藤梨根提取物抗人肺腺癌A549细胞生长的实验研究

采用MTT检测法、集落形成试验、流式细胞术检测细胞凋亡及建立裸鼠移植瘤模型进行体内实验，观察藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用。结果显示各浓度的藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞均有较强的抑制效应，且呈现出明显的时相性和量-效依赖性；藤梨根提取物作用后G0～G1期细胞数增加，细胞出现凋亡，并随药物浓度增大作用增强；移植瘤体内试验显示藤梨根提取物高剂量组移植瘤生长缓慢，体积明显小于对照组及低剂量组。表明藤梨根提取物对人肺腺癌A549细胞在体内外均有生长抑制作用，并可诱导其细胞凋亡。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化.结果 倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160 μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性.并且A549细胞epm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160 μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关.     

腺病毒介导的CIAPIN1基因对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

目的 以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因转染人肺腺癌细胞系A549,观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响.方法 构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549,采用Western blot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达;CIAPIN1能显著抑制A549的生长(P＜0.01);流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论 以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用.提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用.     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物（实验组）,同时设对照组（0.04%DMSO＋肺癌A549细胞）。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组（P均〈0.05）,亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。     

PBCA纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（PBCA-NPs）作为端粒酶逆转录酶（hTERT）反义寡核苷酸（ASODN）载体，转染肺癌A549细胞，观察其对该细胞周期和凋亡的影响。方法PBCA-NPs携带hTERT ASODN转染A549细胞后，绘制细胞生长曲线表达细胞生长状态的变化；流式细胞仪（FCM）检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果ASODN转染后A549细胞增殖减慢FCM检测结果显示．ASODN转染后细胞周期变化明显，细胞被阻滞于G0／G1期，细胞凋亡率明显增加。结论hTERTA SODN能有效改变A549细胞的细胞周期，诱导细胞凋亡的发生。     

藤梨根提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的影响

目的研究藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测不同剂量的藤梨根提取物对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,并用流式细胞仪分别检测细胞周期以及凋亡程度。结果在浓度范围25~200μg/ml范围内,不同浓度的藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。且在藤梨根提取物细胞浓度为53、86以及142μg/ml作用48 h后SGC7901在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论藤梨根提取物可能通过干预细胞周期和凋亡对胃癌细胞SGC7901增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Bax和p21蛋白表达的影响

目的观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及诱导凋亡的机制。方法采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的增殖抑制率;运用免疫细胞化学SP法检测用药前后Bax和p21蛋白表达的变化;运用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。结果蛴螬提取物对人肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并呈时间依赖性;蛴螬提取物组细胞Bax和p21表达均增强,细胞凋亡率与对照组相比有显著性差异,并被阻滞在细胞周期的S期。结论蛴螬提取物可通过上调Bax和p21使细胞阻滞于S期,从而抑制A549细胞的生长。     

厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡的影响

目的 研究厄罗替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响以及对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的厄罗替尼对A549细胞的增殖抑制作用;以倒置相差显微镜、流式细胞术、TUNEL法及DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;以免疫荧光法分析厄罗替尼对EGFR蛋白表达的影响.结果 厄罗替尼抑制A549生长呈时间浓度依赖性;厄罗替尼处理A549后倒置相差显微镜、DAPI及TUNEL均见到明显的凋亡细胞(P<0.05);药物处理组使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05);TUNEL检测到200 μmol/L厄罗替尼组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%,显著高于对照组(0.82±0.03)%(P<0.05);免疫荧光法表明厄罗替尼明显下调EGFR表达(P<0.05).结论 厄罗替尼杀伤A549细胞的机制与介导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR信号途径有关.     

蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株抗增殖作用的实验研究

目的探讨蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株抗增殖作用及其机制。方法应用MTT法测定蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株的生长抑制作用;通过吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色荧光显微镜观察肿瘤细胞的形态学变化;采用流式细胞仪检测A549细胞的周期分布相;应用免疫细胞化学技术SP法检测药物处理前后增殖细胞核抗原Ki-67、Bcl-2的表达。结果蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株有明显的抑制生长的作用,且呈现出浓度依赖性;蝙蝠葛活性成分可诱导A549细胞发生细胞周期阻滞;蝙蝠葛活性成分作用后Ki-67和Bcl-2阳性表达率较对照组降低（P〈0.01）。结论蝙蝠葛活性成分在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖作用,可能与下调Ki-67、Bcl-2蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响

