苯那普利、缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察苯那普利与缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达水平的影响,探讨ACE2在高血压发病机制和药物治疗中的意义。方法12周龄雄性SHR28只,分为空白对照组(Sc)、苯那普利组(10mg/kg.d)(Sb)、小剂量缬沙坦组(10mg/kg.d)(Sl)、大剂量缬沙坦组(30mg/kg.d)(Sh),每组7只,7只雄性WKY大鼠为正常对照。药物治疗3月后,用放射免疫法测定血浆AngⅡ含量,RT-PCR法测定肾脏中ACE和ACE2mRNA的表达水平,免疫组化法比较肾脏中ACE2蛋白的表达。结果与WKY大鼠相比,SHR肾脏中ACE2mRNA及其蛋白的表达均明显降低,而ACEmRNA的表达和血浆AngⅡ水平则明显升高(P<0.05)。缬沙坦治疗后SHR血压显著下降而血浆AngⅡ水平则进一步升高,肾脏中ACE2的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。苯那普利治疗对SHR血浆AngⅡ水平及肾脏ACE2的表达则无明显影响。结论SHR体内ACE和ACE2的表达失衡可能在高血压的发病机制中有重要意义。血管紧张素受体拮抗剂(ARB)可能通过升高SHR血浆AngⅡ的水平而增加肾脏中ACE2的表达,ACE2表达的增加可能是ARB抗高血压治疗的一个新药理机制。     

苯那普利、缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察苯那普利与缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达水平的影响,探讨ACE2在高血压发病机制和药物治疗中的意义.方法12周龄雄性SHR 28只,分为空白对照组(Sc)、苯那普利组(10 mg/kg·d)(Sb)、小剂量缬沙坦组(10 mg/kg·d)(Sl)、大剂量缬沙坦组(30 mg/kg·d)(Sh),每组7只,7只雄性WKY大鼠为正常对照.药物治疗3月后,用放射免疫法测定血浆Ang Ⅱ含量,RT-PCR法测定肾脏中ACE和ACE2 mRNA的表达水平,免疫组化法比较肾脏中ACE2蛋白的表达.结果与WKY大鼠相比,SHR肾脏中ACE2 mRNA及其蛋白的表达均明显降低,而ACE mRNA的表达和血浆Ang Ⅱ水平则明显升高(P<0.05).缬沙坦治疗后SHR血压显著下降而血浆Ang Ⅱ水平则进一步升高,肾脏中ACE2的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05).苯那普利治疗对SHR血浆Ang Ⅱ水平及肾脏ACE2的表达则无明显影响.结论SHR体内ACE和ACE2的表达失衡可能在高血压的发病机制中有重要意义.血管紧张素受体拮抗剂(ARB)可能通过升高SHR血浆Ang Ⅱ的水平而增加肾脏中ACE2的表达,ACE2表达的增加可能是ARB抗高血压治疗的一个新药理机制.     

辛伐他汀对慢阻肺大鼠MMP-9及其抑制剂表达的影响

目的研究辛伐他汀对慢性阻塞性肺病大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂(TIMP-1)表达的影响。方法选用30只健康的雄性SD大鼠作为实验材料,将30只大鼠分为三组:A组10只,B组10只,C组10只。B组和C组构建慢阻肺模型,C组大鼠采用辛伐他汀治疗。比较各组大鼠的一般症状、肺功能、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数和血清MMP-9、TIMP-1水平。结果 4w后,各组大鼠的体质量、FEV0.3s、FVC、FEV0.3s/FVC、PEV和BALF细胞计数具有统计学差异(P0.05)。A组大鼠MMP-9为(87.14±21.76)ng/ml,TIMP-1为(82.16±14.89)ng/ml,MMP-9/TIMP-1为(1.07±0.09);B组大鼠MMP-9为(241.58±38.94)ng/ml,TIMP-1为(167.92±19.76)ng/ml,MMP-9/TIMP-1为(1.44±0.21);C组大鼠MMP-9为(134.25±29.15)ng/ml,TIMP-1为(119.41±15.62)ng/ml,MMP-9/TIMP-1为(1.12±0.1),差异具有统计学意义(P0.05)。结论辛伐他汀可以降低慢阻肺大鼠基质金属蛋白酶-9及其抑制剂的表达水平,并改善两者的比例失衡。     

