牙周膜肌成纤维细胞功能特点的体外研究

目的 体外实验研究牙周膜肌成纤维细胞（MFB）的作用特点。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）,采用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞向MFB转化。MFB为实验组,以hPDLFs为对照,连续培养两组细胞,按0、12、24、48、72 h共5个时间点终止培养收样。免疫细胞化学检测MFB标记物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况,检测实验组纤维粘连蛋白（FN）以明确细胞间接触作用情况。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测α-SMA mRNA、胶原（Col）ⅠmRNA、ColⅢ mRNA的表达情况,免疫印迹法检测α-SMA、ColⅠ蛋白的表达情况,用以比较两组细胞分泌细胞外基质情况。结果 实验组α-SMA持续稳定表达,从0 h开始表达均显著高于对照组（P<0.001）;细胞间FN阳性表达,提示MFB之间有细胞突触相互连接。从24 h开始,实验组ColⅠ、ColⅢ的表达均显著高于对照组（P<0.001）。结论 牙周膜MFB持续高表达α-SMA并且可能通过FN相互作用。MFB具有大量分泌细胞外基质的能力。     

三维培养的牙周成纤维细胞在循环张力作用下基质降解的变化

目的：研究培养在胶原胶中的牙周成纤维细胞受循环张力作用后胞外基质降解的变化。方法：植入牙周成纤维细胞的胶原胶受循环张力机械作用24h，应用组化染色、酶凝胶电泳和ALP、DNA分析，观察细胞受力后形态学变化，检测培养基及胶原胶中MMPs的表达变化、细胞的增殖、ALP活性的改变。结果：受力后，细胞沿应力方向排列，DNA含量增加，培养基中MMP-2的表达增加，ALP活性降低。结论：循环张力能改变细胞排列方向，促进了细胞增殖和胞外基质的改建。     

成纤维细胞、肌成纤维细胞与口腔黏膜下纤维性变

口腔黏膜下纤维性变(OSF)是一种慢性、进行性、具有癌变倾向的口腔黏膜疾病。近年来研究发现成纤维细胞(Fb),尤其是肌成纤维细胞(MFb)在OSF的发病中发挥重要作用。本文就Fb和MFb的联系、区别,OSF组织中Fb向MFb表型转化的机制,以及它们的功能与OSF的联系的最新研究进展进行综述,并得出了在OSF的治疗中可以探索以MFb为治疗靶点的治疗新理念。     

干扰素-γ对腭部瘢痕成纤维细胞的影响

目的:探讨γ干扰素对腭部瘢痕成纤维细胞的生物学作用。方法:以腭瘢痕成纤维细胞为研究对象,采用三维培养法,了解基因重组γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕组织中成纤维细胞的生长增殖、组织收缩等生物学活动的影响。结果:IFN-γ可以抑制腭部瘢痕成纤维细胞的生长增殖及三维培养的胶原纤维凝胶的收缩。结论:IFN-γ是创伤愈合与瘢痕形成过程中的一种负性调节因子,对减少瘢痕的形成及收缩具有一定的作用。     

成纤维细胞活化蛋白及其对肿瘤——宿主界面基质的降解和重建作用研究

成纤维细胞活化蛋白(FAP)是癌相关成纤维细胞的标志性产物之一,具有特殊的结构和生物学特性,在肿瘤—宿主界面基质的降解和重建中发挥重要作用,对肿瘤的浸润、转移及逆转具有重要意义。针对FAP进行干预为肿瘤生物学治疗提供了新的途径。     

机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达变化初探

目的 探讨在一定机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞常见炎症相关细胞因子的表达谱变化,初步明确机械压应力对牙周膜成纤维细胞炎症相关细胞因子表达的影响.方法 取健康恒前磨牙牙根中1/3牙周膜组织,采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为加压组(200 Pa持续加压)与未加压组培养24 h后,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、干扰素(interferon,IFN)-γ的mRNA表达量并与管家基因磷酸甘油醛脱氢酶进行对比.加压组与未加压组培养48 h后通过微球流式多因子方法检测上述细胞因子蛋白水平的表达量.结果 加压组人牙周膜成纤维细胞培养24 h后细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ mRNA相对表达量(分别为0.3633±0.0874、0.4200±0.0285、0.1697±0.0284、0.0983±0.0131、0.2840±0.0676及3.1067±0.2857)显著高于未加压组(分别为0.1173±0.0176、0.1691±0.0174、0.0117±0.0021、0.0243±0.0050、0.0000±0.0000及0.1433±0.0125),P＜0.05;加压组人牙周膜成纤维细胞培养48 h后细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ的蛋白表达量[分别为(18.21±1.01)、(1634.11±472.41)、(1461.47±50.53)、(20.71±2.52)、(884.11±118.86)以及(1461.47±333.37)ng/L也显著高于未加压组[分别为(5.32±4.97)、(373.56±155.92)、(679.11±141.42)、(4.32±0.73)、(3.56±0.92)及(204.11±35.36)ng/L],P＜0.05;IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IL-12的mRNA相对表达量及蛋白表达在两组中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙周膜成纤维细胞在持续机械压应力作用下可显著上调IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IFN-γ等炎症相关细胞因子mRNA及蛋白水平的表达,从而进一步影响局部牙周组织微环境.

