三七皂甙Rg_1及Rb_1对离体大鼠肝细胞损害的保护作用

目的:探讨三七皂甙 Rg_1及 Rb_1对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起急性肝损害的保护作用。方法:用胶原酶原位灌流法分离肝细胞,用透射电镜观察肝细胞形态学变化,用 Fura-2-AM 测定细胞内游离钙离子浓度。用[~3H]油酸标记的生物膜法测定分泌型磷脂酶 A_2(secretory phospholipase A_2,sPLA_2),用ELISA 法检测前列腺素 E_2(PGE_2)的活性,用 RT-PCR 检测 sPLA_2基因表达。结果:三七皂甙 Rg_1、Rb_1能显著抑制 LPS 所致的肝细胞凋亡与坏死,明显抑制 LPS 引起的胞内 Ca~(2+)超载,抑制 sPLA_2的活性、PGE_2水平和 sPLA_2基因的表达。结论:三七皂甙 Rg_1、Rb_1能显著抑制急性肝损害可能与其对钙的拮抗和对 sPLA_2的抑制作用有关。     

三七皂甙Rg1对脂多糖诱导的大鼠肝细胞损伤的防护作用

目的探讨脂多糖诱导大鼠肝细胞的损害特点,并探讨三七皂甙Rg1抗肝细胞损害的保护作用。方法用胶原酶灌流法分离肝细胞。脂多糖诱导大鼠肝细胞损害,透射电镜观察肝细胞形态学的变化,DNA凝胶电泳观察其生化变化,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)进一步探讨肝细胞损害的特点,并探讨三七皂甙Rg1对肝细胞损害的保护作用。结果由脂多糖诱导的肝细胞在形态上表现出染色质凝聚、凋亡小体形成等凋亡特征,生化方面表现出典型的DNA梯度,此过程可被凋亡抑制剂Quinaceine抑制。用SCGE法检测出,肝细胞凋亡和死亡数量与脂多糖的诱导时间有明显的相关性。在此基础上,观察到三七皂甙Rg1可抑制肝细胞凋亡和坏死,其抑制效果与Quinaceine无明显差异。结论三七皂甙Rg1可显著抑制肝细胞凋亡和坏死,是防治肝细胞损害的良好药物。     

人参皂甙Rb1和Rg1对幼小鼠性腺和副性腺的影响

幼年小鼠皮下注射人参皂甙Ｒｂ１６ｍｇ／ｋｇ、Ｒｇ１２５和５０ｍｇ／ｋｇ连续１４天,结果Ｒｂ１能能使正常雌性小鼠子宫及雄性小鼠精囊明显增重,Ｒｇ１也可使正常雄性小鼠精囊明显增重,但却不能阻止去势小鼠副性腺的萎缩。提示人参皂甙本身无性激素样作用,对副性腺的增重作用需要有性腺的存在     

三七皂甙对大鼠海马脑片缺氧保护的保护作用

采用大鼠海马脑片缺氧模型，从细胞水平上探讨三七皂甙（Ｒｇ１）对神经细胞缺氧损伤的保护作用及其机理。实验结果显示，Ｒｇ１能提高神经细胞的耐缺氧能力，并对神经细胞缺氧损伤具有明显的保护作用，其作用机制与Ｒｇ１拮抗钙离子内流和对抗谷氨酸的毒性作用有密切关系。     

三七皂甙单体Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:探讨三七皂甙单体Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:采用线栓法制成大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery ischemia reperfusion,MCA-IR)模型,将大鼠随机分为缺血再灌注组(模型组)、三七Rg1治疗组(Rg1组)和假手术对照组(假手术组).用原位末端标记法(TUNEL)检测皮层脑细胞凋亡,用免疫组织化学法检测胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)在脑细胞中表达,用酶联免疫吸附测定法(ELiSA)检测血清中TNF-α和PGE2水平.结果:与假手术组比较,模型组各时相点(再灌注0.5h、6h、12h、24h、48h和60h组)、皮层脑组织细胞凋亡数及cPLA2蛋白表达明显增强,血清中TNF-α和PGE2水平也明显增高(P<0.01);与模型组比较,Rg1组能明显降低皮层脑细胞凋亡与坏死,同时也能明显降低血清中TNF-α和PGE2水平及cPLA2在皮层脑细胞中的表达(P<0.05).结论:三七皂甙单体Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤确有良好的保护作用,其机理在于通过抑制或下调cPLA2蛋白表达及其相关介质水平.     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 4 0mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L- 1和 30 μmol·L- 1对BayK86 4 4和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P >0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用     