血管紧张素-(1-7)对二肾一夹高血压大鼠血压及血管活性物质的影响

目的观察急性血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]干预后二肾一夹(2KlC)高血压大鼠血压的变化过程,以及Ang-(1-7)对血压相关血管活性物质的影响。方法建立2KlC高血压大鼠模型后2周,经颈内静脉予Ang-(1-7)短期干预,同时多导电生理仪记录有创颈动脉压演变。放免法测定血浆AngⅡ,酶法测定血清一氧化氮(NO)、氧自由基(O2-)浓度及血清总一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,酶免疫法测定血浆前列腺素E2(PGE2)。结果Ang-(1-7)可造成2KlC大鼠血压降低。与降低血压状态相伴随,血清NO及血浆PGE2浓度显著升高(P<0.01),血清O2-浓度显著降低(P<0.01),血浆AngⅡ水平及血清NOS、SOD活力未受Ang-(1-7)影响。结论在高肾素-血管紧张素系统(RAS)活性状态下,Ang-(1-7)降压机制与循环NO、PGE2浓度升高及O2-浓度降低有关。     

蒙诺改善糖尿病肾病功能的观察

46例血压正常、持续微量蛋白尿的2型DN患者。口服糖适平伍及蒙诺10mg-30mg，一日一次（空腹晨服），观察时间3个月，用药期间尿素氮、肌酐、尿蛋白、血钾等实验室数据的前后变化。结果：蒙诺可以明显降低尿素氮、肌酐、尿微量白蛋白含量，与疗前相比有显著性差异（P〈0．05）；糖适平与蒙诺同时应用未发生新的不良反应。血压及电解质（K＋）无显著性差异（P〉0．05）。结论：蒙诺对（DN）患者RAAS的调节作用是其遏制肾功能进行性恶化的关键。     

醛固酮对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及组织金属蛋白酶抑制因子-1 mRNA表达的作用

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)可能在肝纤维化形成中发挥重要作用，利用醛固酮受体拮抗剂、血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)等药物阻断RAAS可以显著抑制实验性大鼠肝纤维化的形成。现在体外现察了醛固酮对肝星状细胞株HSC-T6 Ⅰ，Ⅲ型胺原合成和组织基质金属蛋白酶抑制因于-1(TIMP-1)mRNA表达的作用。     

氯沙坦对阿霉素肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的 探讨氯沙坦对阿霉素肾病肾脏的保护作用及机制.方法 48只Wistar大鼠随机分为对照组、肾衰组、氯沙坦组,每组16只.肾衰组及氯沙坦组大鼠腹腔注射阿霉素4 mg/kg,每周1次,持续5 w,制作阿霉素肾病大鼠模型;对照组应用同样的方法注射生理盐水.模型复制成功后,氯沙坦组大鼠给予氯沙坦1.2 mg/只灌胃,1 次/d;肾衰组给予同等量生理盐水灌胃,1次/d,均连续给药2 w.生化法检测24 h血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr),化学比色法检测肾皮质中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),RT-PCR方法检测肾组织AT1、AT2、ACE及AGT mRNA表达.结果 与对照组比较,肾衰组血清BUN、Cr均显著升高,肾皮质中MDA升高,SOD降低(P＜0.05);氯沙坦组与肾衰组比较,血清BUN、Cr均显著降低,肾皮质中MDA降低,SOD升高(P＜0.05).与对照组比较,肾衰组肾脏AT1表达上调,AT2降低,AGT和ACE水平增高(P＜0.05);氯沙坦组转为AT1下调,AT2表达接近对照组水平,AGT水平降低,ACE水平降低但仍高于对照组水平(P＜0.05).结论 氯沙坦具有延缓阿霉素肾病大鼠肾功能不全进展,减少氧化应激损伤的保护作用.     

脑出血大鼠脑水肿与血肿周围组织MMP-2、MMP-9表达的相关性

目的 探讨大鼠实验性脑出血后脑水肿与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的关系.方法 42只健康雄性Wistar大鼠采用自体血注入法建立右侧基底节区脑出血模型,随机分为脑出血模型组、假手术对照组,分别于造模后6h、12h、24 h、3d、5d、7d、14 d七个时间点取脑组织测定含水量,免疫组化检测MMP-2、MMP-9的表达.结果 模型组脑组织含水量在12h、24 h、3d、5d、7d时间点高于对照组(P＜0.05);模型组MMP-9表达在12h、24 h、3d、5d、7d时间点高于对照组(P ＜0.05);MMP-2自24 h开始表达,7d达高峰,14d仍有较高表达,在对照组无表达,模型组脑组织的重量变化与MMP-9的表达呈正相关,与MMP-2的表达呈负相关(P＜0.05).结论 大鼠脑出血后血肿周围脑组织MMP-9的表达与脑水肿相关,MMP-2的表达与神经损伤修复相关.     

