RNA干扰Nucleostemin基因对人结肠癌细胞株HT-29细胞增殖及细胞周期的影响

将Nucleostemin(NS)siRNA利用脂质体2000转染人结肠癌细胞株HT 29,分别利用CCK-8试剂盒和流式细胞术检测NS siRNA对HT 29细胞增殖和细胞周期的影响,进一步利用Real-time PCR和Western blotting技术检测NS基因和细胞周期相关基因p21 mRNA和蛋白的表达.结果表明,NS siRNA的转入能有效下调NS mRNA和蛋白的表达(P0.05),并能明显抑制人结肠癌细胞株HT 29的细胞增殖(P0.05),并诱导细胞周期静止在G_0/G_1期,转染NS siRNA后,p21 mRNA和蛋白的表达均明显升高,提示细胞增殖抑制和细胞周期静止与p21基因表达的升高密切相关.     

核糖体蛋白S3表达减少对果蝇发育的影响

为探讨核糖体蛋白S3在果蝇（Drosophila）发育中的作用,采用RNAi法,分别在果蝇和果蝇s2细胞中干扰核糖体蛋白S3表达,观察对果蝇表型的影响。结果显示,减少核糖体蛋白S3表达引起果蝇幼虫发育延迟,眼睛、翅膀和刚毛生长缺陷等。进一步实验表明,在翅原基中有明显的凋亡信号;S2细胞数目减少;细胞凋亡和细胞周期相关基因表达异常。上述结果暗示核糖体蛋白s3丧达减少导致的果蝇发育改变可能通过细胞凋亡的方式来实现。     

Nucleostemin siRNA对结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响

利用RNA干扰技术沉默结肠癌细胞株HT-29细胞中Nucleostemin(NS)基因的表达,并分析其对HT-29细胞凋亡的影响,进一步利用半定量RT-PCR和Western blotting技术检测细胞凋亡相关基因caspase-3/9 mRNAs和蛋白的表达.结果表明,NS基因的沉默能明显提高caspase-3/9的活性(P0.05),并诱导细胞发生凋亡,此外,HT-29细胞中NS基因沉默后,caspase-3/9mRNAs和蛋白的表达均明显升高,提示NS基因沉默介导的细胞凋亡与caspase-3/9基因表达的升高密切相关.     

P53基因在胃癌中的表达及其与caspase-3的相关性研究

目的:探讨胃癌组织中p53蛋白的表达及其与caspase-3的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例胃癌组织、30例正常胃粘膜组织中p53及caspase-3蛋白的表达。结果:p53蛋白在胃癌组织中的阳性表达高于正常胃粘膜(P<0.05);p53表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05);caspase-3蛋白在胃癌组织中的阳性表达低于正常胃粘膜(P<0.05);胃癌组织中p53与caspase-3蛋白表达呈显著负相关(r=-0.371,P<0.05)。结论:p53通过下调caspase-3的表达,促使细胞的凋亡发生紊乱,从而导致胃癌的发生、发展及浸润转移。     

莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠海马细胞周期蛋白表达的影响

目的 观察莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠细胞周期相关蛋白表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型后,随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg体质量)、莫诺苷中剂量组(90 mg/kg体质量)、莫诺苷大剂量组(270 mg/kg体质量)。造模7 d后,用Western blot 方法检测大鼠患侧海马细胞周期相关蛋白CyclinD1及CDK6的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组CyclinD1蛋白表达显著增加;与模型组相比,莫诺苷中剂量组与大剂量组CyclinD1显著降低。与假手术组相比,模型组CDK6蛋白表达显著增加;与模型组相比,莫诺苷小、中、大三个剂量组CDK6蛋白表达显著降低。结论 莫诺苷能降低大鼠脑缺血再灌注后CyclinD1和CDK6的表达,从而抑制细胞周期相关蛋白的异常激活,发挥神经保护作用。     

rhNDPK-α蛋白对正常小鼠脾细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨rhNDPK-α蛋白对正常小鼠脾细胞增殖和细胞周期的影响.方法:不同质量浓度的rhNDPK-α蛋白体外作用于脾细胞,通过MTT法和流式细胞术测其增殖和细胞周期.结果:rhNDPK-α蛋白的质量浓度为10～250μg·mL-1时对脾细胞的自发增殖反应有明显的促进作用;10～50μg·mL-1时对PHA诱导的脾细胞增殖有明显的协同作用;50μg·mL-1rhNDPK-α蛋白作用小鼠脾细胞24h后,G0/G1和G2-M期细胞比例明显增加,而S期比例显著减少.结论:rhNDPK-α蛋白可促进脾细胞的存活,很可能通过调控细胞周期而参与细胞的生长调节.     