延胡索总生物碱对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察延胡索总生物碱对急性心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响.方法:采用左冠状动脉前降支结扎法复制急性心肌缺血大鼠模型,比较各组缺血区心肌细胞凋亡及bcl-2、bax和caspase-3基因表达的变化.结果:模型组的心肌细胞凋亡阳性率增多,与正常组比较P＜0.05:延胡索总生物碱高、中、低剂量组心肌细胞凋亡阳性率减少,与模型组比较P＜0.05.模型组bcI-2基因相对表达量减少,bax和caspase-3基因相对表达量增多,与正常组比较P＜0.01;延胡索总生物碱高、中、低剂量组bcl-2基因相对表达量增多,bax和caspase-3基因相对表达量降低,与模型组比较P＜0.05.结论:延胡索总生物碱高、中、低剂量具有抗急性心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡作用,该作用与调节凋亡相关基因的表达有关.     

三七总皂苷油水分分配系数及大鼠在体肠吸收动力学研究

目的:测定三七总皂苷(PNS)3种主要有效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的油水分配系数及其肠吸收情况。方法:采用经典摇瓶法测定3种主要有效成分的油水分配系数;采用大鼠在体肠吸收模型研究3种主要有效成分的肠吸收情况,考察其在小肠各段的吸收情况及药物浓度对吸收的影响。结果:三七皂苷R1(R1)、人参皂苷Rg1(Rg1)和Rb1(Rb1)的油水分配系数P分别为1.081 4,6.310 4,0.2743;logP分别为0.034 0,0.800 1,-0.561 8;PNS质量浓度0.2 g.L-1组R1,Rg1和Rb1的吸收速率常数(Ka)分别为(0.135±0.006),(0.144±0.015),(0.238±0.013)h-1;0.5 g.L-1组R1,Rg1和Rb1的Ka分别为(0.110±0.002),(0.110±0.006),(0.140±0.008)h-1,1 g.L-1组R1,Rg1和Rb1的Ka分别为(0.095±0.016),(0.099±0.011),(0.137±0.012)h-1,统计结果显示,0.2 g.L-1组Ka与0.5,1 g.L-1组有显著性差异(P0.01),0.5 g.L-1与1 g.L-1Ka无显著差异;Rb1Ka与R1,Rg1有显著性差异(P0.01);在十二指肠、空肠、回肠中,R1的Ka分别为(0.030±0.006),(0.033±0.004),(0.033±0.007)h-1,Rg1的Ka分别为(0.032±0.006),(0.044±0.012),(0.044±0.011)h-1,Rb1的Ka分别为(0.042±0.007),(0.065±0.007),(0.044±0.014)h-1,统计结果显示,不同肠段Ka无显著性差异。结论:根据经典理论,R1,Rg1和Rb1均不易吸收;PNS中3种成分Ka随浓度的增加而逐渐减小,0.2 g.L-1组Ka高于0.5,1 g.L-1组,Rb1的Ka高于R1和Rg1,PNS吸收除被动扩散外,可能还存在其他吸收机制;PNS在大鼠小肠各个肠段均有吸收。     

人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能机制。 方法 :采用PC12细胞为模型 ,以不同浓度的DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测PC12细胞的亚二倍体峰 ,按Griess法测定NO代谢产物NO2 ·的浓度 ,并观察人参皂甙Rg1(10 μmol/L)预防性给药对其影响。 结果 :0、0 15、0 30、0 45和 0 6 0mmol/LDA处理组的凋亡率分别为 1 6 1±0 18、40 6 0± 1 74、46 6 7± 1 45、5 4 49± 1 6 1和 6 4 39± 1 6 0 % ,与Rg1预防组 0 73± 0 11、1 16± 0 0 9、1 35± 0 0 7、1 5 3± 0 10和 1 6 1± 0 12 %比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;DA处理组的NO2 ·浓度分别为 1 82± 0 0 5、3 5 7± 0 0 2、8 82± 0 0 4、18 0 0± 0 0 7和 2 7 34± 0 0 9μmol/L ,与Rg1预防组的 1 0 0± 0 0 7、1 36± 0 0 7、1 2 5± 0 0 4、3 39± 0 11和 3 82± 0 11μmol/L比较亦都有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :NO生成增多可能是DA诱导PC12细胞凋亡的重要信号分子 ,人参皂甙Rg1可抑制NO生成 ,防止DA诱导PC12细胞凋亡     

