圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用

在过去34年的圈养大熊猫种群保护工作中,我们成功建立了全球最大的大熊猫精子库,目前已保存50只大熊猫个体总计7 000余支细管冷冻精液(冻精)。冷冻精液一方面可以使物种的遗传资源得到长久保存,另一方面可以通过人工授精的方式促进种群繁育。但是,圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用尚未有明确报道。本研究首先根据成都大熊猫繁育研究基地2000—2014年冷冻精液人工授精数据,对比分析了冻精人工授精个体和圈养种群的遗传多样性。结果显示,冻精人工授精个体遗传多样性均高于同年圈养种群的平均遗传多样性,表明在繁殖年份中冻精人工授精可以显著提高圈养大熊猫种群的遗传多样性。统计精子库中所有冻精个体的平均血缘系数并与圈养种群进行对比分析,探究冷冻精液对圈养种群遗传多样性的潜在作用。结果显示,精子库中有21只已死亡个体的精液,其中有66.67%的个体平均血缘系数低于圈养种群;有14只20岁以上个体的精液,其中有50.00%的个体平均血缘系数低于圈养种群;另有15只20岁以下个体的精液,其中有53.33%的个体平均血缘系数低于圈养种群,表明冷冻精液对圈养种群遗传多样性的保护具有重要价值。综上所述,冷冻精液不但有效保存了大熊猫遗传资源,而且在保护圈养种群遗传多样性方面具有积极的促进作用。     

大熊猫精液超低温冷冻的比较

对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的9只雄性大熊猫电刺激采精,比较研究了稀释液中甘油含量、精液离心、不同稀释液和冷冻方法对大熊猫精液超低温冷冻保存后的活力、运动状态和顶体的影响。稀释液中甘油的含量为4％－5％较好,冻精解冻后的活力和顶体的正常率能保持鲜精的一半。离心和未离心的精液经超低温冷冻,解冻后的活力和运动状态都较接近。TEST和SFS两种稀释液的效果没有明显的差异。细管的冷冻过程较颗粒方便、快捷,时间容易控制,是一种较好的超低温冷冻精液的方法。     

平衡时间、冷冻方法及解冻程序对马精液冷冻效果的影响

精液平衡、冷冻及解冻是冻精制作过程中三个必不可少的环节,对精液冷冻效果起着决定性作用。在马(Equus caballus)精子冷冻中针对这三个过程的研究较少,为进一步优化马精液冷冻方法,提高精液冻后质量,本研究比较不同平衡时间、冷冻方法及解冻程序对冻融后精子运动参数、质膜完整性及线粒体膜电势的影响。平衡120 min、180 min和240 min组冻融后精液活力及质膜完整性明显高于平衡0 min、45 min、90 min及8 h平衡组;距离液氮面2 cm和4 cm高度熏蒸冷冻获得了与程序冷冻仪冷冻法相似的冷冻效果;采用高温瞬时解冻法(75℃7 s和46℃20 s)比常规方法(37℃30 s)获得了更高的冻后精液活力(P0.05)。综合上述结果,在马精液冷冻过程中综合采用120~240 min平衡,距离液氮面2~4 cm熏蒸法和高温瞬时解冻法(75℃7s和46℃20 s)可获得更好的精液冷冻效果。     

大熊猫精子37℃温育时间对其质量的影响

选用活率、运动速度、活力这三个指标对37℃下温育的大熊猫新鲜精液每隔15 min做一次镜检和质量评估.运动速度从第45 min后开始大幅降低(P＜0.05),105 min时活率开始显著降低(P＜0.05);0～45 min内活力为78.8%～75.5%(P＞0.05), 60～90 min内活力为69.5%～64%,变化显著(P＜0.05);90～120 min内活力及运动速度均显著降低(P＜0.05).认为37℃温育时间应该控制在75 min以内;45 min以内精子运动速度、活率、活力处于最佳状态,此时段为首选输精时间.     