Abstract：

Objective To investigate the changes of inflammation-related cytokine expression profiles in human periodontal ligament fibroblasts (hPDLF) under mechanical stress. Methods The periodontal ligament attached to the mid-third part of the fresh root of young premolars extracted for orthodontic treatment was scalped and removed hPDLFs were cultured by the method of digesting by Ⅰ -type collagenase combined with tissue adhering, and then isolated and purified by cells passages. hPDLFs were then divided into two groups, group with mechanical force and group without mechanical force and then cultured for 24 h. Employing cytokine-microarray analysis to assess, in a comprehensive manner compared to the hPDLFs culture system without a static force. The quantity of different cytokine-related genes in hPDLFs was analyzed by means of quantitative with the special primers of up-and down-regulated genes. The mRNA of inflammation-related cytokines was examined by real-time PCR, and the expression of the cytokines in hPDLFs detected by cytokine flowcytomix assay. Results The relative expression of interleukin (IL)-1β,IL-6, IL-8, tumor necrosis factor(TNF)-α, TNF-β and interferon(IFN)-γ mRNA in the hPDLFs with 24 h persistent-pressure (0. 3633 ± 0. 0874, 0. 4200 ± 0. 0285, 0. 1697 ± 0. 0284, 0. 0983 ± 0. 0131, 0. 2840 ±0. 0676 and 3. 1067 ±0. 2857) was significantly higher than the group without mechanical force(0. 1173 ±0.0176, 0. 1691 ± 0.0174, 0.0117 :± 0.0021, 0.0243 ± 0.0050, 0.0000 ± 0.0000 and 0.1433 ±0. 0125) ,P ＜0. 05. The cell culture supernatant cytokines expression of IL-1 β, IL-6, IL-8, TNF-α, TNF-βand IFN-γ after 48 h cultured [(18.21 ± 1.01), (1634. 11 ± 472. 41), (1461.47 ± 50. 53), (20. 71 ±2. 52), (884. 11 ± 118. 86) and (1461.47 ± 333.37) ng/L]was significantly higher than the group without mechanical force [(5. 32 ± 4. 97), (373.56 ± 155.92), (679. 11 ± 141.42), (4. 32 ± 0. 73), (3.56 ±0.92)and(204. 11 ±35.36) ng/L],P ＜0.05. The relative mRNA and protein expression of IL-2, IL-4,IL-5, IL-10 and IL-12 showed no significant difference between the both groups. Conclusions Persistent static mechanical force could regulate the expression of some inflammation-related cytokines. These upregulated cytokines may be invloved in remodeling of hPDLFs, bone resorption and periodontal microenvironment.     

骨形态发生蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子在异位和原位成骨中的作用

目的通过骨髓基质细胞（BMSCs）的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通过甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定细胞增殖水平,通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞的分化情况。将BMSCs与多孔磷酸钙（CPC）分别在含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液中复合培养,制成复合材料,一部分植入裸鼠皮下,观察异位成骨情况,另一部分植入Beagle犬的种植体周围骨缺损区,经过荧光标记观察原位成骨情况。结果含有BMP-2+bFGF的培养液促进BMSCs增殖和分化的能力最强。异位成骨情况：BMP-2+bFGF组的成骨量较其他组明显增加,其新骨形成百分比为48.79%±11.31%,高于单一BMP-2组（30.71%±10.85%）和bFGF组（27.33%±9.67%）以及对照组（10.65%±6.05%）。原位成骨术后12周,BMP-2+bFGF组的矿化沉积率高于其他组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论在促进成骨方面,BMP-2和bFGF共同作用优于单一因子。     

成纤维细胞生长因子及其受体在牙齿生长发育中的作用

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)及其受体-成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor recepters,FGFRs) 在组织、器官中发生发育和疾病的发生、发展过程中有着重要作用。本文主要介绍了FGFs和FGFRs在牙齿生长发育期间分别在上皮细胞和间充质细胞中的表达情况,及在上皮-间充质相互作用过程中FGFs/FGFRs信号的作用。 [关键词] 成纤维细胞生长因子 成纤维细胞生长因子受体 牙齿发育     

DHA对人牙龈成纤维细胞生物学活性及炎症因子表达的作用

目的 探索二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性及炎症因子表达的作用.方法 分别采用活死细胞染色法、荧光染色法、流式细胞术观察DHA对细胞活性、细胞形态、细胞周期的影响;DHA预处理HGFs后,利用...     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞作用的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是具有多种功能的多肽生长因子,在正常生理和病理过程中参与生长发育和组织损伤的修复过程.bFGF能促进创伤愈合和组织修复,促进组织再生,对神经元也有促进分化和营养作用.牙周膜细胞在牙周组织重建过程中起着重要作用.目前关于bFGF对牙周膜细胞作用的研究已取得了一定的进展,本文就此作一综述.     

口腔癌细胞Cal27外泌体对人正常牙龈成纤维细胞的生物学作用

通过将Cal27外泌体（Cal27-exo）与正常人牙龈成纤维细胞（NHGFs）共培养,测定共培养后NHGFs+Cal27-exo的增殖迁移能力及相关蛋白表达情况,探讨Cal27-exo对NHGFs的活化及生物学行为的影响。     

rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的：研究rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响，探讨细胞因子对病理性瘢痕的作用机制。方法：对病理性瘢痕成纤维细胞进行体外培养，采用倒置显微镜、MTT法、流式细胞术等方法进行观察、分析，研究rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞体外生长、增殖、细胞周期、Fas、Bcl-2表达的影响，数据用方差分析和q检验处理。结果：加入rhIFN-α后，细胞表现为生长趋势及增殖活性被明显抑制，S-G2-M期细胞百分数明显降低，Fas、Bcl-2蛋白表达量分别显示升高和降低。结论：rhIFN-α对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用，可促进成纤维细胞凋亡。提示rhIFN-α是成纤维细胞负性调节因子，在病理性瘢痕的治疗中有一定的应用价值。     

沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响

目的 探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法 使用小干扰RNA (siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹（Western blotting）实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）来源脂多糖（LPS）模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-8的表达。结果 siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低（mRNA表达,t=21.03,P<0.000 1;蛋白表达,t=12.8,P<0.001）。在炎症环...     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响

目的：观察基因重组入碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF)牙龈成纤维细胞（GF）、人牙周韧带成纤维细胞（PDLF）及人牙槽骨细胞（ABC）的增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白含量及对3种细胞矿化结节形成能力的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶测定法、考马宙蓝法及茜素红染色法。结果bFGF能促进3种细胞的增殖,但对PDLF和ABC的ALP活性,蛋白含量及矿化结节的形成有抑制作用。结论bFGF可促进细胞的增殖,抑制细胞的分化成熟,从而促进牙周再生。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

成纤维激活蛋白在口腔癌间质成纤维细胞中的表达及意义

目的探讨成纤维激活蛋白在口腔鳞状细胞癌(OSCC)间质成纤维细胞中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集存档的OSCC石蜡组织标本80例,以正常口腔黏膜(5例)、癌前病变(5例)为对照,制作组织切片后,以LsAB法行FAP免疫组化染色。结果成纤维激活蛋白在正常口腔黏膜和癌前期病变的间质成纤维细胞中表达阴性;在口腔鳞状细胞癌间质成纤维细胞中阳性表达,在口腔鳞状细胞癌组,随着细胞分化程度的逐渐降低,成纤维激活蛋白平均染色阳性标本百分率均有逐渐升高的趋势(P<0.01),且与口腔癌颈淋巴结转移的发生呈正相关(P<0.01)。结论FAP在口腔癌间质成纤维细胞中的表达可作为判断口腔鳞状细胞癌恶性程度的指标之一,成纤维激活蛋白可能在促进口腔癌侵袭转移中发挥重要作用。     

二十碳五烯酸对人牙龈成纤维细胞生物学活性及炎症因子表达的影响

目的:探索二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性及炎症因子表达的作用.方法:分别通过活-死细胞染色、免疫荧光染色、流式细胞术观察EPA对HGFs细胞活性、形态、细胞周期的影响,采用牙龈卟啉单胞菌(P...     

动态张应力对人牙周膜成纤维细胞MMP-9 mRNA合成的影响

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）是一组锌依赖蛋白酶，以酶原形式分泌，主要参与细胞外基质降解、转运和组织重塑，具有降解和变性Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原明胶的特异能力，也可切割天然Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅺ型胶原。我们对其在动态张应力作用下的合成与表达进行了研究。