花生矮化病毒株系致病力分化及区域分布

从河南、北京、山东、河北的花生、刺槐、菜豆、紫穗槐上获得的２９个ＰＳＶ分离物，根据它们引起花生症状的严重程度划分成强、中、弱致病力三种类型。不同致病力类型的ＰＳＶ分离物在叶片中病毒相对含量及对花生产量影响有明显差异。河南开封和郑州ＰＳＶ分离物以弱致病力类型为主，河北迁安和滦县ＰＳＶ分离物以强致病力类型为主，而北京、山东两地ＰＳＶ分离物３种类型均有     

贵农21与P38的SDS—PAGE蛋白质图谱及RAPD分析

利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白质电泳及ＲＡＰＤ技术对贵农２１（ＧＮ２１）和Ｐ３８两个材料进行分析,发现Ｇ２１、Ｐ３８和它们的亲本的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白质图谱表现出一些差异。在ＲＡＰＤ分析中,ＧＮ２１和Ｐ３８在１４４个引物的扩增中,有１０１个引物都扩增出特征带,其中有６个引物在ＧＮ２１和Ｐ３８的ＲＡＰＤ图谱中有差异。     

SDS－PAGE在小麦育种中的应用

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）在小麦育种工作中主要被用来确定小麦品种的烘烤品质，此外还有很多其它的用途，目前在小麦育种工作中已被广泛应用。根据我国的实际情况和我们长期的工作经验，本文系统地介绍了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ在小麦育种工作中的应用及一些新的育种方法。     

应用ELISA法分析PVA单克隆抗体的反应

应用ＥＬＩＳＡ法分析ＰＶＡ单克隆抗体的反应王新伟，滕伟丽（黑龙江省农业科学院马铃薯研究所克山１６１６０６）１前言ＰＶＡ是世界性分布的植物病毒，它在大多数马铃薯生产国家中产生极大的经济损失．目前，在捷克共和国有大量的马铃薯样品通过常规的ＥＬＩＳＡ对包括...     

十省（区）大豆病毒毒源分析

采自５省（区）大豆病毒病样本６１份，经汁液接种鉴别寄主鉴定以及免疫双扩散测定，大豆花叶病毒（ＳＭＶ）单独侵染的样本３９份，黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）单独侵染的样本１２份，ＳＭＶ和ＣＭＶ复合侵染的有７份。从１０省（区）获得的大豆病毒病种子传毒率为２．７０％－１４．６８％，生物测定和血清学测定（免疫双扩散或ＥＬＩＳＡ）的种传样本４４个均为ＳＭＶ。选择各地有代表性的ＳＭＶ典型症状分离物，在电镜下观察粒子长度     

快速ELISA法鉴定马铃薯病毒

本用三种方法鉴定马铃薯病毒，第一种方法的为常规ＥＬＩＳＡ法，第二种和第三种均为快速ＥＬＩＳＡ法。三种方法的阳性率和灵敏度一致，快速ＥＬＩＳＡ法的精密度高于常规ＥＬＩＳＡ法，快速比常规组可节约时间约１０ｈ，该法适合大量，快速检测样品的需要。     

甘蔗花叶病毒的提纯及抗血清制备

以ＳｃＭＶ－Ａ为材料，采用ＰＥＧ沉淀结合差速离心技术，经１０￣４０％蔗糖密度梯度离心后再经浓缩后即为提纯病毒制剂。该提纯病毒具有典型的核蛋白吸收曲线，最大紫外吸收值在２５７ｎｍ处，最小紫外吸收值为２４０ｎｍ，Ａ２６０／２８０＝１．６８，病毒产量可达１．２５－１．３７ｍｇ／ｋｇ，将提纯病毒免疫家兔制备抗血清，所制备的抗血清经Ａ蛋白酶联免疫吸附法测定，其效价为１／１０２４，且可用于检测甘蔗花叶病毒。     

快速ELISA法鉴定马铃薯病毒

本文用三种方法鉴定马铃薯病毒，第一种方法为常规ＥＬＩＳＡ法，第二种和第三种均为快速ＥＬＩＳＡ法。三种方法的阳性率和灵敏度一致，快速ＥＬＩＳＡ法的精密度高于常规ＥＬＩＳＡ法。快速组比常规组可节约时间约１０ｈ，该法适合大量、快速检测样品的需要。     