舒胸片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的含量测定

目的建立舒胸片中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法。方法采用HPLC梯度洗脱法,使用C18柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,(0～5min,20%～25%乙腈;5～20min,25%～45%乙腈);ELSD漂移管温度70℃;氮气流速2.0L/min;柱温35℃。结果舒胸片中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1成分得到很好分离,线性关系良好,平均加样回收率:三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,人参皂苷Rb1分别为100.14%,99.77%和99.65%,RSD分别为1.07%,0.47%和1.06%。结论本法结果准确,便于操作,可作为舒胸片的质量控制方法之一。     

HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R_1和人参皂苷Rg_1、Rb_1的含量

目的:采用HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1的含量。方法:色谱柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱0～5min,乙腈20%～25%;5～20min,乙腈25%～45%;流速:1.0mL.min-1;柱温:25℃;漂移管温度:70℃;载气流速2.0L.min-1。结果:三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1进样量分别在0.3～1.5μg(r=0.9997),1.5～7.5μg(r=0.9998)和1.5～7.5μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.8%、102.1%、103.6%;RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%。结论:HPLC-ELSO法结果准确,便于操作,可用于通迪胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法同时测定定风止痛片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、Rb_1的含量

目的:建立定风止痛片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1的含量测定方法。方法:采用Hyper-sil ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;检测波长203nm,流速1.0mL.min-1,柱温20℃。结果:三七皂苷R1在1.02～10.15μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=4932.4X+21.78(r=0.9996),加样回收率为99.91%(RSD=1.18%,n=6);人参皂苷Rg1在3.82～38.24μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1415.9X+9.496(r=0.9998),加样回收率为100.08%(RSD=0.68%,n=6);人参皂苷Rb1在3.04～30.36μg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=3118.7X+2.913(r=0.9994),加样回收率为100.30%(RSD=1.45%,n=6)。结论:该法操作简便,结果准确,可以用于测定定风止痛片中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1含量,为定风止痛片的质量控制提供参考。     

高效液相色谱法测定黄七胶囊中人参皂苷Rg_1、Rb_1及三七皂苷R_1的含量

目的:优选流动相参数,建立高效液相色谱法(HPLC)测定复方制剂黄七胶囊中人参皂苷Rg1、Rb_1及三七皂苷R_1含量的方法。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以水为流动相B,考察最佳梯度洗脱参数。结果:最佳梯度为0~30 min,乙腈19→40,水81→60。在此条件下,人参皂苷Rg_1进样量在0.849 6~7.646 4μg,Rb_1在0.853 8~8.853 8μg,三七皂苷R1在0.202 0~2.020 0μg范围内皆与峰面积呈良好的线性关系。结论:该流动相梯度洗脱比例提高了峰面积和理论塔板数,并节省了时间。     

参麦注射液对脑出血大鼠神经细胞凋亡相关基因表达影响的实验研究

目的 :观察参麦注射液对大鼠脑出血后神经细胞凋亡相关基因的影响。方法 :采用Rosenberg法复制大鼠脑出血模型 ,测定脑出血后大鼠海马CA₁区神经细胞病理形态结构及其Bcl-2基因、Bax基因表达 ;结果 :参麦注射液减少大鼠脑出血后海马CA₁区锥体细胞凋亡数目 ,显著增加Bcl-2基因表达 ,降低Bax基因表达 ,使BaxmR NA/bcl-2 mRNA比率下降。结论 :参麦注射液能调节凋亡基因 ,减少大鼠脑出血后神经细胞的凋亡。     

