内毒素血症时小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体的表达

目的 探讨内毒素肺损伤时,肺泡巨噬细胞逐步由免疫防御型转变为效应型的分子机制。方法 建立内毒素肺损伤动物模型,免疫组化法观察肺泡巨噬细胞ＣＤ１４及清道夫受体（ＳＲ）表达的变化,并辅以计算机图像分析;同时检测肺体指数,肺组织的病理变化及动物存活率。结果 内毒素对ＣＤ１４的表达呈时间依赖性升高,但加大剂量并未使其进一步增加;ＳＲ呈时间及剂量依赖性降低。肺泡巨噬细胞ＳＲ、ＣＤ１４的表达变化与小鼠肺损伤程     

不同剂量X射线诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的量效关系

目的：观察X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的影响。方法：昆明种小白鼠80只,随机分为10组（每组8只）,即假照组、 4个单次低剂量X射线照射组（0.05、0.075、0.1 和0.2 Gy）和5个单次高剂量X射线照射组（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）,X 线全身照射（WBI）后16 h处死小鼠,取腹腔巨噬细胞,用RPMI 1640培养基,在37℃、5％ CO₂培养箱中培养72 h,留取上清液,采用ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的分泌量。结果：0.05 Gy X射线WBI后,IL-18的表达有所增高,检测值为(59.53±3.68)ng•L^-1,与假照组(51.29 ±3.26)ng•L^-1比较差异无显著性（P＞0.05）;0.075 Gy X射线WBI后,IL-18的表达量增高至(122.78±8.07)ng•L^-1,与假照组比较差异有显著性(P<0.01);随着X射线辐射剂量增加至0.1、0.2 、0.5和1.0 Gy,IL-18的表达量增高至(135.32±5.27)、(149.40±16.54)、(200.42±15.42)及(347.59 ±17.88)ng•L^-1,1.0 Gy照射达到峰值,随后IL-18表达呈下降趋势;2.0、4.0及6.0 Gy WBI后,IL-18的表达量分别为(229.49±14.68)、(253.79±6.69)及(223.32 ±20.85)ng•L^-1,均高于假照组(P<0.01)。结论：高、低剂量X射线照射均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的表达。     

不同剂量X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的影响

目的:观察不同剂量X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞转录因子NF-κB的影响.方法:用凝胶电泳迁移率变化分析法得到电泳带,用PhosphorImager扫描仪分析数据.结果:0.075 Gy X射线全身照射后4 h开始小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的DNA结合活性逐渐升高,48 h时基本恢复到假照水平,2.000 Gy X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的DNA结合活性从8 h开始上升,持续到48 h.结论:低剂量和较高剂量X射线均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞中的转录因子NF-κB.     

不同剂量X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的影响

目的 :观察不同剂量 X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞转录因子 NF- κB的影响。方法 :用凝胶电泳迁移率变化分析法得到电泳带 ,用 Phosphor Imager扫描仪分析数据。结果 :0 .0 75 GyX射线全身照射后 4h开始小鼠腹腔巨噬细胞 NF- κB的 DNA结合活性逐渐升高 ,48h时基本恢复到假照水平 ,2 .0 0 0 Gy X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞 NF- κB的 DNA结合活性从 8h开始上升 ,持续到 48h。结论 :低剂量和较高剂量 X射线均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞中的转录因子NF-κB。     

外周血巨噬细胞功能状态检测方法的建立

目的：运用荧光标记的抗细胞表面抗原和抗细胞因子抗原，结合固定、破膜处理技术，建立四色荧光染色法流式细胞术检测巨噬细胞功能状态的方法。方法：应用流式细胞术检测了l例肝素正常对照，l例肝素抗凝的慢性活动性乙型肝炎外周血(PBMC)CDl4^ 巨噬细胞的吞噬率以及前向角光散射(细胞大小)FSC值、侧向角光散射(颗粒度)SSC值、细胞话化相关表面抗原(CD69)、核细胞增殖相关抗原(Ki—67)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达率。结果：SSC、吞噬率、CD69、Ki—67和TNF—α表达率在同一样本表达水平一致。结论：采用流式细胞术检测细胞颗粒度、吞噬率、Ki—67和TNF—α的表达率，是又一灵敏、快速、客观评价外周血CD14^ 巨噬细胞功能状态的方法。     

烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞CD14表达变化的影响

目的 :探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14的mRNA基因和膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。　方法 :分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用后提取总RNA ,用RT PCR方法检测不同时相点CD14mRNA表达 ;用ELISA方法检测培养液中TNF α和IL 6浓度 ;免疫组化法检测AM膜CD14蛋白表达变化。　结果 :经烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14基因以及蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,然后逐渐减弱。上述改变在伤后 12h内持续 ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的基因和蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。　结论 :严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加。这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌     

内毒素对巨噬细胞膜CD14表达的影响及与膜脂微环境关系

目的 研究内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激下巨噬细胞膜脂改变对CD14表达的影响。方法 LPS体外刺激巨噬细胞，用Western blot及RT-PCR检测随时问变化细胞膜CD14 mRNA及蛋白表达的变化；同时观察膜脂微环境变化对CD14表达的影响。结果 LPS刺激巨噬细胞1h CD14表达增加，5h达高峰，8h降至正常水平；而CD14 mRNA水平3h达高峰，5h降低。LPS刺激巨噬细胞5h后细胞膜脂成分降解，膜脂流动性降低，CD14表达增加；用脂质体预处理后膜脂含量增加，膜脂流动性增加，CD14表达降低。结论 LPS体外刺激能上调巨噬细胞膜CD14表达，且此调节作用可能至少发生在转录水平；LPS刺激巨噬细胞使主要膜脂成分降解，膜流动性降低，这可能是LPS上调CD14的重要原因。     

IL-6和IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞CD14清道夫受体mRNA表达的影响

目的：探讨感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的分子机制。方法：通过体外培养肺泡巨噬细胞，施加IL-6和IL-10刺激，应用RT-PCR方法观察肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体（SR）mRNA的表达变化。结果：在基因转录水平，IL-6对CD14表达呈时间-剂量依赖性上调，对SR的表达呈进行性下调；IL-10对SR表达呈时间-剂量依赖性上调，下调CD14表达。结论：促炎因子IL-6对肺泡巨噬细胞SR表达下调及CD14表达上调可能是感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御转化为致炎效应细胞的机制之一，抗炎因子IL-10可能对这一转化过程起到一定的抑制作用。     

小儿肠道感染外周血单核细胞表面抗原HLA-DR及CD14的变化

肠道感染在儿科是常见的疾病之一,严重者并发脱水、高热、甚至惊厥危胁生命。目前儿科肠道感染多分为细菌性和病毒性,我们对肠道细菌感染患者检测外周血单核细胞表面抗原HLA-DR及CD14,探讨其在小儿肠道细菌感染中的变化。1资料与方法1·1一般资料选择2003年7月—10月收入我科的     

X射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察不同剂量 X 射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法：Annexin-V和PI双染后，采用流式细胞术检测小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞在照射后不同时间的细胞凋亡变化。结果：2 Gy X 射线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞 凋亡百分率在照射后24 h明显升高（Ｐ< 0.05），腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后4 h开 始明显升高（Ｐ< 0.05，Ｐ< 0.01），持续到48 h（Ｐ< 0.001）；0.075 Gy X 射 线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞凋亡百分率在照射后24 h明显降低（Ｐ< 0.05）， 腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后2 h开始至照射后16 h均有显著降低（Ｐ< 0.05）。 结论：较高剂量辐射促进小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡，而低剂量辐射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细 胞凋亡没有促进作用，并且能降低免疫细胞凋亡。     