缬沙坦对免疫性大鼠肝纤维化的影响

目的研究血管紧张素Ⅰ型(AT1)受体阻断剂对免疫性大鼠肝纤维化的影响。方法采用猪血清诱导建立肝纤维化模型,以大剂量和普通剂量缬沙坦干预,观察肝组织纤维化程度、胶原表达变化;免疫组化染色观察α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、转化生长因子β1(TGFβ1)及核因子(NF)κBp65表达情况。结果与模型组比较,治疗组胶原面积显著减少,具有剂量依赖性(P<0.05),纤维化程度也明显改善;模型组αSMA、TGFβ1、NFκBp65表达增强(P<0.05),缬沙坦治疗后,都有不同程度的减弱,模型组和大剂量组αSMA分别为19.68±1.28和8.66±1.72,TGFβ1分别为22.36±4.77和9.95±2.28,NFκBp65分别为30.31±4.16和19.80±1.96(均为面密度值,P<0.05)。结论缬沙坦能明显抑制猪血清诱导的大鼠肝纤维化发生,可能与抑制肝星状细胞活化、增殖,降低TGFβ、NFκBp65等表达有关。     

AAV9-Jumonji对慢性心力衰竭犬心脏肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性的影响

目的:观察AAV9-Jumonji对慢性心力衰竭犬心脏,肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)活性的影响,探讨其改善慢性心力衰竭的作用机制。方法:以杂种犬为研究对象,随机分为对照(control)组,心力衰竭(CHF)组,AAV9-Jumonji+心力衰竭(AAV9-Jumonji+CHF)组;超声心动图检查平均动脉压(mean artery pressure,MAP)和LVEF变化;酶联免疫法检测各组犬血清中ACE2、Ang Ⅱ和collagen Ⅰ的含量; qPCR和Western blot法检测各组犬心室肌组织中ACE2、Ang Ⅱ和collagen Ⅰ mRNA和蛋白的表达。结果:CHF造模后(第28天),与control组比较,CHF组与AAV9-Jumonji+CHF组MAP和LVEF明显降低(P <0. 05);注射AAV9-Jumonji 14 d后(第42天),与control组比较,CHF组MAP和LVEF明显降低(P<0. 05),与CHF组比较,AAV9-Jumonji+CHF组MAP和LVEF明显升高(P<0. 05);与control组比较,CHF组犬血清中AngⅡ和collagen Ⅰ含量均升高(P<0. 05),ACE2含量降低(P<0. 05);与CHF组比较,AAV9-Jumonji+CHF组犬血清中AngⅡ和collagen Ⅰ含量均降低(P<0. 05),ACE2含量升高(P<0. 05);与control组比较,CHF组犬心室肌中AngⅡ和collagen Ⅰ mRNA和蛋白表达均上调(P<0. 01),ACE2 mRNA和蛋白表达下调(P<0. 01);与CHF组比较,AAV9-Jumonji+CHF组犬心室肌中AngⅡ和collagen I mRNA和蛋白表达均下调(P<0. 05),ACE2 mRNA和蛋白表达上调(P<0. 05)。结论AAV9-Jumonji抑制慢性心力衰竭犬心脏RAAS活性的增强,从而显著改善慢性心力衰竭犬心功能。     

TIMP-1、MMP-2、MMP-9在大肠癌组织中表达的临床意义

目的 研究TIMP-1、MMP-2和MMP-9在大肠癌组织中表达的临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测50例大肠癌、10例正常大肠黏膜组织中TIMP-1、MMP-2和MMP-9的表达.结果 TIMP-1、MMP-2、MMP-9在正常组织中的表达均较低,而它们在大肠癌组织中阳性率均较高(P<0.05).结论 TIMP-1、MMP-2、MMP-9与大肠癌临床病理参数有关系.TIMP-1、MMP-2和MMP-9可能是大肠癌侵袭转移的分子标记物.     