磷酸吡哆醛对H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响

为建立DNA拓扑异构酶活性测定方法和探讨磷酸吡哆醛(PLP)抑制肿瘤细胞增殖的可能机制,本实验以DNA琼脂糖凝胶电泳EB荧光法测定了H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶I(TOPOI)的活性。结果表明维生素B6的活性形式PLP能有效地抑制TOPOI松弛负超螺旋的作用,且抑制效应与PLP剂量呈正相关。从而证实PLP能明显抑制TOPOI的活性并在分子水平上调节细胞周期活动和肿瘤细胞增殖活动。     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响

目的:观察白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响.方法:采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(1、3、5mg/mL)白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24h,倒置显微镜观察细胞形态变化；MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响；RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1mRNA的表达.结果:白花蛇舌草乙醇提取物干预后,能抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量效作用；Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA 表达随药物浓度的增加而减少.结论:白花蛇舌草乙醇提取物能抑制HT-29细胞与其可抑制Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关.     

PI3K等5条信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调节作用研究

为从基因转录水平解析信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调控作用,用小鼠基因表达谱芯片Mouse Genome 4 302.0检测信号通路相关基因表达丰度发现,PI3K,STAT3,钙蛋白酶,Rho家族鸟苷酸激酶和VEGF等5条信号通路的105个基因在该细胞的细胞周期中发生有意义的表达变化.分析基因表达变化预示的信号通路作用表明,上述5条信号通路依次促进G1期、G1/S转换期、S期、G2/M转换期和M期进程.结论:上述5条信号通路促进NIH3T3细胞的细胞周期进程.     

X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

为了研究靶向X连锁凋亡抑制蛋白的发夹状RNA对肺癌细胞中抗肿瘤作用,构建XIAP基因的shRNA表达载体,并设计阴性对照(psiRNA-Con)质粒,分别转染A549细胞;实时定量PCR和免疫印记法分别检测XIAP的mR-NA和蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐试验(MTT)检测A549细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期分布。实验结果表明:转染psiRNA-XIAP组细胞XIAP mRNA和蛋白水平均低于正常对照组,生长慢于正常组(t=16.82和t=12.13,均P<0.01),G2/M期细胞所占比例增高(t=3.78,P<0.05),并出现亚G1峰。而阴性对照质粒psiRNA-Con未能下调XIAP的表达水平,对A549细胞增殖和细胞周期亦无明显影响。结论:针对XIAP的RNA干扰质粒特异性地抑制了其RNA和蛋白水平,使肺癌细胞A549生长减慢,诱导凋亡,并使其发生G2/M期阻滞,有望发展为新的抗肿瘤药物。     

PPARγ激动剂诱导HT-29凋亡及周期阻滞的作用

PPAR属于核受体超家族,与特异配体结合后调控一些基因的表达,这些受调控的基因涉及脂质的代谢,糖尿病以及肿瘤等多个方面.目的是研究PPAR γ激动剂罗格列酮诱导结肠癌细胞HT-29凋亡及细胞周期阻滞的作用,并对其机制做相应的探讨.试验结果显示,罗格列酮可诱导HT-29细胞发生凋亡,并阻滞细胞于G1期,此效果伴随着Bcl-2的表达降低,p21的表达升高.罗格列酮在升高PPAR γ表达的同时,也激活了细胞内ERK的传导通路.因此,罗格列酮是通过诱导结肠癌细胞凋亡及周期阻滞而发挥其抗肿瘤作用,此作用为PPAR γ依赖的,并且与激活ERK通路有关.这些研究结果提示PPAR γ有望成为结肠癌治疗的分子靶点.     

PPARγ罗格列酮对HT-29的生长抑制作用

PPARγ配体在抗肿瘤中发挥着重要的作用,这些配体具有抗肿瘤、诱导分化和抗血管生成等效果.目的主要是评估PPARγ激动剂罗格列酮对结肠癌细胞株HT-29生长的抑制作用.结果显示,罗格列酮可以有效地抑制体外培养的结肠癌细胞株HT-29的生长及克隆形成,并能抑制HT-29裸鼠移植瘤的生长.与此同时,罗格列酮能够升高PPARγ, p- PPARγ的表达水平.以上结果初步证明罗格列酮在体内外均可抑制结肠癌细胞株HT-29的成长,提示罗格列酮有可能发展成为治疗结肠癌的有效药物.     

DADS对人小细胞肺癌细胞株NCI—H446增殖的影响

目的探讨二烯丙基二硫（diallyldisulfide,DADS）体外抑制人肺癌细胞株NCI—H446细胞增殖作用。方法采用MTT、细胞计数、细胞活力检测DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的抑制增殖作用;倒置显微镜观察DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的形态学改变。结果IVIqT结果显示,DADS作用H446细胞后,明显抑制细胞增殖且抑制率呈现浓度时间依赖性关系;细胞计数结果表明,DADS作用H446细胞后其细胞群体倍增时间延长;形态学变化观察,随着DADS浓度递增,细胞逐渐稀疏,数量明显减少。结论DADS对人小细胞肺癌H446细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关。     

MSH2 is required for cell proliferation, cell cycle control and cell invasiveness in colorectal cancer cells