目的研究槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法制备浓度为0、3、6、9 mg/ml的槐耳清膏与人肺腺癌A549细胞作用后,采用流式细胞检测观察细胞凋亡率,并分析药物干预36 h对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果流式细胞术检测结果显示,槐耳清膏各浓度组均可发生细胞凋亡,与对照组相比差异显著(P0.05)。各浓度组可使人肺腺癌A549细胞G0/G1、S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多。结论槐耳清膏能诱导人肺腺癌A549细胞增殖,可能与细胞被阻滞于G2/M期有关。     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

目的 探讨茶多酚对人肺癌SPC-A1细胞增殖的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPC-A1细胞,以50～300 mg/L茶多酚作用12、24、36 h后,MTT法测定细胞的增殖活性,琼脂糖凝胶电泳、透射电镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测对细胞周期的阻滞作用.结果 茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性,其抑制作用随时间的延长而增强,以36 h抑制作用最强.浓度50～150 mg/L,抑制作用随浓度增高而增强;浓度＞150 mg/L,抑制作用随浓度增高反而减弱.茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期,以150 mg/L阻滞作用24 h最强.结论 茶多酚可诱导人肺癌SPC-A1细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期,抑制肺癌细胞的增殖.     

5F诱导肺癌A549细胞G2期阻滞及细胞凋亡并伴随p53上调及Survivin下调

目的调查ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(简称5F)对肺癌细胞的影响及机制。方法在不同时间段以5F(0～80μg/ml)处理肺癌A549细胞。采用MTT方法检测细胞毒性。采用碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期。采用Annexin V/PI染色检测细胞凋亡。采用免疫印迹检测p53及Survivin蛋白水平。结果 5F以浓度依赖及时间依赖方式抑制A549细胞增殖。5F诱导A549细胞发生G2期阻滞及细胞凋亡。此外,5F处理还导致了A549细胞p53上调及Survivin下调。结论 5F可能通过激活p53及抑制Survivin诱导A549细胞发生G2期阻滞及细胞凋亡。     

雷帕霉素对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

将不同浓度雷帕霉素作用于肺腺癌A549细胞。用MTT比色法测定细胞生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果雷帕霉素对肺腺癌细胞有显著的抑制作用，呈剂量-效应和时间-效应关系；流式细胞仪检测示雷帕霉素可将肺腺癌细胞阻滞于G1期，S期合成减少；同时细胞凋亡率随着雷帕霉素浓度增加而增加。认为雷帕霉素能有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖，阻滞细胞周期并诱导其发生凋亡。     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞体外增殖及细胞周期的影响

目的探讨茶多酚对人肺癌SPC-A1细胞增殖和细胞周期的影响。方法体外培养人肺腺癌SPC-A1细胞,以50~300 mg/L茶多酚作用12小时、24小时和36小时后,用MTT法测定细胞的增殖活性,透射电镜检测细胞凋亡情况,流式细胞仪测定细胞周期的阻滞作用。结果MTT法显示茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性,其抑制作用随时间的延长而增强,以36小时抑制作用最强。在浓度50~150 mg/L范围内,抑制作用随浓度增高而增强;当浓度大于150 mg/L时,抑制作用随浓度增高反而减弱。透射电镜可见凋亡细胞的形态学改变,线粒体空泡化、核凝聚、核固缩。流式细胞术发现茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期,以24小时、150 mg/L阻滞作用最强。结论茶多酚可诱导人肺癌SPC-A1细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期。     

红花多糖对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨不同浓度的红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法根据台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线及计算细胞活力;用不同浓度(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28,2.56mg/m L)的红花多糖处理A549细胞24、48、72h后在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28,2.56mg/m L)的红花多糖对人非小细胞肺癌细胞体外生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI荧光双标流式细胞术检测细胞凋亡率。结果台盼蓝染色后发现在第2-6天细胞呈对数生长,在第3-5天细胞活力最好;不同浓度SPS处理24,48,72h后,各时间点均以0.64mg/m L的SPS抑制率最高;不同浓度SPS处理48h后,倒置显微镜下A549细胞表现为皱缩、变圆等细胞凋亡性;各浓度组A549细胞的凋亡率增加呈剂量依赖性,而1.28mg/m L组除外。结论红花多糖能明显抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞的凋亡,在SPS浓度为0.64mg/m L最为显著。     