抗菌肽B基因的点突变及在昆虫细胞中的表达

抗菌肽Ｂ基因经ＰＣＲ定点突变技术改造后,克隆到杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ中的信号肽位点上,随后与野生ＡｃＮＰＶ－ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,经空斑筛选、ＰＣＲ检测证实获得含该基因的重组病毒。重组病毒在Ｓｆ９细胞中扩增并表达抗菌肽Ｂ基因。取含表达产物的细胞培养液检测其生物活性表明：改造过的抗菌肽Ｂ基因在Ｓｆ９细胞中获得初步表达,且表达的分泌型产物对ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＫ１２Ｄ３１有抑菌活性。     

PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。     

马铃薯卷叶病毒的鉴定与提纯

自东北农学院育种试验地的马铃薯植株上所分离的14个具有卷叶症状的病毒标样经生物鉴定、蚜传特性、粒体形态和血清反应等鉴定均为PLRV。分离物85-1在曼陀罗上繁殖,经PEG沉淀,两次差速离心和蔗糖梯度离心后的得毒率为0.1mg/kg材料。提纯材料以接种后4～6周的曼陀罗最好。     

Purification of potato leaf roll virus and an evaluation of methods for its diagnosis

To evaluate four diagnostic methods for potato leaf roll virus (PLRV), an antiserum was prepared against a virus preparation purified from infectedDatura stramonium L. by an exudation method. The antiserum had a titer of 1:64 in microprecipitin tests. In a procedure developed subsequently PLRV was purified by a method that involved grinding liquid nitrogen frozen stems, petioles, and veins from different solanaceous hosts. A chloroform and n-butanol clarification was done followed by two cycles of differential centrifugation. On sucrose gradients, these preparations formed one band containing spherical particles 25 nm in diameter. In Ouchterlony double-diffusion plates, the antiserum reacted positively with virus preparations from frozenPhysalis, Datura or potato tissue partially purified by two cycles of differential centrifugation. No visible reaction was obtained between the antiserum and the virus preparation from density gradient centrifugation. Antiserum neutralized infectivity of 40–50% of the virions in a partially purified preparation. No virus peak was detected in the scanning patterns obtained after a mixture of antiserum and virus was centrifuged on a sucrose density gradient. A few virus particles were seen attached to serologically specific grids. Methods to diagnose PLRV in infected potato tubers were then compared. In the first, aphids were used to acquire the virus from tuber sprouts. They transmitted the virus to 100% of thePhysalis test plants. Results of the second method, visual inspection of symptoms on potato plants, were similar to those of the first method. Sarkar’s electron microscopic method and immuno-specific grids were less efficient than aphid transmission to diagnose PLRV in tuber sprouts. The low virus concentration in infected tissue made these last two methods unreliable.     

建兰花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

通过间接酶联免疫检测和电镜观察对从福建省漳州市采集的卡特兰病样进行检测,证明样品感染了建兰花叶病毒。设计一对特异性引物,扩增并克隆病毒分离物的外壳蛋白基因,随后将目的基因插入pET-29a（＋）中构建相应的原核表达载体。目的蛋白经诱导表达及纯化后免疫家兔并获得了特异性抗血清。Westernblot检测结果表明,抗血清与诱导表达的CyMV外壳蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫法检测结果表明,抗血清可检测病汁液的最低稀释度达1∶51200,最佳工作浓度为1∶1000,病汁液灵敏度为0.39mg/mL,而与TMV等11种同源或异源病毒均无明显的血清学交叉反应。     