We have investigated the role of MSH2,a mismatch repair gene in cell proliferation,cell cycle control and cell invasiveness in the SW480 human colorectal cancer cell line.RNAi-mediated inhibition of MSH2 expression was achieved using MSH2 shRNA lentiviral expression vectors.Effective knockdown of endogenous MSH2 expression was determined by real-time PCR analysis.The most efficient MSH2 knockdown vector was selected for subsequent studies using SW480 cells.Endogenous MSH2 mRNA levels decreased after lentiviral delivery of the MSH2-RNAi,indicating efficient silencing of MSH2 expression in SW480 cells.Cell proliferation,cell cycle progression and cell invasiveness were quantified by MTT assays,flow cytometry and transwell assays,respectively.RNAi-mediated inhibition of MSH2 expression in SW480 cells resulted in decreased cell proliferation,cell cycle arrest at the G0/G1 phase and decreased cell invasiveness.Taken together,these results provide evidence that MSH2 stimulates cell proliferation,promotes cell cycle progression and positively regulates cell invasiveness.     

新型姜黄素结构衍生物抗肝癌细胞增殖作用的研究

采用MTT法对姜黄素结构衍生物（CCM系列化合物）进行抗人肝癌细胞Bel-7402和SMMC-7721活性筛选;利用流式细胞技术和荧光显微镜检测SMMC-7721细胞凋亡及周期分布;采用Western-Blot方法检测SMMC-7721中蛋白caspase-3和剪切后p17的表达.结果表明,化合物CCM-5和CCM-14抗肿瘤活性较好,其对SMMC-7721细胞的凋亡作用呈剂量依赖性,且凋亡率与阴性对照组相比有显著差异（P<0.01）;化合物浓度增高时,G0/G1期细胞减少,S期以及G2/M期细胞增加,凋亡峰SubG1峰增大;两个化合物均可增强caspase-3的表达,随着浓度的提高,caspase-3的表达趋势减弱,而剪切形式p17亚基表达量逐渐提高.因此,姜黄素结构衍生物CCM-5和CCM-14能抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖,促进凋亡,其作用机制可能与化合物诱导caspase-3活性的增强有关.     

蜂胶黄酮Pinobanksin-3-acetate对结肠癌HCT-116细胞增殖及凋亡的影响

 为探讨蜂胶黄酮(Pinobanksin-3-acetate, PB3A)对结肠癌HCT-116 细胞增殖及细胞凋亡的影响, 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法, 检测不同浓度、不同时间PB3A、5-氟尿嘧啶(5-FU)及两种药物联合作用对HCT-116 细胞生长所产生的影响, 倒置显微镜观察细胞的形态学变化特点, Annexin V-FITC/PI 双染色、流式细胞仪检测药物作用24 h 后的细胞凋亡率。结果显示, PB3A 对HCT-116 细胞增殖有明显的抑制作用, 并呈浓度和时间依赖性。其抑制活性与5-FU 几乎没有显著性差异, 联合用药具有协同效应; 在一定剂量范围内, 可见凋亡细胞明显增多。流式细胞仪分析结果表明, 细胞凋亡率明显上升, 呈剂量依赖性。PB3A 对HCT-116 细胞具有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。     

H13诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡及其机制的研究

探讨新型Topo I抑制剂H13对人卵巢癌A2780的杀伤和诱导凋亡的作用机制.MTT法对人卵巢癌A2780的杀伤作用;流式细胞仪研究H13对A2780细胞的凋亡诱导作用;Western Blot法检测H13对A2780细胞内caspase-3和p53蛋白表达的影响.H13对人卵巢癌A2780有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性;A2780细胞在H13作用后出现特征性凋亡形态特征,且凋亡率由5.7%上升为20.6%;H13明显增加p53蛋白的表达和caspase-3蛋白的表达.H13对人卵巢癌A2780有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能依赖于细胞内p53蛋白和caspase-3蛋白表达增高.     

Sojucktang induces apoptosis via loss of mitochondrial membrane potential and caspase-3 activation in KLE human endometrial cancer cells

Sojucktang （SJT） has long been used for the treatment of endometrial diseases in Korea. However, the mechanisms responsible for the SJT-induced apoptosis in endometrial cancer cells remain unclear. In the present study, SJT was demonstrated to show cytotoxic effect and induce apoptotic cell death via mitochondrial regulation in KLE endometrial cancer cells. Linderae Radix, Glycyrrhizae Radix, Zedoariae Rhizoma, Trogopterorum Faeces and Agelicae Gigantis Radix were found to be the potent constituent herbs of SJT to significantly decrease the viability of KLE cells by a tetra zolium salt （XTT） assay. Apoptotic bodies were observed in SJT-treated KLE cells by 4′-6-diamidino-2-phenylindole （DAPI） and TdT-mediated-dUTP nick-end labeling （TUNEL） assay. SJT also increased sub-G1 DNA contents of the cell cycle undergoing apoptosis in a dose-dependent manner. Furthermore, it was observed that SJT activated caspase-3 and cleaved poly （ADP-ribose） polymerase （PARP）, and decreased mitochondrial membrane potential in a dose-dependent manner. Taken together, this study shows that SJT exerts anti-tumor activity against KLE endometrial cancer cells via mitochondrial dependent apoptosis induction.