雌激素对培养新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨17β雌二醇（E2）对去甲肾上腺素（NE）诱导的培养心肌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法培养的新生大鼠心肌细胞分别给予NE（50μmol／L）、E2（10nmol／L）、NE（50pmol／L）＋E2（10nmol／L）作用48h,倒置相差显微镜和透射电镜观察心肌细胞形态结构的变化;DNA ladder和流式细胞术对心肌细胞凋亡情况进行定性和定量分析;免疫荧光细胞化学技术及半定量分析心肌细胞促凋亡基因c-fos的蛋白表达。结果E2抑制NE诱导的心肌细胞凋亡的特征性形态学改变如细胞萎缩,核染色质浓缩边集,线粒体肿胀,出现凋亡小体等;使凋亡心肌细胞特异性的DNA梯状条带消失;降低心肌细胞凋亡率并减弱凋亡心肌细胞内c-fos蛋白的表达。结论17β雌二醇可抑制去甲肾上腺素所诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与促凋亡基因c-fos的表达有关。     

培养大鼠心肌细胞阿片受体分型及其功能

本工作采用不合神经组织的体外原代培养大鼠乳鼠心肌细胞制备,研究了几种阿片物质对心肌细胞搏动功能的直接作用特点。我们的工作表明,除了神经组织,心肌细胞膜上也存在阿片类物质结合位点,具有一般受体特性,且以κ受体为主的多种亚型共存,在构型上有正协同作用,吗啡,α-CAO可以减缓细胞自发搏动频率,β-内啡肽和甲硫脑啡肽则提高搏动频率。纳洛酮有其对抗作用。提示阿片类物质可通过其特异性受体发挥对心肌细胞自发搏动功能的调控。     

胰岛素对新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨胰岛素在新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤中对细胞凋亡的影响。方法:通过给原代培养乳鼠心室肌细胞行缺氧2 h/复氧4 h,建立缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation)心肌细胞损伤模型。将培养心肌细胞随机分为:正常对照组(CON)、缺氧/复氧组(A/R)、缺氧/复氧+胰岛素组(I/R+INS)。于复氧4 h后,利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA)含量,原位末端标记法(TINEL)和DNA梯带法(DNA Ladder)检测细胞凋亡,并比较各组间差异。结果:与A/R组相比,A/R+INS可明显降低MDA、LDH值(P<0.01),抑制心肌细胞凋亡(P<0.01)。结论:胰岛素具有减少新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤作用,其作用机制与抑制细胞凋亡作用有关。     

TGF-β1对体外培养的大鼠心肌细胞肥大和凋亡的影响

目的： 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对大鼠心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法: 建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型。透射电镜观察心肌细胞形态。碘化丙啶（PI）染色标记法检测心肌细胞RNA含量。实时荧光定量PCR（Real time PCR）检测心肌细胞胚心基因肌球蛋白重链β亚型（β-MHC）的表达。TdT-FragEL染色检测心肌细胞凋亡。Annexin/7AAD双染法、直接免疫荧光标记法经流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率及心肌细胞中caspase-3水平。 结果: TGF-β1 刺激24 h后,心肌细胞β-MHC mRNA水平明显高于对照组（P<0.01）;PI染色结果TGF-β1组RNA含量明显增高,并呈剂量依赖性（P<0.01)。TdT-FragEL染色观察,TGF-β1可增加心肌细胞凋亡率（P<0.01)。与对照组相比,TGF-β1可明显上调心肌细胞中caspase-3（P<0.01）;TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡率增加（P<0.01）。透射电镜观察TGF-β1可诱导心肌细胞肥大和凋亡。结论: TGF-β1可同时诱导心肌细胞肥大和凋亡,诱导凋亡可能与caspase-3有关。     

Delta阿片受体激活对体外培养大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的:研究delta阿片受体激活对体外培养新生大鼠软骨细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法:体外分离培养新生大鼠软骨细胞,用delta阿片受体进行干预,MTT法测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡;免疫印迹分析caspase-3和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达水平.结果:delta阿片受体激动剂DADLE(1 μmol/L)可增强软骨细胞ERK蛋白的磷酸化,抑制软骨细胞凋亡,但这种现象可被delta阿片受体阻断剂Naltrindole(10μmol/L)所逆转,并且给予ERK特异性抑制剂U0126(10 nmol/L)亦可逆转DADLE抑制细胞凋亡的作用.结论:Delta阿片受体激活可抑制大鼠软骨细胞凋亡,其机制可能与激活ERK途径相关.     

牛磺酸对大鼠供心低温保存期间心肌细胞凋亡的影响

目的观察供心低温保存期间心肌细胞凋亡的发生和牛磺酸作为保存液成分对凋亡的影响。方法将40只SD大鼠随机分成对照组(单纯HTK液保存供心)和牛磺酸组(HTK液中添加15mmol/L牛磺酸)。每组的20只SD大鼠再分两个亚组,分别低温保存6h和8h各10只。利用电镜技术和原位末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡情况,以每一高倍视野下心肌细胞凋亡的阳性细胞数作为凋亡指数。结果各组均有凋亡心肌细胞出现,凋亡细胞的染色质边集现象明显,随保存时间延长,凋亡细胞增多,牛磺酸组的细胞凋亡指数明显低于对照组。结论大鼠供心低温保存期间有心肌细胞凋亡发生,牛磺酸作为保存液成分可减少凋亡的产生。     

吗啡持续刺激对小鼠树突状细胞成熟的影响

为研究吗啡持续刺激对C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响.体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞,在培养过程中给予吗啡刺激,应用流式细胞术检测细胞表型CD11c、Ia、CD86的变化.吗啡干预各组树突状细胞中细胞表型CD11c、Ia、CD86表达较对照组显著升高.吗啡持续刺激能够促进小鼠树突状细胞的...     

去甲肾上腺素对培养心肌细胞肥大和凋亡的作用

目的:研究不同剂量去甲肾上腺素(NE)对培养心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法:心肌细胞暴露于NE,观察心肌细胞形态变化,通过心肌细胞蛋白质含量、[3H]亮氨酸掺入率检测心肌细胞肥大;透射电镜、DNA Ladder和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果:1和10μmol/L NE可明显增加心肌细胞蛋白含量和[3H]亮氨酸掺入率,并有呈剂量依赖性升高的趋势;50μmol/L NE更可明显增加心肌细胞凋亡率;100μmol/L NE使心肌细胞凋亡率明显增高并出现超微结构改变和DNA梯状带纹。结论:低浓度NE主要诱导心肌细胞肥大,高浓度NE主要诱导心肌细胞凋亡,中浓度NE兼有两种功能。     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义（P〈0.001）。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究从中药槲寄生中制备的槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡机制。方法用经典的染色技术：流式细胞术、MTT法分析经分子生物学方法分离纯化的槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡形态特征,AP峰值和抑制肿瘤细胞增殖的抑制率以研究其诱导肿瘤细胞凋亡机制。结果槲寄生凝集素蛋白具有诱导肿瘤细胞凋亡和显著抑制和阻断肿瘤细胞增殖且以Caspase依赖的方式发挥其生物学作用的。结论槲寄生凝集素蛋白具有直接抗肿瘤作用,在肿瘤免疫学的基础和临床应用研究中具有前景。     

共固定化细胞因子诱导的HeLa细胞凋亡

利用光化学固定方法,将干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)共同偶联到高分子材料聚苯乙烯基板上,合成生物材料.从形态学、流式细胞仪定量、磷脂酰丝氨酸分析、Caspase活性四个方面进行研究.形态学和流式细胞仪研究结果显示,固定化(及游离)细胞因子都可以诱导HeLa细胞凋亡,而且发现游离细胞因子比共固定细胞因子发挥药效更快,但随着时间的增加,共固定化细胞因子的药效比游离的细胞因子更好、更持久有效.磷脂酰丝氨酸定量分析进一步证明了固定化细胞因子的长效活性.在Caspase-3活性研究中发现游离的药物处理后Capase-3活性的提高比共固定化药物处理后更明显,推测共固定细胞因子诱导的HeLa细胞的凋亡不仅存在Caspase依赖的通路,也可能存在caspase非依赖的通路.     

中枢NO-cGMP系统对大鼠吗啡戒断症状的影响

目的 :观察中枢NO -cGMP系统对大鼠吗啡戒断症状的影响。方法 :用皮下递增注射吗啡法建立吗啡依赖模型 ,腹腔注射纳洛酮催瘾。侧脑室注射 (i c v )不同药物 ,观察对大鼠叩齿、扭体、湿狗样抖动、舔阴茎、逃逸、体重丢失等吗啡戒断症状的影响。结果 :微量侧脑室注射 (i c v )NO的供体硝普钠(SNP)、NO的前体L -精氨酸 (L -Arg)、环磷酸鸟苷 (cGMP)以增加脑内NO的释放 ,激活鸟苷酸环化酶(GC) ,提高脑内cGMP水平 ,结果使吗啡戒断症状加重 ;相反 ,微量注射NO合酶 (NOS)抑制剂NG-硝基 -L精氨酸 (LNNA)及鸟苷酸环化酶 (GC)抑制剂甲基兰 (MB) ,使脑内NO生成减少 ,降低NO对GC的激活作用 ,脑内cGMP生成减少 ,则可使大鼠吗啡戒断症状减轻。结论 :NO -cGMP系统在产生吗啡戒断反应中具有重要作用。     

Effect of Potentiated Antibodies to Morphine on Behavioral Reactions in Rats with Morphine Dependence

We studied the effect of potentiated antibodies to morphine (10^-100 wt %) on self-stimulation of the lateral hypothalamus and behavioral reactions reflecting the severity of withdrawal syndrome in rats with morphine dependence. Repeated treatment with potentiated antibodies to morphine increased the rate of self-stimulation, suppressed active avoidance response, promoted freezing behavior after acoustic stimulation, and decreased tail-flick latency in rats after morphine withdrawal. Distilled water did not produce these changes.     

益精养血方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元Caspase-3表达的影响

目的研究益精养血方对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠多巴胺能神经元Caspase-3表达的影响。方法将微量6-羟多巴胺(6-OHDA)立体定向注射于SD大鼠中脑右侧黑质以建立大鼠帕金森病模型,将造模成功的实验动物随机分为模型组、实验(中药)组,每组6只;另纳入6只正常大鼠为正常组。正常组和模型组大鼠生理盐水灌胃,实验组大鼠益精养血方灌胃,各30天。灌胃结束两周后进行行为学检测,免疫组织化学方法观测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、Caspase-3的表达。结果实验组大鼠的旋转圈数比治疗前明显减少(P<0.05),实验组损毁侧与健侧黑质TH阳性细胞数量百分比较模型组显著提高(P<0.05),实验组损毁侧黑质Caspase-3表达的OD值比模型组显著降低(P<0.05)。结论益精养血方可使帕金森病大鼠多巴胺能神经元Caspase-3的表达降低,明显抑制神经细胞凋亡。     

活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响

目的探讨活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中所诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响。方法制作脑缺血再灌注模型，80只大鼠随机平均分为4组，假手术组、模型组、阿司匹林组、活血通脉汤组，每组20只。应用免疫组织化学方法分别检测每组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达的情况。结果模型组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显高于假手术组（P〈0．01）；活血通脉汤组大鼠各时间点脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01），且与阿司匹林组无显著差异性（P〉0．05）。结论活血通脉汤能降低大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达水平，减轻缺血脑组织神经元坏死的程度，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，机制与降低Fas、Caspase-3表达水平有关。     

大鼠脊髓半横断损伤后大脑皮质初级运动区caspase-3的表达

目的探讨大鼠脊髓半横断损伤（hSCI）后大脑皮质初级运动区（M1）神经细胞的凋亡情况。方法成年健康Wistar大鼠T8-9脊髓左侧半横断术后，用RT-PCR和免疫组织化学法检测各个时间点caspase-3mRNA的表达量以及阳性细胞的分布。结果手术组中左、右两侧M1区的caspase-3mRNA表达量与假手术组比较，在6h即显著上升，1d达到高峰，3d、7d、14d组下降，而在21d又略有上升；6h组M1区表达量右侧明显高于左侧。免疫组织化学显示阳性细胞主要集中在M1的多形细胞层、锥体层。结论大鼠脊髓半横断损伤后M1细胞凋亡在早期最为剧烈，不仅导致支配损伤侧的M1区细胞凋亡，同样也导致支配未损伤侧脊髓的M1区神经细胞凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对小鼠创伤性脑损伤后神经元凋亡及星形胶质细胞活化的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对小鼠脑损伤后伤侧皮质和海马神经元凋亡及星形胶质细胞活化的影响. 方法 36只小鼠随机分为对照组、生理盐水组、bFGF组,每组各12只.采用自由落体打击装置建立脑损伤模型,分别于建模后3d和7d取脑(每时相点6只),应用免疫荧光双标和免疫印迹法检测大脑皮质、海马神经细胞凋亡因子caspase-3的变化,以及大脑皮质中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达. 结果 bFGF组皮质和海马中caspase-3的表达比生理盐水组和对照组减少(P<0.05);bFGF组皮质中GFAP表达比生理盐水组和对照组增加(P<0.05);生理盐水组与对照组的caspase-3及GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05). 结论 bFGF能降低小鼠脑损伤后大脑皮质和海马caspase-3表达并增高大脑皮质GFAP表达,从而促进大脑皮质星形胶质细胞活化和抑制神经细胞凋亡.     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。