不同浓度脂多糖对J774A.1细胞CD14表达的影响

目的：探讨不同时间和不同浓度脂多糖（LPS）对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞CD14表达的影响。方法：用不同浓度LPS刺激J774A.1细胞后,FITC-CD14单克隆抗体染色45 min,用流式细胞术检测J774A.1细胞CD14的表达,观察用LPS刺激不同时间（1、2、4、8及16 h）后J774A.1细胞CD14表达的变化;选择最佳时间后,观察不同浓度(1、10、50 、100、500及1 000 μg·L^-1）LPS对J774A.1细胞CD14表达的变化。结果：在时间-效应关系上, 当LPS浓度为1 μg·L^-1时,刺激1、2 及4 h后CD14表达增强（分别为23.80±5.07、23.04±2.88、28.22±1.54）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.01）,LPS浓度为10 μg·L^-1时,刺激1和2 h后CD14表达增强（分别为40.85±6.05、26.63±6.17）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.05,P<0.01）,而LPS浓度为50 μg·L^-1时,刺激1 h后CD14表达增强（47.40±2.85）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.01）。在剂量-效应关系上,刺激4 h时LPS浓度为小于10 μg·L^-1时CD14表达蛋白明显高于对照组（P<0.01）。结论：用LPS刺激J774A.1细胞表达CD14时,LPS刺激时间最好是在4 h以内,刺激浓度最好不要超过50 μg·L^-1。     

X射线全身照射对胸腺CD3_＋细胞的影响

本实验采用流式细胞术研究了不同剂量Ｘ射线全身照射对小鼠胸腺细胞亚组的影响。结果表明，胸腺细胞在成熟分化的不同阶段，具有不同的辐射敏感性，ＣＤ３＋细胞（即成熟的胸腺细胞）具有相对的辐射抗性。０．５、１．０、２．０Ｇｙ照射后２４小时，ＣＤ３＋细胞的相对比例呈剂量依赖性增高，但在４．０Ｇｙ照射后２４小时未进一步上升。     

Cholecystokinin octapeptide inhibits the in vitro expression of CD14 in rat pulmonary interstitial macrophages induced by lipopolysaccharide

Obejective To study the effect of cholecystokinin octapeptide (CCK-8) on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated pulmonary interstitial macrophages （PIM） in vitroMethods PIM were isolated and cultured in the presence or absence of LPS, CCK-8, proglumide (the antagonist of CCK receptors) and vehicle. The expression of membrane CD14 (mCD14) protein was assayed by flow cytometry and soluble CD14 (sCD14) in the supernatant was analyzed semi-quantitatively by Western blot. TNF-α in the supernatant was detected with ELISA.Results CCK-8, at concentrations of 10［-7］ mol/L and 10［-6］ mol/L, significantly inhibited the expression of mCD14. Release of sCD14 and TNF-α in the supernatant was up-regulated by LPS (1μg/ml) but reduced by CCK-8. The effect of CCK-8 was inhibited by proglumide.Conclusion CCK-8 negatively modulated several functions of LPS-stimulated PIM through CCK receptors. This may be one of the mechanisms for CCK-8 to alleviate inflammation in lung tissue during endotoxemia.     

枯否细胞功能状态与CD14表达的关系

目的　探讨KCs的功能状态与CD14表达的关系。方法　采用卡介苗 (BCG)致免疫性肝损伤的动物模型 ,并应用SDS -PAGE电泳和Westernblot印迹分析枯否细胞表面CD14的表达。结果　BCG可诱导肝KCsCD14表达上调 ,且其表达强度与枯否细胞的活化程度及肝损伤程度呈正相关。结论　KCsCD14的表达与KCs活化状态密切相关 ,提示通过调整KCs的功能状态可能减轻LPS等致肝损伤作用     

CD14在胆道阻塞所致继发性肝损伤中的作用

目的研究胆总管阻塞小鼠肝脏CD14表达的变化及其影响。方法应用小鼠胆总管阻塞模型,观察胆总管阻塞7,14,28d后血浆内毒素水平(LPS)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肝组织肿瘤坏死因子(TNF-α)及肝脏CD14表达。结果胆总管阻塞7,14,28d后小鼠出现明显的肝损害,表现为ALT、AST、血浆内毒素(LPS)水平、肝组织TNF-α的增高,肝组织CD14表达水平随着阻塞时间的延长而逐渐增高。结论胆道阻塞后小鼠发生了肠源性内毒素血症(IETM)及肝损害,肝组织CD14表达水平显著升高并发挥了重要的作用。