四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法：培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg／mL的四逆汤类方提取物预处理，进行缺氧／复氧损伤后，比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：与对照组比较，附子、干姜配葱白提取物(EAGO)，附子、干姜配甘草提取物(EAGL)，附子、干姜配胆汁提取物(EAGB)，附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性，与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异。EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性，与EAG组比较差异显著。EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量，与FAG组比较差异显著。结论：四逆汤类方均可以提高缺氧／复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性，降低上清液中乳酸脱氢酶活性。四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用。提示四逆汤类方对缺氧／复氧损伤的心肌细胞均有保护作用。     

基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础

目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分;体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响。结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物;与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P<0.05,P<0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P<0.05,P<0.01),明显抑制细胞凋亡。结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。     

双参通冠方药物血清对心肌细胞缺氧复氧损伤Ca~(2+)超载的影响

双参通冠方(SSTG)由人参、丹参、元胡3药的有效组分提取物组成,前期工作表明,该方是治疗心肌缺血再灌注损伤的有效中药制剂[1]。本实验运用血清药理学方法,在进行双参通冠方时-效、量-效及血清中含药成分研究后,确定SSTG含药血清制备的最优灌胃剂量、最佳取血时间,制备含药血清。复制心肌细胞缺氧复氧模型,观察SSTG含药血清对缺氧复氧损伤中Ca2+超载及心肌细胞膜ATPase活性的影响,阐明SSTG作用机制和作用环节。1材料与方法1·1     

芳香化浊方对心肌细胞在缺氧复氧损伤中体外保护作用机制

目的 :研究芳香化浊方对急性心肌缺血再灌的作用机制。方法 :应用体外培养的方法 ,观察中药对心肌细胞在缺氧复氧损伤中的保护作用。结果 :芳香化浊方可明显降低培养液中CK、LDH含量 (P <0 .0 5 ) ;提高细胞生存活力 (MTT)。结论 :芳香化浊方可通过提高心肌细胞的存活率而达到治疗目的     

清热解毒中药对心肌细胞缺氧复氧损伤影响的实验研究

目的:研究清热解毒中药对心肌细胞缺氧复氧损伤影响的药效学,探讨其治疗冠心病心肌缺血的作用机制。方法:复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,以LDH、MDA、SOD、TNF-α、IL-6、NO、NOS为观测指标,以地尔硫卓为平行对照,观察清热解毒中药干预冠心病心肌缺血的作用机制。结果:清热解毒中药能降低缺氧复氧损伤心肌细胞培养液中LDH活力和MDA含量,升高SOD活力(P<0.01或P<0.05);能降低缺氧复氧损伤心肌细胞培养液中TNF-α、IL-6、NO和NOS(P<0.01或P<0.05)。结论:清热解毒中药抗冠心病心肌缺血作用机制是通过抑制炎性因子TNF-α、IL-6的表达,并提高过氧化物歧化酶SOD活力,减少氧自由基的产生和MDA的形成,抗脂质过氧化损伤,保护缺血心肌。     

川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的实验研究

目的:观察川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护。方法:利用心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,川芎嗪注射液预处理对心肌细胞进行预处理。结果:川芎嗪提高心肌细胞缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活率、减少细胞丙二醛产生、减少乳酸脱氢酶的漏出。结论:川芎嗪对乳鼠心肌细胞有预处理保护作用。其机制与提高心肌细胞抗氧自由基的能力,抑制脂质过氧反应,减轻心肌细胞膜脂质过氧化损伤,保持细胞膜结构的完整性来实现的。     

心肌细胞缺氧／复氧损伤模型研究与应用进展

心肌细胞缺氧,复氧损伤模型是体外筛选抗心肌缺血,再灌注损伤活性物质的模拟模型,有效建立该模型是筛选结果可靠的保证。本文从心肌细胞缺氧,复氧损伤模型建立的一般程序,心肌细胞种类的选择与培养,心肌细胞缺氧腹氧损伤模型建立的方法等方面就近年来国内外心肌细胞缺氧,复氧损伤模型的研究与应用情况进行了综述,并就模型建．立中需要注意的相关问题进行了探讨。为有效复制该模型提供参考。     

SITS在实验性心肌细胞缺氧／复氧损伤中的作用

目的阐明SITS所产生的心肌保护作用。方法建立缺氧／复氧损伤（A／R）模型及SITS预适应模型，测定心肌细胞的搏动频率、细胞存活率以及细胞培养液中LDH的变化。结果SITS预处理能明显提高A／R损伤后细胞存活率，减少LDH的漏出，与A／R组相比均有显著性差异（P〈0．01）。结论SITS预处理对心肌细胞A／R具有保护作用。此研究为寻找特异性阻断剂，探讨心肌保护药物的新靶点提供理论与实验依据。     

迷迭香酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用研究

目的：研究迷迭香酸对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。 方法：体外培养大鼠原代心肌细胞,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,分别观察细胞活力和LDH漏出的改变,采用化学发光法检测细胞ATP含量变化,利用荧光探针技术检测细胞内ROS产生的变化,采用流式细胞术及Western blot法进一步考察迷迭香酸对心肌细胞凋亡,cleaved-caspase 3,Akt和p-Akt蛋白表达的影响。 结果：实验结果显示,25,50,100 mg·L^-1迷迭香酸均能显著抑制缺氧复氧导致的细胞活力下降,LDH漏出及ROS的过度产生,并能维持细胞内ATP水平;50,100 mg·L^-1迷迭香酸显著抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和下调cleaved-caspase 3 蛋白表达,并且100 mg·L^-1迷迭香酸能够明显上调p-Akt 蛋白的表达。 结论：迷迭香酸具有显著的抗心肌细胞缺氧复氧损伤作用,能够改善心肌细胞能量代谢和减少细胞凋亡,其保护作用可能是通过激活Akt通路实现的。     

栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的]探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

皂荚皂苷对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究皂荚皂苷对缺氧/复氧(H/R)诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法采用原代培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分9组:正常对照组,H/R组,H/R 皂荚皂苷(100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56μg·mL-1)剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况。结果皂荚皂苷(50,25,12.5,6.25μg·mL-1)剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。结论皂荚皂苷具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用。     

补阳还五汤对缺氧-复氧损伤内皮细胞的保护作用

目的探讨补阳还五汤(BHD)对缺氧-复氧损伤内皮细胞(ECV)的保护作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,缺氧-复氧造成ECV损伤,同时加入不同剂量BHD,检测细胞丙二醛(MDA)、培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的含量变化.结果ECV304缺氧-复氧后,与空白组比较,LDH、MDA及ET-1含量显著升高(P＜0.01),而NO含量显著下降(P＜0.05).当加入低、中、高剂量的BHD或尼莫地平阳性对照药后,与缺氧-复氧模型组比较,LDH、MDA及ET-1含量下降(P＜0.01或P＜0.05),而NO含量升高(P＜0.01).结论BHD能抑制缺氧-复氧对ECV的损伤,对缺氧-复氧环境下的ECV起保护作用.     

补肾益精方含药血清对人精子离体质量的影响

目的 研究补肾益精方含药血清体外对人精子运动能力和受精 能力的影响。方法通过人精子与补肾益精方含药血清共培养，观察补肾益精方对人精子运动能力（精子运动CASA分析）、精子爬高试验的影响。结果 含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度[精子运动路径速度（VAP）、精子轨迹速度（VCL）、精子前向运动速度（VSL）]（P〈0．01）、精子头部侧置振幅（ALH）和鞭毛摆动频率（BCF）及前向运动精子密度（P〈0．05），提高精子爬高试验（P〈0．01）。结论 补肾益精方具有提高人精子离体质量的作用。     

黄连干预心肌缺血损伤的体内外实验研究

目的利用体内、体外实验模型研究单味黄连对心肌(细胞)缺血、缺氧的保护作用及机制。方法结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血模型,灌胃给予黄连粗提物61.27 mg/(kg.d),每日1次,7 d后测定心电图、血清酶学指标;建立缺氧复氧心肌细胞模型,给予黄连粗提物(25μg/mL),测定细胞培养液中乳酸脱氢酶的漏出和细胞活力。结果黄连能对抗心肌缺血引起的Ⅱ导联心电图ST-T段的抬高(P0.05),降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛(P0.05),升高超氧化物歧化酶(P0.05);减少缺氧复氧心肌细胞乳酸脱氢酶的漏出(P0.05),而不影响细胞相对活力。结论黄连具有保护心肌(细胞)作用,其机制是通过改善心肌(细胞)缺血、氧化损伤状态而实现。     

丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的观察丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法用体外细胞培养方法,培养乳鼠心肌细胞,复制心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。分别在缺氧和复氧阶段将细胞培养液换成含药培养液以进行药物干预,研究丹皮酚和芍药苷的作用时,各设100、75、50和25mg/L4个剂量组,研究二者配伍作用时设芍药苷40mg/L和20mg/L组、丹皮酚40mg/L和20mg/L组、以及芍药苷20mg/L+丹皮酚20mg/L5个剂量组,模型组只造模不进行药物干预,而正常对照组则不造模。分别测定缺氧2.5～5h后及复氧2h后细胞培养上清液中的肌酸肌酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)漏出量,计算缺氧/复氧过程中各指标总漏出量及漏出抑制率。结果与正常对照组比较,模型组缺氧2.5h后MDA漏出量增加,缺氧3、5h后、复氧2h后CK、LDH和MDA漏出量、漏出总量均增加,各指标漏出抑制率均降低,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,丹皮酚高剂量组及芍药苷高、中剂量组缺氧后LDH、MDA漏出量及复氧2h后各指标漏出量、漏出总量均减少(P<0.01,P<0.05),各指标漏出抑制率均升高(P<0.01,P<0.05);而丹皮酚低、极低剂量组仅复氧2h后CK漏出量及漏出总量减少(P<0.01,P<0.05),CK漏出抑制率升高(P<0.01)。芍药苷极低剂量组仅复氧2h后LDH漏出量及漏出总量均减少(P<0.01),LDH漏出抑制率升高(P<0.01)。配伍组各指标与丹皮酚、芍药苷各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤均具有保护作用,二者配伍作用强度与同剂量单味药物作用强度相当,未见显著配伍增效作用。     

刺囊酸预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

 目的 研究刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法 用终浓度分别为0.5, 5和50 μmol·L^-1的刺囊酸预处理原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞1 h, 予以缺氧3 h后, 再复氧2 h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量及热休克蛋白70表达等指标,观察其对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用,并探讨一氧化氮合成酶抑制剂0.1 mmol·L^-1的N-硝基-L-精氨酸甲酯、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂50 μmol·L^-1的PD98059和1 μmol·L^-1K⁺-ATP通道阻断剂格列苯脲对其保护作用的影响。结果 与缺氧/复氧组比较,不同剂量的刺囊酸预处理组能显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶活性,呈剂量依赖性,且显著能增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量,增加热休克蛋白70表达,能对抗缺氧/复氧损伤;而N-硝基-L-精氨酸甲酯和PD98059能部分取消刺囊酸预处理的上述保护作用。结论 刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著抗氧化作用,且其保护作用机制可能与一氧化氮生成、促分裂原活化蛋白激酶活化及增加热休克蛋白70表达有关。     

小檗碱对H2O2致培养乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的：研究过氧化氢（H2O2）对培养乳鼠心肌细胞的损伤作用以及小檗碱对其的影响。方法：用H2O2处理心肌细胞，以建立心肌细胞的H2O2损伤模型。用比色法测定乳酸脱氢酶活性；戊巴比妥酸法测定细胞内脂技过氧化物（MDA）的含量;MTT法测定细胞活力。结果：H2O2以呈浓度依赖（50—2500μM）和时间依赖（2—12h）的方式致心肌细胞的损伤作用，且浓度为2500μM的H2O2处理心肌细胞12h接近其损伤作用的最高峰。小檗碱（Ber）可不同程度地减轻H2O2介导的心肌细胞损伤，能降低细胞损伤指数，减少细胞内MDA的生成和提高细胞活力（P〈0．01），这种细胞保护作用呈浓度依赖性（10—100μM）的。结论：心肌细胞H2O2损伤模型可作为一些与氧自由基密切相关的心血管疾病（尤其是心肌缺血／再灌注损伤）的病理模型：Ber对H2O2致心肌细胞损伤有保护作用，其机理可能与其减少膜脂质过氧化物生成有关。     

当归黄芪超滤膜提取物预处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤保护作用的研究

目的探讨当归黄芪超滤膜提取物预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤和氧化损伤的保护作用。方法体外培养原代乳鼠心肌细胞,不同分子量及剂量当归黄芪超滤膜提取物预处理24h后,采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）诱导心肌细胞缺氧／复氧损伤模型,测定细胞存活率（MTT法）、细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果在缺氧／复氧损伤模型和氧化损伤模型中,当归红芪超滤膜提取物预处理明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量。结论当归红芪超滤膜提取物预处理对缺氧／复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用,其可能与防止氧自由基的产生或抑制氧自由基对心肌细胞的损伤有关。     

白花前胡提取液含药血清对心肌细胞生长的影响

目的:探讨在缺乏过度生长刺激条件下白花前胡提取液含药血清对体外培养正常心肌细胞生长的影响。方法:采用免疫沉淀技术、免疫细胞化学染色及流式细胞仪观察使用白花前胡含药血清前后心肌细胞生长情况及搏动频率、原癌基因表达、细胞周期变化。结果:白花前胡提取液含药血清高低剂量组孵育24h,心肌细胞贴壁伸展状态均良好,未见明显细胞脱落、悬浮现象,心肌细胞搏动频率与空白组无显著差异(P>0.05),使用前胡提取液高低剂量含药血清2h后对心肌细胞c-Jun蛋白表达及其在细胞内的分布无显著影响(P>0.05),白花前胡提取液含药血清高低剂量组心肌细胞G0/G1期、S期、G2/M期分布比率均与空白组无显著性差异(P>0.05)。结论:白花前胡提取液含药血清对正常心肌细胞的活力无显著影响,不干扰正常心肌细胞的细胞信号传导过程,对心肌细胞周期无明显影响。