醋柳黄酮对大鼠心肌缺血-再灌注损伤及MMP-9表达的影响

目的观察醋柳黄酮(TFH)对大鼠心肌缺血-再灌注后损伤及组织MMP-9表达的影响,探讨对心肌缺血-再灌注损伤后保护机制。方法将50只大鼠随机分组:模型组、氯沙坦组、醋柳黄酮大、小剂量组及假手术组。结扎左冠状动脉前降支30min后松开制作心肌缺血-再灌注模型。对心肌组织进行HE染色观察心肌坏死的面积及病理变化,免疫组织化学检测再灌注心肌组织MMP-9表达。结果 HE切片观察TFH大、小剂量组预处理的大鼠心肌坏死较模型组明显减轻,免疫组化结果显示TFH大、小剂量组较模型组MMP-9表达减少,有统计学意义。结论TFH对再灌注损伤心肌有保护作用,其作用机制与抑制心肌中MMP-9表达有关。     

大鼠脑出血后脑组织MMP-2、MMP-9表达及其与脑水肿关系的研究

目的研究大鼠脑出血后基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的表达规律及其与脑水肿之间的关系。方法采用向大鼠尾状核注射自体不凝血制作大鼠脑出血模型,实验动物随机分为假手术对照组和脑出血组,免疫组化法测定脑组织MMP-2、MMP-9的表达及干湿重法测定脑组织含水量。结果（1）血肿边缘MMP-9阳性微血管数在脑出血6h明显升高（P〈0.01）,48h达高峰,2w降至零表达（P〉0.05）;MMP-248h始在巨噬细胞上表达（P〈0.05）,120h达高峰,2w仍保持较高水平（P〈0.01）;（2）脑组织含水量在脑出血12h显著增加（P〈0.05）,72h达到高峰,2w与假手术对照组无差异（P〉0.05）。（3）脑出血后MMP-9与脑组织含水量之间呈正相关关系（r=0.8716,P〈0.01）。结论脑出血后MMP-2、MMP-9有高表达,MMP-9参与了脑出血急性期脑水肿的形成,MMP-2则可能参与了脑出血后期的脑组织损伤修复。     

MMP-9、TIMP-1在子宫内膜异位症患者子宫内膜中的表达及意义

目的观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）在子宫内膜异位症（EMs）患者子宫内膜中的表达,并探讨其在EMs发病机制中的作用.方法利用免疫组化法检测MMP-9和TIMP-1在35例EMs患者（观察组,其中未孕16例、已孕19例）异位内膜及在位内膜组织和35例正常人（对照组）子宫内膜中的表达.结果①MMP-9在观察组异位内膜中的表达高于在位内膜和对照组（P均＜0.05）,在位内膜中的表达高于对照组（P均＜0.05）;②TIMP-1、MMP-9/TIMP-1在观察组异位内膜中的表达低于在位内膜和对照组（P均＜0.05）;观察组未孕与已孕患者MMP-9和TIMP-1表达以及MMP-9/TIMP-1均无统计学差异（P均＞0.05）.结论MMP-9高表达以及MMP-9/TIMP-1的比例失调,使子宫内膜更具侵袭性,在EMs的发生、发展中起重要作用.     

MMP-9、HPSE和VEGF-C蛋白表达在中老年人肺癌抗血管和抗淋巴管生成治疗中的意义

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP9)、乙酰肝素酶(HPSE)和血管内皮生长因子C(VEGFC)蛋白表达在中老年人肺癌抗血管和抗淋巴管生成治疗中的意义。方法应用免疫组化SABC法检测MMP9、HPSE和VEGFC蛋白表达在65例肺癌组织中的表达,并与癌旁组织和正常肺组织对比,同时结合肺癌的临床病理学特征及预后进行分析。结果肺癌组织中MMP9、HPSE和VEGFC蛋白的阳性表达率明显高于正常肺组织和癌旁组织(P<005);不同类型和不同分化程度肺癌组织中MMP9、HPSE和VEGFC蛋白阳性表达率无显著性差异(P>005);Ⅲ期和Ⅳ期肺癌组织中MMP9、HPSE和VEGFC蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<005);生存3年以下的肺癌组织中MMP9、HPSE和VEGFC蛋白阳性表达率明显高于生存3年以上者(P<005)。结论MMP9、HPSE蛋白表达在肺癌的生长、侵袭和转移以及血管生成中发挥重要作用;VEGFC是促进肺癌经淋巴转移的重要因素;肺癌的生长、侵袭和转移可能是MMP9、HPSE促血管生成和VEGFC促淋巴生成二者的协同作用;MMP9、HPSE和VEGFC蛋白可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的一个参考指标;为人肺癌抗血管和抗淋巴管生成治疗的可行性提供了一定的实验依据。     