三七皂甙对严重烧伤延迟复苏大鼠的肺血管通透性的影响

目的探讨三七皂甙对烧伤休克延迟复苏大鼠的肺血管通透性的影响以及对内皮素-1（ET-1）及其反馈调节的一氧化氮（NO）的调控。方法选用SD大鼠制备烧伤和烧伤休克延迟复苏模型，随机分为假烫组、烫伤组及治疗组。伤后24h检测肺脏含水量及血管通透性的变化，血浆中ET-1及NO的浓度水平。结果与烫伤组相比，治疗组大鼠的肺脏含水量、肺血管通透性及血浆中ET-1浓度均显著降低，而血浆中NO的浓度有明显增加。结论大鼠烧伤后，早期使用三七皂甙，能降低肺脏血管通逮性及含水量以及调控烫伤小鼠分泌ET-1及NO，有助于减轻脏器的水肿，从而减轻烧伤早期脏器损害。     

三七皂甙对心脑细胞缺氧损伤保护的实验研究

本文观察了三七皂甙（Rg1）对心肌细胞及大鼠海马CA1区锥体细胞缺氧损伤所致电生理变化的影响，结果显示Rg1对心肌细胞及海马锥体细胞的缺氧性损伤有明显的保护作用。     

脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的：探讨脂肝泰胶囊治疗高脂血症性脂肪肝的作用机制。方法：采用高脂饮食喂饲大鼠复制脂肪肝模型，以东宝肝泰为对照药，观察各组大鼠肝脏病理形态学变化，并运用流式细胞仪观察各组大鼠肝细胞凋亡及相关基因蛋白bcl—2和bax表达的变化。结果：HE染色镜下可见模型组大鼠肝脏中度以上脂肪变性，并有少量的肝细胞坏死；流式细胞术分析可见其细胞凋亡率为13．3％，bcl—2表达量降低，bax表达量增高。与模型组比较，各用药组肝脂变程度显著改善，肝细胞的凋亡率明显下降(P＜0．05或P＜0．01)，bcl—2基因表达量增高(P＜0．05)，bax基因表达量降低(P＜0．05)。结论：脂肝泰胶囊能使bcl—2蛋白表达上调、bax蛋白表达下降，抑制细胞凋亡趋势，以达到抗脂肪肝作用。     

HPLC法测定复方消脂胶囊中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1及三七皂苷R_1的含量

目的:建立复方消脂胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1含量的分析方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Phenomenex Luna C18(2)(4.6mm×250mm,5μm);流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B;柱温:27℃(70min时降为20℃);检测波长:203nm;流速:1.0mL.min-1。结果:三七中人参皂苷Rg1线性范围为1.88～11.28μg/mL,回收率为100.26%,RSD为1.56%;人参皂苷Re线性范围为0.294～1.764μg/mL,回收率为100.68%,RSD为0.64%;人参皂苷Rb1线性范围为1.76～10.56μg/mL,回收率为100.53%,RSD为0.58%;三七皂苷R1线性范围为0.376～2.256μg/mL,回收率为99.21%,RSD为1.38%。人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1四种成分均达到良好分离,在测定范围内线性良好,回收率均在99%～101%之间。结论:所建立的含量测定方法简便可行、重复性好,可用于复方消脂胶囊的质量监控。     

人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用

目的探讨人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用。方法神经元置于三气培养箱(85%N_2、10%H_2、5%CO_2混合气体)中用无糖细胞外液中培养1.5 h,构建氧糖剥夺,分为对照组、模型组、人参皂苷Rb_1组(0.2、2、20μmol/L)及人参皂苷Rb_1(20μmol/L)+LY294002(1μmol/L)组。采用LDH法和PI/FDA双染检测神经元活性和凋亡率,Western blot法检测神经元p-Akt表达。结果与模型组比较,人参皂苷Rb_1(2、20μmol/L)可显著降低神经元凋亡率、LDH释放(P0.05),人参皂苷Rb_1(0.2、2、20μmol/L)可显著提高神经元p-Akt表达(P0.05);与人参皂苷Rb_1组(20μmol/L)比较,人参皂苷Rb_1+LY294002组可显著逆转人参皂苷Rb_1对神经元凋亡、LDH释放的抑制作用,以及对p-Akt表达促进作用(P0.05)。结论人参皂苷Rb_1可经激活PI3K/Akt来减少OGD诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡。