植物中醛糖还原酶抑制剂的研究进展

醛糖还原酶抑制剂(ARIs)是治疗糖尿病并发症的重要药物之一。可通过抑制糖代谢的多元醇通路中的限速酶—醛糖还原酶的活性,减少体内山梨醇的蓄积,从而预防和延迟糖尿病并发症的发生和发展。AIRs可通过合成或从天然产物中分离得到。详细综述了近10年来从植物中分离提取的对醛糖还原酶有抑制作用的化合物及其药理活性,主要包括黄酮类化合物、酚类及其衍生物、萜类和生物碱等,它们在体外对醛糖还原酶均有不同程度的抑制作用,并对其发展前景进行了展望。     

醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立

目的:建立醛糖还原酶抑制剂筛选模型,提供筛选醛糖还原酶抑制剂的方法。方法:从大鼠晶状体中提取醛糖还原酶,设定10 mmol/L DL-甘油醛为底物,0.15 mmol/L NADPH为辅酶等条件建立初始酶促反应体系,维持其它条件不变改变底物浓度、辅酶浓度、反应温度和反应时间,选择酶活性峰值点建立模型,通过比较槲皮素与芦丁对醛糖还原酶的抑制作用检验此模型。结果:醛糖还原酶酶促反应体系组成:总体积1 ml,各反应液的终浓度分别为:DL-甘油醛10 mmol/L,NADPH0.15 mmol/L,缓冲液PBS的pH=6.2,120 mmol/L,醛糖还原酶提取物100μl,反应温度37℃,反应时间3 min。IR50槲皮素相似文献   

醛糖还原酶抑制剂对大鼠肾脏醛糖还原酶基因表达的影响

目的：观察醛糖还原酶抑制剂（ARI）依帕司他对大鼠肾脏AR mRNA水平和肾功能相关指标的影响。方法：运用在单侧肾结扎的基础上注射STZ的方法建立大鼠糖尿病肾病模型，给予醛糖还原酶抑制剂依帕司他灌胃4周，RT—PCR的方法检测各组大鼠肾皮质AR mRNA水平．观察依帕司他对AR mRNA是否有影响以及血清和尿液中尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）和总蛋白（TP）的变化。结果：给药组大鼠肾脏AR mRNA水平明显高于对照组（P〈0．05）；给予醛糖还原酶抑制剂依帕司他4周后，低剂量组（L组）、高剂量组（H组）AR mRNA水平低于模型对照组（M组）（P〈0．05），但L组和H组之间没有差别（P〉0．05）。结论：糖尿病肾病大鼠肾脏AR mRNA水平明显升高，说明AR与糖尿病肾病的发生有关：醛糖还原酶抑制剂依帕司他对糖尿病肾病大鼠肾功能没有影响，但可降低AR mRNA水平。     

高血糖对人红细胞醛糖还原酶活性的影响

目的研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）活性的影响。方法利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱层析法，将正常人、糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析。结果①高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约６～７倍；②糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；③高糖时醛糖还原酶不仅对多种底物的Ｋｍ值（包括葡萄糖）显著下降，而且对醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）的抑制不敏感。结论①高血糖时ＡＲＩｓ的用量需加大，才能取得满意的疗效；②（ＤＥ－５２）柱层析法测定红细胞ＡＲ活性准确、方便，可以作为判断糖尿病慢性并发症病情及评估醛糖还原酶抑制剂疗效的一项重要指标     

从龙蒿中生物导向分离醛糖还原酶抑制剂

〔英〕/Logendra S…∥Phytochemistry.-2006,67(14).-1539~1546龙蒿Artemisia dracunculus是药食两用植物,其乙醇萃取物对化学诱导的、且缺乏胰岛素的糖尿病小鼠和具有胰岛素抵抗的遗传性糖尿病小鼠具降血糖作用,还能增强胰岛素刺激的葡萄糖吸收,增加培养的肥胖大鼠骨骼肌细胞     

适用于中药醛糖还原酶抑制剂高通量筛选的细胞模型的建立

目的：建立一种适合中药醛糖还原酶抑制剂高通量筛选的细胞模型,以避免中药对传统离体筛选方法的干扰。方法：以视网膜周细胞、肾小球系膜细胞为研究对象,确定最佳孵育条件,并建立酶促微量反应法测定山梨醇含量,两者联动,建立细胞模型。结果：细胞孵育体系的最佳反应条件为30mmol·L^-1葡萄糖孵育4h;酶促微量反应测定山梨醇含量的精密度、重现性良好,山梨醇浓度变化与荧光强度变化呈线性正相关,山梨醇浓度在6.25×10^-6～2.5×10^-4mol·L^-1范围内线性关系良好。结论：该细胞模型能够排除中药对酶法测定醛糖还原酶活性的干扰,模拟体内的反应情况,使应用该模型进行的醛糖还原酶抑制剂筛选更具针对性,并适用于中药醛糖还原酶抑制剂的高通量筛选。     

Sorbinil 和Zopolrestat 对酵母工程菌中人醛糖还原酶活性的抑制作用

目的利用人醛糖还原酶基因(AR)及其与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合的酵母细胞表达模型,选用两种经典的AR抑制剂(ARI)-Sorbinil和Zopolrestat,初步观察模型在药物筛选方面的功能。方法复苏菌种并培养,在细胞培养液中加入ARI,观察细胞生长、GFP表达及荧光强度、AR蛋白表达及AR活性。结果 GFP荧光表达及AR蛋白的表达不受影响,但AR活性可被Zopolrestat抑制。结论 GFP标记的AR基因的酵母细胞模型可用于ARI的初步筛选,易重复,费用经济。Zopolrestat对酵母工程菌中表达的AR活性呈现出良好的抑制效应,可考虑作为该模型进行ARI筛选时的对照药物。     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病大鼠肾脏超微结构的影响

研究醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾脏病变的意义。利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了醛糖还原酶抑制剂ｓｏｒｂｉｎｉｌ对大鼠尿蛋白和肾脏超微结构的影响。结果：糖尿病鼠用ｓｏｒｂｉｎｉｌ治疗后尿蛋白呈下降趋势，肾小球基底膜厚度及系膜基质堆积明显减少。结论： ｓｏｒｂｉｎｉｌ对肾脏病变有明显疗效，使用醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾病将是一条有希望的新路。     

醛糖还原酶与糖尿病微血管并发症

葡萄糖代谢的多元醇通路由醛糖还原酶 (ＡＲ)和山梨醇脱氢酶共同构成。醛糖还原酶是该通路的限速酶 ,属还原型辅酶ＩＩ(ＮＡＤＰＨ)依赖型醛 -酮还原酶族 ,特异性较差 ,可催化多种醛还原为它们相应的醇 ,将Ｄ -葡萄糖还原为山梨醇 ,随后在山梨醇脱氢酶的催化下氧化为果糖。正常     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病SD大鼠神经传导速度的影响

利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了３种醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）Ｓｏｒｂｉｎｉｌ、黄岑甙、黄连素对大鼠神经传导过度的影响。结果发现糖尿病鼠用上述３种ＡＲＩｓ治疗后神经传导速度明显改善（糖尿病鼠为３８．４±３．５１ｍ／ｓ，３种ＡＲＩｓ分别为４５．６±５．５５ｍ／ｓ，４５．８±５．０２ｍ／ｓ和４２．０±３．７４ｍ／ｓ），结果提示ＡＲＩｓ对神经病变有效，使用ＡＲＩｓ防治糖尿病神经病变将是一条有希望的新路。     

醛糖还原酶在糖尿病肾病发病中的作用机制

糖尿病肾病(DN)的发病机制错综复杂,多元醇通路、蛋白激酶C、糖基化终产物、氧化应激等在DN的发生发展中起着重要作用。这些机制不是孤立存在的,它们相互影响、相互作用,共同参与了DN的发展。多元醇途径激活可能是慢性高血糖损害多种组织结构的启动和促进因素。而醛糖还原酶作为多元醇通路的关键酶,可能在其中起着重要的枢纽作用。     

氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的观察氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响，探讨氨基胍对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定；用生长期细胞进行实验，培养6d后测AR活性；应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处的吸光值测定醛糖还原酶活性。结果实验组氨基胍组醛糖还原酶的活性与对照组比较仅略下降，无显著性差异。结论氨基胍并不能明显地抑制腹膜间皮细胞醛糖还原酶的活性。     

一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的通过观察一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶（AR）活性的影响，探讨一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞（HPMC）的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定。第2-3代细胞用于实验。以硝普纳为一氧化氮供体，硝普纳（0．5mmol／L、1mmol／L、2mmol／L）＋1．5％葡萄糖培养液为实验组，以无一氧化氮1．5％葡萄糖培养液为对照组，观察剂量及时间对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响。应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处吸光值的下降表示醛糖还原酶活性。结果高糖状态下各浓度一氧化氮组醛糖还原酶活性均高于对照组，且醛糖还原酶活性随一氧化氮浓度的增加而增加；一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性随着时间的延长而逐渐增加。各时点一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性均高于葡萄糖组。结论一氧化氮以时间及剂量依赖的方式使腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性增加。     

醛糖还原酶(AR)基因对大鼠肾系膜细胞的转染及AR抑制剂对其增殖的影响

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染及AR抑制剂(ARI)对体外培养大鼠肾系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法应用Westernblot检测转基因MsC及PDGF作用MsC后AR的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比大鼠正常MsC和转基因MsC的生长情况,并观察ARI———Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子(PDGF)和小牛血清(NBS)促细胞增殖作用的影响。结果①Westernblot鉴定转基因MsCAR表达较正常MsC明显增高;②转染组较正常组生长速度快;③PDGF作用MsC后可上调AR的表达;④PDGF和10%NBS均可显著刺激两组细胞的增殖,ARI可部分抑制PDGF对正常组和转染组的促增殖作用,对10%NBS,ARI可部分抑制其对转染组的促增殖作用,而对正常组无显著影响,抑制作用呈剂量依赖性。结论AR可能参与了MsC在病理状况下的过度增殖过程。     

Association of C（-106）T Polymorphism in Aldose Reductase Gene with Diabetic Retinopathy in Chinese Patients with Type 2 Diabetes Mellitus

Objective To identify the possible association between C（-106）T polymorphism of the aldose reductase （ALR） gene and diabetic retinopathy （DR） in a cohort of Chinese patients with type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Methods From November 2009 to September 2010, patients with T2DM were recruited and assigned to DR group or diabetic without retinopathy （DWR） group according to the duration of diabetes and the grading of 7-field fundus color photographs of both eyes. Genotypes of the C（-106）T polymorphism （rs759853） in ALR gene were analyzed using the MassARRAY genotyping system and an association study was performed. Results A total of 268 T2DM patients （129 in the DR group and 139 in the DWR group） were included in this study. No statistically significant differences were observed between the 2 groups in the age of diabetes onset （P=0.10） and gender （P=0.78）. The success rate of genotyping for the study subjects was 99.6% （267/268）, with one case of failure in the DR group. The frequencies of the T allele in the C（-106）T polymorphism were 16.0% （41/256） in the DR group and 19.4% （54/278） in the DWR group （P=0.36）. There was no signit~cant difference in the C（-106）T genotypes between the 2 groups （P=0.40）. Compared with the wild-type genotype, odds ratio （OR） for the risk of DR was 0.7 （95% CI, 0.38-1.3） for the heterozygous CT genotype and 0.76 （95% CI, 0.18-3.25） for the homozygous TT genotype. The risk of DR was positively associated with microalbuminuria （OR=4.61; 95% CI, 2.34-9.05） and insulin therapy （OR=3.43; 95% CI, 1.94-6.09）. Conclusions Microalbuminuria and insulin therapy are associated with the risk of DR in Chinese patients with T2DM. C（-106）T polymorphism of the ALR gene may not be significantly associated with DR in Chinese patients with T2DM.     

苗药头花蓼提取物血清药理学研究方法的建立及验证

目的：建立并验证头花蓼提取物血清药理学研究方法。方法以大鼠为含药血清的供体,MTT法确定空白血清及含药血清对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)活性的影响,采用10 ng/mL脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞炎症损伤模型,Griess试剂法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的释放量,以确定体系中的血清添加量和大鼠取血时间。以NO、TNF-α为指标测定含药血清的抗炎活性。结果大鼠按人临床用药等效剂量的27倍给予头花蓼水提醇沉提取物,与模型组相比,体系中加入1.5%(V/V)末次给药后90 min的含药血清能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO (P<0.001)。同时,该方法制备的含药血清能够显著抑制细胞释放NO和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。结论本实验条件下制备的头花蓼含药血清具有明显的抗炎作用,该血清药理学方法可用于头花蓼提取物含药血清药效及作用机制研究。     

Chinese Herbal Medicine for Lung Cancer——A Critical Literature Review(Continued)

CLINICAL STUDIES Clinical studies on Chinese herbal medicine(CHM)in lung cancer(LC)have largely been on anumber of basic formulae selected by syndrome(Zheng)differentiation,or specific formula basedon clinical experience.There have also been anumber of studies comparing combination ofCHMs with either chemotherapy or radiotherapywith chemotherapy or radiotherapy alone,to as-sess any additional benefits or synergistic outcomesof the combination.     

基于斑马鱼模型的26种常见骨伤科中药材的毒性筛选

目的?利用斑马鱼毒性模型评价26种常见伤科中药材的安全性。方法?将受精后1d（1dpf）的健康斑马鱼胚胎置于不同浓度药味水煎液中,观察记录给药后1~5d的死亡情况,显微检视3dpf或以后斑马鱼幼鱼的形态,同时设置0.4%DMSO溶媒对照组。用SPSS16.0计算不同药味水煎液在6dpf的鱼半数致死浓度LC₅₀。结果?13种药味（续断、知母、乳香加没药、补骨脂、独活、牛膝、制何首乌、蛇床子、木香、土鳖虫、淫羊藿和五加皮）水煎液致斑马幼鱼脏器形态明显改变,毒性主要表现为卵黄囊肿大、变形、变黑,心包水肿、出血等,且它们的鱼LC₅₀值较低（16.9~689.7μg/mL）。其余13种药味（鹿衔草、千年健、苏木、巴戟天、龟甲、骨碎补、丹参、狗脊、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、女贞子、杜仲）,未见鱼脏器毒性,且致鱼死亡浓度高（在2000μg/mL以上）,较安全。结论?用斑马鱼模型成功的筛选了26种常见骨伤科中药的毒性,为骨伤科中药临床合理应用提供参考。斑马鱼模型具有简单、高效、实时动态的优势,使中药在体毒性规模化筛选成为可能。      

Effects of Chinese Herbal Medicine Serum on the Apoptosis of Sinoatrial Node Cells Induced by Simulated Ischemia-reperfusion

Objective:To study the effect of Chinese herbal medicine Kangxin Fumai Granule(康心复脉颗粒 Granule for heart diseases) serum on the primary cultured sinoatrial node(SAN) cell apoptosis induced by simulated ischemia-reperfusion(IR).Methods:The SAN cells removed from SAN tissue of neonatal Wistar rats were cultured and purified with differential attachment and 5’-bromodeoxyuridine(BrdU) treatment.Simulated IR model was adopted.The obtained cells were morphologically observed with inverted microscopy.By using the method of serum pharmacology,the cell apoptosis was measured with TUNEL staining qualitatively and with flow cytometry quantitatively.Results:Three kinds of cells were observed in the cultured SAN cells:spindle,triangle and irregular.The spindle cells comprised the greatest proportion.The SAN cells in the model group showed moderate positive brown staining in the nucleus,and the apoptosis rate increased significantly compared to that in the control group(P<0.01).While the SAN cells in the Kangxin Fumai Granule high-dose group did not demonstrated positive staining in the nucleus,and the apoptosis rate decreased significantly compared to that in the model group(P<0.05).Conclusion:Of the cells cultured from SAN,the spindle cells were pacemaker cells of SAN in rats.Blockade and/or inhibition of the SAN cell apoptosis might be one of the important mechanisms of Kangxin Fumai Granule in preventing and treating sinoatrial injury induced by simulated IR.