糖尿病肾病小鼠肾组织基质金属蛋白酶9的表达及其细胞内信号传导机制的探讨

目的　观察Kkay小鼠糖尿病肾病(DN)时肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9) 的表达,并探讨其细胞内信号传导机制。　方法　Kkay糖尿病小鼠(KA)组和非糖尿病小鼠(KB)组各8 只,以PAS染色、免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT PCR)观察肾脏病变、MMP-9 表达水平。经糖基化终末产物(AGEs)作用于脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,分别以RT PCR 和流式细胞技术检测MMP-9表达;以凝胶阻滞电泳(EMSA)检测核转录因子κB(NF-κB)激活情况。　结果　KA组出现明显DN病变,其肾小球硬化指数(GI)明显高于KB组(P<0.05);KA组肾小球MMP 9阳性着色面积(11 14%)高于KB组(5 68%)(P<0.01),MMP-9 mRNA表达水平有类似变化。AGEs使HU-VECs MMP-9表达增强,并伴有NF-κB激活。抑制NF-κB活性可降低MMP-9表达。　结论　Kkay小鼠DN伴有MMP-9表达增高,推测MMP-9在DN发生发展中起一定作用;AGEs可能是通过激活NF κB使内皮MMP-9表达增强的。     

胰头癌组织中基质金属蛋白酶-9的表达及其与预后的关系

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloporteinases-9,MMP-9)在胰头癌中的表达及其临床意义。方法选择2000-01~2007-12外科手术切除的胰头癌患者癌组织标本38例(份)、邻近正常的胰腺组织标本11例(份),采用免疫组化法检测MMP-9蛋白在胰头癌组织和邻近正常的胰腺组织中的表达,并分析其与胰头癌患者临床病理特征的关系以及患者的术后的生存率。结果 38例(份)胰头癌中MMP-9的表达率为71.1%(27/38),而11例(份)邻近正常的胰腺组织未见MMP-9表达。MMP-9蛋白表达与肿瘤大小、TNM分期及远处转移有关(P0.05),而MMP-9蛋白的表达均与患者的性别、年龄、淋巴结是否转移、分化程度无显著相关(P均0.05)。生存曲线显示,胰头癌患者MMP-9(-)组的生存状况明显好于MMP-9(+)组(P0.05)。Cox回归分析表明,胰头癌预后的独立危险因素分别为分化程度、TNM分期及MMP-9阳性表达(P均0.05)。结论胰头癌中MMP-9蛋白表达升高,可能与胰头癌的侵袭、转移密切相关,MMP-9表达升高预示预后差。     

HMGB1对心脏成纤维细胞MMP-9表达的影响及其机制研究

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其可能的机制。方法培养大鼠心脏成纤维细胞,予以100ng/ml浓度HMGB1干预,采用CCK-8检测细胞活力;Westernblot方法检测胞内及细胞上清中MMP-9水平,RAGE与TLR4表达水平及ERK1/2的磷酸化水平。结果 (1)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,细胞活力与对照组相比无显著差异。(2)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,胞内MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05),而细胞上清中MMP-9水平显著升高(P<0.05)。(3)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,TLR4表达升高(P<0.05)而RAGE表达无显著差异。(4)HMGB1干预心脏成纤维细胞5分钟,ERK1/2显著活化(P<0.05)。(5)TLR4中和抗体(20ug/ml)阻断TLR4后,HMGB1+TLR4阻断组的p-ERK1/2表达较HMGB1干预组明显降低(P<0.05)。结论 HMGB1可能通过TLR4活化ERK1/2,促进心脏成纤维细胞分泌MMP-9,进而破坏心肌胶原结构,参与心肌重构。     

大鼠脑梗死早期活性MMP-9表达的实验研究

目的　探讨 SD大鼠脑梗死早期活性 MMP-9的时间表达过程。方法　线栓法建立 SD大鼠永久性大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,各经 2 h、6h和 1 6h血管闭塞后 ELISA法测定各时间点组脑组织匀浆中活性 MMP-9的水平 ,假手术组作为阴性对照。结果　经过 2 h、6h和 1 6h血管闭塞后 ,梗死侧脑组织中活性 MMP-9水平各为 6.3 6±1 .40 u/ mg,8.73 h± 3 .3 3 u/ mg和 1 4.68± 2 .5 9u/ mg,其中 1 6h组各为 6h、2 h组的 1 .9和 2 .2倍 (P<0 .0 5 ) ;三时点水平与同时点假手术组相比 ,6h(P<0 .0 5 )和 1 6h组具有统计学差异 (P<0 .0 1 )。结论　脑梗死早期可以诱导 MMP-9基因表达 ,其组织中活性成份于血管闭塞后 6小时开始增高 ,1 6小时明显升高 ,提示 MMP-9可能参与脑梗死后组织损伤的早期病理过程。     

MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物．进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)．先将扩增产物克隆至pGEM—T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3．1中．然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3．1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamHⅠ和HindⅡ)鉴定．证实其中有目的片段完整插入．插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3．1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。