荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV DNA及其临床意义

乙型肝炎病毒 (HBV )感染的病原诊断及抗病毒疗效判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBVDNA的检测 ,HBVDNA是复制活动最直接和可靠的指标 ,而血清检查结果常不能反映其精液的感染状况。为了解乙型肝炎患者精液感染情况及传染性 ,采用荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 7例乙型肝炎患者精液HBVDNA作定量检测 ,现将结果报告如下。材料与方法一、标本来源及处理2 0 0 1年 6月～ 10月我院感染科门诊男性HBV感染者5 7例 ,年龄 2 0～ 4 0岁 ,平均 2 9.3岁。血清HBsAg均阳性。将精液置 37℃温箱内温化 30min。行精液常规分析 ,标本置 - 2…     

荧光定量PCR检测血清和外周血单核细胞中HBV DNA含量及其意义

通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测慢性乙型肝炎及肝癌患者血清和外周血单核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量,分析两者的相关性,阐述:HBV感染PBMC在乙型肝炎慢性化和向肝癌恶性转化中的作用。     

定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。     

PCR荧光定量检测血清结核杆菌DNA在临床的应用

结核病的诊断主要靠临床及X线影像资料,通过痰涂片诊断阳性率低,结核菌培养虽能诊断结核,但培养时间长,不能满足临床需要。PCR技术操作简单,出结果时间短,但目前主要应用在乙肝病毒和性病检测上。作者通过检测结核患者血清中的TB-DNA,或许能为结核病的早期诊断提供帮助。     

定量PCR检测血清中乙型肝炎病毒DNA及其意义

目的检测血清中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,并了解HBV感染的不同血清学指标组合相应的HBV DNA含量分布,以指导临床。方法 采用定量PCR和定性PCR方法,检测216份不同临床类型血清标本的HBV DNA,再用ELISA方法测定HBV-M,统计不同免疫指标组合的HBV DNA平均含量。结果病毒量分为高、中、低三度,大于107拷贝mL-1为高滴度:107-105拷贝mL-1为中等滴度;105拷贝mL-1以下为低滴度。60例HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA全部阳性,平均含量为1.9×108拷贝mL-1。51例HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)血清,HBV DNA平均含量为5.4×106拷贝mL-1;33例HBsAg(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为7.5×105拷贝mL-1;114例HBsAb(+)HBeAb(+)HBeAb(+)血清,HBV DNA平均含量为1.8×105拷贝mL-1。定性和定量PCR阳生率分别为59.3％和61.6％。两种方法相对符合率为94.5％。结论定量PCR可真实反应HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义。     

建立PCR—ELISA定量检测HBV DNA的技术

目的 建立一种敏感特异和精确的乙型肝炎病毒基因ＰＣＲ及其产物酶联杂交定量分析技术。方法 制备了一种与野生扩增片段等长的ＰＣＲ内参照;设计了一对ＨＢＶ基因组Ｓ区基因扩增引物,上游引物的５′－端用生物素修饰,可同时扩增长为３１９ｂｐ的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争ＰＣＲ产物中的野生片段和突变片段杂交,在同一反应管内,加入已知量内参照及待测ＨＢＶ ＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ含量。结果 灵敏度达到１０＾－３ｆｍｏｌ／Ｌ。在该法中,由于有ＰＣＲ过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制,因此具有很     

HBV DNA超敏定量检测试剂盒的性能验证

目的:验证天隆HBV DNA超敏定量检测试剂盒在cobas(R) Z480全自动荧光定量PCR分析仪上的检测性能,以评估其是否满足临床应用要求.方法:参考CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》和CNAS-CL02-A009《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》等相关文件,应用临床血清样本...     

应用荧光定量PCR检测细菌性脑膜炎病原体DNA的研究

目的应用荧光定量PCR检测细菌性脑膜炎病原体DNA,并对脑膜炎奈瑟菌进行基因分群。方法提取脑膜炎患者脑脊液和血标本中待检菌DNA,采用荧光定量PCR扩增ctrA、bexA、lytA基因,对ctrA扩增阳性标本及部分流脑菌株进行基因分群。结果 685份脑脊液标本中19份检出脑膜炎奈瑟菌、8份检出肺炎链球菌、2份检出b型流感嗜血杆菌DNA基因片段;2份血清标本脑膜炎奈瑟菌DNA基因检测均为阳性。对ctrA基因扩增阳性标本进行A、B、C、W135、X及Y分群,有18份为C群,3份为B群;部分健康人群携带的流脑菌株有14份为B群,2份为C群,1份为X群。结论荧光定量PCR灵敏性高,检测快速,可用于细菌性脑膜炎病原体的检测、鉴别及对脑膜炎奈瑟菌的分群。     

复合探讨PCR定量检测HBV方法的建立及临床应用

我们采用复合探针技术,设计、建立的实时、荧光定量检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方祛,对实验条件进行了优化,并对临床提供的２０２份血清标本进行ＨＢＶ ＤＮＡ检测,与ＥＬＩＳＡ方法结果进行比较。 一、资料与方祛 １ 资料：２０２份血清标本由重庆医科大学附属第一医院提供;ＨＢＶ标准质粒由军事医学科学院放射研究所配制,定量;仪器为ｉＣｙｃｌｅｒ自动荧光ＰＣＲ仪（美国ＢＩＯ－ＲＡＤ公司生产）;ＨＢＶ ＥＬＩＳＡ试剂盒由上海科华实业有限公司提供;特异性引物的设计和合成为根据Ｐｒｉｍｅｒ３软件,自行设计并合成了以下引物序列：…     

荧光定量聚合酶链反应和直接测序法检测乙型肝炎病毒逆转录区耐药变异的比较

目的 通过比较荧光定量聚合酶链反应(PCR)和直接测序法同步检测HBV逆转录区耐药变异情况,探讨直接测序法检测耐药在临床应用的可行性及其对制订挽救治疗方案的指导意义.方法 选择拉米夫定(LAM)和(或)阿德福韦(ADV)长期治疗出现应答不良的慢性乙型肝炎患者为研究对象.通过荧光定量PCR法和引入ntPCR技术的PCR产物直接测序法同步进行核苷类似物相关耐药的检测,分析基因变异耐药情况,比较两种方法检测结果.统计学分析采用SPSS14.0统计学软件处理.均数比较采用t检验,计量资料采用配对x2检验.结果 两种耐药检测方法在对LAM和(或)ADV相关耐药检测的一致性较高,差异无统计学意义.在对LAM与LAM和ADV联合/序贯治疗者中,与荧光定量PCR法比较,直接测序法检测的阳性率更高[分别为43.2%(10/42)对比38.6%(17/44)与66.7%(16/24)对比54.2%(13/24)],而漏检率更低[9.5%(2/21),19.0%(4/21);5.9%(1/17),23.5%(4/17)],其敏感性可能略优于荧光定量PCR,但差异无统计学意义.高载量组与低载量组比较,差异明显(x2=5.18,P=0.023),高载量组两种方法检测结果的一致性更好.而在低载量组,直接测序法具有更高的阳性检出率和更低的漏检率,其敏感性可能略优于荧光定量PCR,但差异无统计学意义.结论 直接测序法检测PCR产物,不仅特异性好,而且与荧光定量PCR耐药检测方法相比,其敏感性略高.此外,PCR产物经直接测序法检测可以获得HBV DNA rt区序列的全面信息.     

乙型肝炎病毒核酸两种PCR定量方法的比较

目的选用PCR-杂交酶免疫法和荧光能量转换PCR法,对它们在乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量分析中的灵敏度、特异性及稳定性进行比较研究,以便寻求一种较为精确的定量PCR法.方法分别用上述两种方法测定20份正常人和30份慢性乙型肝炎病人血清中HBV DNA的含量,在检测过程中,用罗氏Amplicor法作为阳性参照,衡量实验体系的稳定性.结果1灵敏度两种方法的灵敏度很接近,PCR-杂交酶免疫法为4×103拷贝/ml,而荧光能量转换PCR法为3×103拷贝/ml.2.特异性所有HBsAg、HBeAg、抗-HBs和抗-HBc均为阴性的血清,用两种PCR方法比较,结果相同,血清中HBV DNA均为阴性.3.稳定性重复实验结果表明,PCR-杂交酶免疫法优于荧光能量转换PCR法,它们的变异系数分别为31.33%和52 06%,两种PCR方法均显示出良好的线性关系.结论PCR-杂交酶免疫法是一种较为精确的定量PCR方法,可用于检测病毒DNA的复制情况,并对评价药物的疗效和疾病的转归,均有一定的帮助.     

分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量     

定量聚合酶链反应检测血清中HBV DNA及其临床应用

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因含量与干扰素治疗效果的关系，采用信号引物能量转移定量ＰＣＲ方法，检测了２５例慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者干扰素治疗前后的血清ＨＢＶＤＮＡ含量。结量显示，慢乙肝血清ＨＢＶ基因含量范围在１０４至１０１１拷贝／毫升之间；干扰素完全反应组治疗前血清ＨＢＶＤＮＡ含量（１０６．１３±２．４）显著低于（Ｐ＜０．０１）部分反应（１０７．８４±３．３）和无反应组（１０６．６８±４．８），表明血清ＨＢＶＤＮＡ含量与干扰素治疗效果有关，而与ＡＬＴ水平关系不明８显。研究结果提示定量检测ＨＢＶＤＮＡ是预测和评价干扰素治疗效果的重要指标之一。     

荧光定量PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体结果分析

目的了解延安市皮肤性病科门诊患者泌尿生殖道淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)及解脲脲原体(UU)的感染现状及其特点,为临床提供依据。方法采用实时荧光聚合酶链式反应技术(FQ-PCR)对784例患者的泌尿生殖道分泌物的NG、CT和UU核酸进行检测。结果 784例患者中,NG、CT和UU的阳性检出率分别为15.43%、34.69%和30.87%,女性UU感染率明显高于男性(P0.01),男性CT感染率明显高于女性(P0.05),NG感染率男性虽高于女性,但无性别差异(P0.05)。混合感染检出率为19.64%,其中CT+UU双重感染的阳性检出率最高,为10.20%。不同年龄感染情况显示,感染率以21~40岁年龄段最高。结论泌尿生殖道感染患者NG、CT和UU阳性检出率不尽相同,阳性患者大多年龄在青壮年时期,应作为性传播疾病防治工作中的重点对象。混合感染较为常见,临床应进行3种病原体的检测。     

数字PCR和荧光定量PCR诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究

目的建立用于布鲁菌检测的数字PCR技术,初步用小样本开展研究,比较数字PCR和荧光定量PCR的灵敏度差异,验证数字PCR作为急性期布鲁菌病诊断技术的可行性。方法选取符合我国急性期布鲁菌病诊断标准的20例患者的血清标本,分别用数字PCR和荧光定量PCR技术进行检测,初步比较2者在急性期布鲁菌病诊断中的灵敏度差异,并分析差异原因。结果20例急性期布鲁菌病患者血清样本中,数字PCR检测阳性20例,荧光定量PCR检测阳性0例。结论初步证实在急性期布鲁菌病患者血清标本检测中,数字PCR检测灵敏度高于荧光定量PCR,有良好的临床应用前景,但也存在一定局限性,尚须进一步扩大样本完成实验诊断技术临床研究,并进行多实验室验证。     

实时荧光定量PCR分析慢性丙型肝炎患者胸腺近期输出功能

目的观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测CHC患者的胸腺近期输出功能,并且比较TRECs含量与HCV载量的关系。方法利用实时荧光定量PCR方法检测22例CHC患者及16例正常人PBMCs中TRECs含量,用RT-PCR方法结合荧光探针的检测技术检测CHC组外周血血清中的HCVRNA。结果CHC患者中TRECs含量为(5.52±1.87)copies/103PBMCs,低于正常人TRECs水平(7.19±2.42)copies/103PBMCs,P<0.05;TRECs含量与HCV载量直线相关分析r=-0.427,P<0.05。结论CHC患者TRECs水平低于正常人,显示其胸腺近期输出功能明显降低,且与HCV载量呈负相关性。     

实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体

目的建立检测恙虫病东方体的实时荧光定量PCR(quantitative real-ti me PCR)方法。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,以克隆的56kD基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.999)。荧光定量PCR检测恙虫病东方体的灵敏度约为套式PCR的100倍,并且具有良好的重复性。用该定量PCR检测其它相关立克次体和病原菌DNA样本,检出结果均为0。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肺脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体出现最早和检出量最多,肝脏和肺脏次之。血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立的荧光定量PCR方法具有很高的特异性和敏感性,可用于东方体感染早期血样本的快速检测作恙虫病感染早期诊断,并且可以定量分析评价恙虫病东方体感染的程度。     

布鲁氏菌多重荧光定量PCR方法的建立与应用北大核心CSCD

目的探讨应用多重荧光定量PCR方法检测待检者血液、血清以及环境样本中布鲁氏菌的价值。方法根据149名待测者的就诊情况进行分类,其中疑似组75人、治疗组74人。对收集的环境和待检者的样本应用多重荧光定量PCR方法检测,结果进行统计分析。将3对引物、探针的目的基因克隆到PUC57载体上制作阳性标准品,进行灵敏度检测和标准曲线的绘制。结果通过对149名待检者的样本进行荧光定量PCR检测,单重、双重和三重方法的阳性率分别为79.2%、34.2%和27.5%。单重与双重,单重与三重荧光定量方法的阳性率差异均有统计学意义,χ^(2)值分别为55.42和73.42,P<0.05。布鲁氏菌属的单重荧光定量PCR结果生成的标准曲线为y=-3.7732x+43.188,R^(2)=0.9953,线性关系良好,最低检测范围为101 copies/μL。经过多重荧光定量方法检测的环境样本结果全部为阳性。结论单重荧光定量PCR方法灵敏度较好,建议与血清学方法联合使用对高危人群进行定期筛查,三重荧光定量方法可以在一次实验中既能完成属水平的鉴定又能区分牛种和羊种布鲁氏菌,对于环境样品具有良好的扩增效果,2种方法对于布鲁氏菌病的预防控制具有重要作用。