辽宁省玉米矮花叶病毒原鉴定及cDNA克隆与序列分析

田间采集玉米矮花叶病标样，常规摩擦接种检测，几个分离物寄主范围局限于禾本科植物，可汁液摩擦、蚜虫(棉蚜和桃蚜)传毒、种子带毒(带毒率3%)。病叶汁液体外稳定性测定稀释限点(DEP)为10^-3～10^-4、失毒温度(TIP)为55～60℃、体外存活期(LIV)为1～2d。病毒粒子线状约430～750×13～15nm，病叶超薄切片内可见风轮状、环状内含体。病毒提纯制剂紫外最大吸收为262nm，最小吸收为245nm，A260/A280=1.2，病毒提纯制剂制备抗血清与MDMV-B(对照为北京分离物)和所采集的其它分离物均呈阳性反应。以朝阳、大连两分离物病毒RNA为模板，按文献报道的MDMV-B外壳蛋白(CP)基因序列合成引物反转录PCR，cDNA序列分析表明，和已报道的MDMV-B外壳蛋白基因序列同源率达98.7%，推导的氨基酸序列存在2个氨基酸差异，其同源率为99.4%。通过病原鉴定及病毒外壳蛋白基因克隆与cDNA序列分析，结果认为引起辽宁地区玉米矮花叶病的病原病毒是MDMV，其流行株系为B株系。     

广州香蕉束顶病毒分离和核酸鉴定

经液氮冷冻、差速离心和蔗糖梯度离心，从广州地区香蕉束顶病株中获得大小为25nm的病毒颗粒，该病毒与香蕉束顶病毒单克隆兔抗血清呈阳性反应，该病毒核酸可被Dnase和S1核酸酶降解，但不能被RNase降解，属于ssDNA ；人子量大小约为1165碱基。     

Henbane mosaic potyvirus pathogenic to wild and cultivated potato

Summary A virus isolated from severely diseased wild plants ofDatura stramonium in Hungary was identified as a strain of henbane mosaic potyvirus (HeMV) by its host range, vector transmissibility, electron microscopy and serology. This W/H isolate of HeMV induced necrotic local lesions onChenopodium quinoa and characteristic systemic symptoms in species ofDatura, Nicotiana andPhysalis but it was apathogenic to species ofCapsicum, Cucumis andPhaseolus. The virus is transmissible by aphids,Myzus persicae, in a non-persistent manner. Electron microscopy showed that it consisted of flexuous filaments, c. 180×12 nm. In plants ofDatura andNicotiana spontaneously infected by and artificially inoculated with HeMV-W/H, pinwheel structures typical of the potyvirus group were found. Serological examinations confirmed the identity of HeMV-W/H with the standard strain of the virus, HeMV-R. Plants of the potato cultivars Désirée and Gracia, graft-inoculated with HeMV-W/H, were latently infected. Inoculated plants of wildSolanum species responded to the virus with systemic symptoms.     

海南黄灯笼辣椒顶死病病原病毒的分离鉴定

从海南省黄灯笼辣椒顶死病株上分离纯化得到一个病毒分离物.研究结果表明,该病毒分离物能通过汁液磨擦接种侵染供试植物中的4科11种植物,可由桃蚜传播;提纯病毒粒子呈球形,直径28～30 nm,外壳蛋白分子量约为28 ku;分离物与CMV抗血清在ELISA测定中呈阳性反应;提取病毒分离物RNA,应用RT-PCR方法克隆了病毒外壳蛋白（CP）基因.CP基因675 bp,编码218个氨基酸.对CP基因序列分析表明,该病毒分离物的CP基因核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ分离物的同源性均在92.1%以上,所推导的氨基酸序列同源性在96.3%以上,而与亚组Ⅱ分离物的核苷酸序列同源性均低于77.3%,所推导的氨基酸序列同源性均低于80.7%.据此将该病毒分离物鉴定为黄瓜花叶病毒,归属于亚组Ⅰ.     

辣椒环斑病毒提纯及抗血清制备

为获得高效、灵敏的辣椒环斑病毒（Chilli ringspot virus,ChiRSV）多克隆抗体,通过差速离心、密度梯度离心等方法首次对辣椒环斑病毒进行了分离纯化,并将获得的高纯度病毒粒子用于免疫新西兰大白兔,制备了该病毒的多克隆抗血清。获得的抗血清经间接法酶联免疫吸附测定（ID-ELISA）,效价高达1 ∶ 125 000,且特异性高,与黄灯笼辣椒中另一种亲缘关系很近的同属病毒辣椒脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）不发生血清交叉反应、可有效鉴别这2种Potyvirus病毒。获得的抗血清可用于ChiRSV的检测及后续实验,最适工作浓度在1 ∶ 5 000~1 ∶ 25 000之间。