激光辐射奶牛冷冻精液对精子诱变效应的研究

为了探索激光辐射精子的诱变效应,本试验采用ＴＳＴ（Ｔｒｉｐｌｅ Ｓｔａｉｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ,即精子三重染色法）、ＳＰＡ（Ｓｐｅｒｍ Ｐｅｎｅｔｒａｉｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ,即精子穿透分析法和ＣＡＳ（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ,即精子单倍染色体制备技术）,三项有关精子的现代分析技术,对激光辐射精子的受精学、遗传学效应进行了研究。结果表明：Ｈｅ－Ｎｅ激     

大熊猫精液品质的研究：精子和非精子的细胞成分超微结构观察

本文对刚接近性成熟大熊猫的精液在电子显微镜下进行精液品质鉴定,观察结果,除少量完成变态的精子外,多数是处在精子发生的各阶段并发育不正常,精液中伴随着大量巨噬细胞和被吞噬的衰亡精子及其碎片。镜检结果不仅说明这只雄性大熊猫性尚未成熟,其生殖系统可能还伴有生理或病理现象,这样的精液建议不能用于配种。     

藏酋猴精液深低温冻存的研究──不同的冷冻程序、冷冻稀释保存液冻存效果的比较

以存活率（ＳＲ）、复苏运动度（ＲＭ）、ＳＰＡ为精子活力检测指标，对四种冷冻程序ＰＳＦ、Ｈ３Ｐ、ＬＰ、ＭＤＰ和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴（Ｍａｃａｃａ ｔｈｉｂｅｔａｎａ）精液冻存比较研究。 ＰＳＦ的ＳＲ为９０．１±１．９％，ＲＭ为６３．８±２．８％，显著高于其他三种冷冻程序（Ｐ＜０．０１）。卵黄冷冻稀释保存液（ＭＤＭ）的ＳＲ（９５． ４±１．３％）和ＲＭ（８８．０±１０．２％）显著高于无卵黄防冻液（ＦＣＳ－Ｇ／ＴＨ）的ＳＲ（９０．１±１．９％）和ＲＭ（６３．６±２．８％），但前者在复苏一小时后，ＲＭ（１２．５±１．６％）明显低于后者的ＲＭ（５４． ７±２． ２％）。用 ＦＣＳ～Ｇ／ＴＨ冻存的精液经 ＳＰＡ检测，其穿透率为新鲜精子的 ５１． ９％。结果提示：１）慢速降温冷冻程序适于藏酋猴精液冻存；２）卵黄冷冻稀释保存液能较好地保存藏酋猴精液的活动度；而无卵黄防冻液则有利于延长其冷冻精子的运动寿命。这可能与两者的稀释液及所含的脂蛋白不同有关。     

季节与采精频度对大熊猫精液品质的影响

对成都地区8只成年雄性大熊猫的采精季节和采精频度进行研究,结果提示大熊猫精液品质有显著的季节差异,12、1、6月虽能采集列精液,但品质较差,2、5月适中,3、4月份的精液品质最好;采精频度以间隔14天为最佳,7、21天次之,28天最差。     

冻存液添加维生素B12,解冻液添加BSA及肝素对大熊猫精子的影响

大熊猫冻精的解冻活力一直徘徊在35%左右,顶体完整率低于40%,较大地影响着人工授精的成功率。本文通过在冻存液中添加维生素B12和在解冻液中添加BSA及肝素,以提高冻精活力和顶体完整率进行了实验研究,结果表明:(1)冻存液中添加维生素B121mg/ml,使精子顶体完整率从76.66%提高到83.34%(P<0.05);(2)选用美国Hyclone公司的M199、Ham's F-10液和Irving Scientific公司的两种Ham's F-10液(代号168、175)共4种解冻液,均添加5%的FBS进行比较实验,其中以Irving Scientific公司的Ham's F-10(175)对提高解冻精子质量效果最好,精子活力达到74.7%±2.706%,运动速度(SOP)为3±0.82(P<0.05);(3)解冻液中添加高浓度BSA对精子的运动速度有明显提高(P<0.05),而添加低浓度BSA对精子的影响不显著;(4)解冻液中添加肝素对精子活力及运动速度的影响均不明显(P>0.05)。     

秦岭大熊猫精液的细管冷冻保存

2008年3月1日至4月27日和2009年3月3日至5月1日,在陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心对处于繁殖期内的4只雄性秦岭大熊猫(Ailuropoda melanoleuca qinlingensis)精液进行了细管冻精实验。比较组成不同的4种稀释液:葡萄糖-果糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液1)、葡萄糖-蔗糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液2)、葡萄糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液3)和美国进口的TEST(加入3.5%甘油),以及直接降温平衡法(方法 1)与逐级降温平衡法(方法 2)2种冷冻保存操作方法,对秦岭大熊猫精液进行细管冷冻保存后精子活力和顶体完整率的影响。结果表明:稀释液1的精子活力为46.25%±11.67%,顶体完整率为80.75%±7.89%,TEST的精子活力为48.75%±8.54%,顶体完整率为84.50%±7.59%,两者的精子活力和顶体完整率均无明显差异(P0.05),但是都明显高于稀释液2(P﹤0.01)和稀释液3(P﹤0.01);采用方法 1冷冻保存秦岭大熊猫精液,解冻后精子的活力和顶体完整率分别为45.67%±10.54%和81.37%±8.42%,都显著高于方法 2(P﹤0.01);方法 1解冻后畸形率为23.50%±3.51%,明显低于方法 2(P﹤0.01)。经比较确定,方法 1(用稀释液1)是一种较好的细管冷冻保存秦岭大熊猫精液的方法。     

中国大熊猫保护战略探讨

简述了大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）当前的生存状况,包括种群数量、密度、栖息地及其周边社区环境,分析了保护区所面临的主要问题：（1）严重的人为干扰造成大熊猫种群的孤岛状态;（2）竹子开花依然对大熊猫种群构成威胁;（3）社区发展与保护的矛盾依然十分突出。并提出了大熊猫保护的基本方针和战略目标：（1）形成大熊猫自然保护区群;（2）减少永久性工程对大熊猫活动的阻隔;（3）统筹发展社区经济,积极实施社区共管;（4）实施圈养大熊猫放归。文中指出了为实现这些方针和目标所需采取的具体措施。     

带状间伐对巴山木竹林复壮更新及大熊猫取食的影响

间伐是竹林复壮更新的有效手段之一.以陕西佛坪国家自然保护区为研究区域,对大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)冬季栖息地非主要采食区域竹林老龄化严重且密度过大的巴山木竹(Bashania fargesii)林进行为期3年(2017至2019年)的带状间伐样方监测,研究间伐对竹林复壮更新以及大熊猫觅食选择...     

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)生境选择研究进展

在回顾大熊猫生境选择研究历史的基础上,总结了大熊猫生境选择的考察因子、研究方法,概括了大熊猫对对觅食条件、隐蔽条件和气候条件的选择机制,并探讨了大熊猫生境选择的灵活性及大熊猫和与其同域分布的动物种的共存机制.作者认为,野外调查误差大、研究尺度单一等是目前大熊猫生境选择研究中存在的主要问题,应用目前较流行的已被证明比较优良的资源选择函数法、DNA指纹技术、无线电遥测、红外线自动感应照相系统、GIS与遥感成像等先进技术,并融合景观生态学理论,从较大尺度空间来研究大熊猫的生境选择,应是今后的发展方向.     

提高圈养大熊猫仔兽存活率的研究

1998～2001年,对提高圈养大熊猫仔兽存活率进行研究,采用了母兽育幼、人工辅助育幼、保姆育幼、人工育幼等多种方法,特别是模仿大熊猫母兽的育幼行为和活动以及用人工巢进行人工育幼。人工巢制作简单,操作方便,育幼时的温度、湿度及呼吸的新鲜空气与母兽育幼环境近似,也便于科技人员观察、抚摩,促进幼仔身体活动及护理幼仔。采集母兽的初乳及常乳饲喂;抽取健康母兽的血液制成口服血浆,适量喂仔;用美国产的两种奶粉配制的人工奶,代替母兽常乳收到良好的育幼效果。在本项研究的4年中,将卧龙大熊猫育幼成活率由54．16％平均提高到90．32％,创大熊猫育幼史的最高水平,为大熊猫的迁地保护提供了新的应用技术和方法。     

粪样在大熊猫研究上的应用

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)数量少,传统取样法难以实施,样品的缺乏给大熊猫研究带来很大困难。而采集大熊猫粪样对大熊猫自身无损伤,粪样易获得和保存。本文总结了应用粪样进行的大熊猫食性与消化吸收、种群与个体识别、类固醇激素、寄生虫与病原微生物等方面的研究进展,对大熊猫粪样的应用前景进行了展望。     

大熊猫皮肤成纤维细胞系的建立和冷冻保存

简要介绍了大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）皮肤成纤维细胞的建系过程和冷冻保存。在研究中,采用200IU／ml的胶原蛋白酶Ⅰ酶在4℃下解离皮肤组织。在DME／Ham’sF12和M199两种培养液中添加100Iu,ml青链霉素、5pg,ml两性霉素B、5pg／ml M-Plasmocin^TM、2mmol／L L-Glu、10μg/ml的胰岛素、40ng/ml EGF和20％（原代）或10％（传代）FBS组成培养液,分别用于细胞的贴壁培养和植块培养,均获得培养成功。用PBS添加0．4％BSA、0．1mol／L蔗糖和10％DMSO组成的冷冻保存液对细胞进行冷冻保存,解冻后获得93．258％的活率,解冻细胞再次培养能正常生长。研究结果表明,大熊猫皮肤成纤维细胞建系和冷冻保存获得成功。     

基于信息熵量化评价大熊猫国家公园生态系统管理成效

生态系统管理绩效的量化评价是保护区域生态安全、合理利用自然资源、实现可持续发展的重要前提。选取大熊猫国家公园四川片区作为研究对象,从生态系统服务潜力、人为活动强度、旗舰种保护和生态管理实际情况出发,构建生态系统管理评估指标体系。指标体系包含16个因子。对指标体系构建的数据集,基于熵理论定量评价系统无序程度、发展方向。结果表明:(1)大熊猫国家公园生态系统总熵流值为-0.8309,系统整体健康;其中5个市县总熵流为正,生态系统无序性较大,为非健康状态。(2)生态系统管理的正熵流主要受第一产业影响;负熵流的产生主要来自旗舰种保护和区域保护绩效。在空间尺度上,不同区域间总熵流存在差异,宝兴县总熵流最高,达到0.0880;九寨沟县最低,为-0.1826。综合农村居民收入与总熵流评价结果,研究认为试点期内大熊猫国家公园管理可以考虑选取示范点,总结管理经验;在生态管理热点区域优先推广,如平武县、宝兴县和茂县。在管理过程中谨慎对待社区发展与生态保护的关系。     

大熊猫国家公园荥经片区两栖爬行动物多样性及海拔分布格局北大核心CSCD

大熊猫国家公园荥经片区(102°19′~102°55′E,29°28′~29°56′N)位于四川省雅安市荥经县境内,该区域属亚热带季风气候,动植物资源丰富。为进一步了解该区域两栖爬行动物资源情况,于2021年5月、7月和9月在区内设置6个研究点,在其中布设33条有效样线,对两栖爬行动物的多样性和海拔分布特征进行调查,并通过访问调查与文献查阅方法对实地调查结果进行补充。结果表明,大熊猫国家公园荥经片区现有两栖爬行动物4目18科67种,其中两栖动物2目9科31种,爬行动物2目9科36种。东洋界物种占绝对优势,其中,两栖动物除黑斑侧褶蛙(Pelophylax nigromaculatus)以外全为东洋界物种,爬行动物中东洋界物种有26种,广布种仅有9种。6个研究点的Shanoon-Winner多样性指数、Pielou均匀度指数和生态优势度指数变化趋势基本一致,由高到低排序为,新庙、泡草湾、泥巴山、云雾山、大石坝、安靖。对区域内两栖动物的栖息地类型进行比较发现,陆栖-山区高原型生境中生活的两栖动物种类最多。两栖动物的丰富度随海拔梯度的升高呈现逐渐降低的趋势,爬行动物由于所发现的数量有限,并未发现明显的海拔分布特征。     

放牧对甘肃多儿保护区大熊猫小种群形成的驱动探讨

小种群是在自然因素或人为活动影响下,形成具有生存风险的隔离或异质种群,认识其形成原因并制定保护对策是开展救护行动的基础。野生大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)具有许多相互隔离的小种群,各小种群的生存状况决定该物种的整体保护成效。本文以甘肃多儿保护区大熊猫种群为例,在对保护区内大熊猫进行种群分布、空间利用、干扰状况调查的基础上,开展栖息地适宜性评价,分析了保护区大熊猫有效利用空间及其时空格局与环境容纳量。结果显示：(1)保护区适宜栖息地面积5 789.2 hm²,次适宜栖息地面积18 165.6 hm²,共占保护区总面积43.9%。优质栖息地主要分布在工布龙区域,该区域森林和生态系统保持原生状态,也是保护区大熊猫的主要分布区;(2)工布龙区域总面积9 949.7 hm²,其中适宜和次适宜栖息地共5 129.4 hm²,牧场是大熊猫栖息地的主要干扰因子,放牧干扰下工布龙区域适宜和次适宜栖息地面积共减少12.9%,破碎化水平加剧;(3)牧场与大熊猫栖息地镶嵌分布,导致适宜栖息地隔离,放...