3倍和2.3倍。加入维拉帕米后,复合物组BA和BBR的P_app值分别提高1.5倍和2.0倍,而纳米晶组P_app值无明显提高。[结论] BA-BBR复合物不同于物理混合物,具有低渗透性,同时易受到P-gp外排影响。纳米晶技术可以显著改善BA-BBR复合物的渗透性,并且减弱外排...     

促红细胞生成素(EPO)对叶酸在Caco-2细胞中跨膜转运的影响

 目的 采用人结肠腺癌细胞系(human colon adenocarcinoma cell line) Caco-2单细胞层模型观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对叶酸跨膜转运的影响。方法 采用Caco-2单层细胞模型,观察不同剂量EPO (0.3、1、3 U/mL)处理对叶酸在摄取与外排双向转运方面的影响。通过real time-PCR与Western blot观察EPO处理对质子偶联的叶酸转运体(proton coupled folate transporter,PCFT)、还原叶酸载体(reduced folate carrier,RFC)以及多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)表达的影响。结果 EPO在剂量0.3~3 U/mL范围内可剂量依赖地增加叶酸在摄取方向的转运,增幅分别为31.6%、61.5%和120.5%。高剂量EPO(3 U/mL)对叶酸在外排方向的转运也具有促进作用,增幅为56.9%,而中低剂量EPO (1、0.3 U/mL)对叶酸外排无明显作用。叶酸转运体PCFT、RFC及MRP2均受EPO影响而表达上调,并呈剂量依赖和时间依赖关系。结论 EPO可上调叶酸的摄取并呈剂量依赖关系,高剂量EPO对叶酸的摄取与外排具有双向促进作用。     

茯苓酸在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收和转运

目的：研究中药茯苓中茯苓酸（pachymic acid，PA）在人肠的吸收和转运。 方法：人源肠Caco－2细胞单层作为药物的肠吸收转运模型，测定PA从绒毛面（AP）到基底面（BL）的渗透性；反相高效液相色谱法测定PA在AP和BL的浓度，紫外检测波长为210nm；计算转运参数和表观渗透系数（Papp），并与在Caco-2细胞单层模型呈良好吸收转运的阳性对照药普萘洛尔和不良吸收转运的阳性对照药阿替洛尔进行比较。 结果：PA由AP到BL方向的Papp值为（9．50±2．20）×10^-7cm／s，由BL到AP方向的Papp值为（11．30±5．90）×10^-7cm／s。在本项研究条件下，普萘洛尔和阿替洛尔的Papp值分别为1．45×10^-5cm／s和4．22×10^-7cm／s。 结论：PA在Caco-2细胞单层馍型的吸收转运呈浓度依赖性，与转运时间呈线性关系；由AP到BL和BL到AP两个方向的转运不良，其Papp值与阿替洛尔的接近；除被动扩散机制外，ATP部分地参与了PA的转运。