高乌甲素对人非小细胞肺癌A549细胞株的作用及机制

目的观察高乌甲素(LA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株的作用并探讨其可能存在的分子机制。方法采用由中山大学医学院实验动物中心细胞库提供的人NSCLC细胞株A549株。通过给予不同浓度的LA进行干预和MTT比色分析法、实时荧光定量PCR以及流式细胞仪等检测方法,探讨不同浓度的LA对NSCLCA549细胞株的生长抑制、凋亡率、细胞周期和Cyclin E1表达的影响。结果 LA对细胞的抑制作用规律呈剂量依赖性,相较于对照组,浓度在0.48~7.68 mg/ml的LA对于细胞的抑制作用均有着统计学差异(P0.05);在相应的各时间点,浓度为0.48和0.96 mg/ml的LA组A549细胞凋亡率均有着统计学的差异(P0.05);浓度为0.96 mg/ml的LA组细胞周期G0/G1期比例显著上升,而S期比例下降(P0.05);浓度为0.48和0.96 mg/ml的LA组A549细胞的Cyclin E1 m RNA相对表达量均明显低于对照组(P0.05)。结论 LA具有抗肿瘤的疗效,其分子机制可能与肿瘤细胞的生长、凋亡、细胞周期以及Cyclin E1表达有关。     

吉非替尼对肺腺癌细胞增殖和表皮生长因子受体表达的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对肺腺癌A549细胞株增殖和EGFR表达的影响.方法 不同浓度吉非替尼干预肺癌A549细胞24、48、72 h后,倒置相差显微镜观察药物干预后细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞抑制率;钙依赖性磷脂结合蛋白(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)法和HoechsT_33258染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测药物作用周期;免疫荧光检测EGFR蛋白表达情况;实时荧光定量PCR检测EGFR mRNA的表达情况.结果 各干预组细胞出现空泡和颗粒,细胞碎片增多,且随吉非替尼剂量增加和干预时间的延长日益明显.吉非替尼明显抑制了A549细胞的生长,呈时间、剂量依赖性.吉非替尼组细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.01),S期细胞比例明显减少(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.01),EGFR mRNA和蛋白表达明显减弱(P<0.01).结论 吉非替尼显著抑制A549细胞生长,可能机制是促进凋亡、增强G0~G1期阻滞和进一步下调活化的EGFR mRNA和蛋白的表达.     

亚硒酸钠、砒霜对肺腺癌细胞周期、凋亡、耐药的影响

目的通过比较低浓度亚硒酸钠、砒霜对肺腺癌细胞A549的周期、凋亡、耐药及线粒体的影响,探讨肺腺癌药物治疗的新方法。方法体外培养肺癌A549细胞,分为对照组及5.0μmol/L亚硒酸钠（A组）、5.0μmol/L砒霜（B组）处理组,药物处理24 h后以流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测三组促凋亡因子Caspase-3、抗耐药基因RARα的表达,RT-PCR检测三组凋亡抑制基因Bcl-2、细胞周期素CyclinD3表达;电子显微镜观察细胞线粒体结构与凋亡小体。结果与对照组相比,A、B组G0/G1期增加、S和G2/M期减少,出现细胞周期阻滞,凋亡细胞比例增加。Caspase-3、RARα表达上调,Bcl-2、cyclinD3表达下调。线粒体肿胀、线粒体嵴模糊不清,出现凋亡小体。结论亚硒酸钠、砒霜治疗肺腺癌均有良好的效果,因为氧化还原能力不同,作用各有侧重。     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

芒果甙对鼻咽癌细胞系CNE2细胞增殖、凋亡及周期的影响

目的 探讨芒果甙治疗鼻咽癌的可行性.方法 以不同浓度的芒果甙作用于人鼻咽癌CNE2细胞,检测细胞抑制率、凋亡率及细胞周期.结果 芒果甙作用后CNE2细胞抑制率及凋亡率均明显增加,且呈浓度及时间依赖性,P均＜0.05;芒果甙作用72 h后,随药物浓度增加,CNE2细胞出现S期阻滞;浓度＞100 μmol/ L时出现G2/M期阻滞.结论 芒果甙能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有S期和G2/M期阻滞效应,具有潜在抗肿瘤作用.