柏毒蛾核型多角体病毒的分离鉴定

柏毒蛾核型多角体病毒的分离鉴定李崇荣,彭辉银,周显明,陈新文,谢天恩（贵州省铜仁地区林科所,铜仁５５４３００）（中国科学院武汉病毒研究所,武汉４３００７１）（贵州省林业科学研究院,贵阳５５００１１）关键词柏毒蛾,核型多角体病毒柏毒蛾（Ｐａｒｏｃｅｎｅ...     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒的分离鉴定

本文报道了新分离的一株核型多角体病毒:蜀柏毒蛾核型多角体病毒(Paroceneria orient Nuclear Polyhedrosis Virus)。其多角体为四边形、五边形、大小在1.06—2.42μm。病毒粒子杆状,大小为385×55nm。室内感染蜀柏毒蛾幼虫其死亡率达9S％具较强的毒力。     

草原毛虫核型多角体病毒新分离株的基因组测序与分析

草原毛虫(Gynaephora ruergensis Chou et yin)是我国高原牧草中的一种有害害虫。草原毛虫核型多角体病毒新分离株(EupsNPV-Gr)具有典型的杆状病毒特征,呈单粒包埋型病毒粒子,ODV颗粒呈不规则的多边形,直径为1.0μm~1.35μm。EupsNPV-Gr能有效杀灭草原毛虫幼虫,它对草原毛虫的半致死浓度LC₅₀为4×10⁴PIB/mL,是一种理想的生物防治剂。本研究对第一个EupsNPV-Gr基因组进行了测序和鉴定。EupsNPV-Gr基因组全长140684bp,包含134个开放阅读框。它与茶毛虫核型多角体病毒(EupsNPV)关系最为密切,序列同源性高达99%。系统进化分析表明,EupsNPV-Gr属于杆状病毒科alpha杆状病毒属,根据公认的种属划分标准,EupsNPV-Gr是EupsNPV的一个株系。新报道的基因组为研究该物种毒力的分子机制提供了基础。     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀伯毒蛾核型多角体病毒（Ｐａｒｏｃｎｅｒｉａ ｏｒｉｅｎｔａ Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,简称ＰａｏｒＮＰＶ）形态结构、结构多肽、限制内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了ＰａｏｒＮＰＶ的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用５种限制性内切酶对ＰａｏｒＮＰＶ基因组ＤＮＡ进行了酶切分析。结果表明：经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为３１．５ｋＤ,不     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀柏毒蛾核型多角体病毒(Parocneria orienta Nuclear polyhedrovirus,简称PaorNPV)形态结构、结构多肽、限制性内切酶图谱等特性进行了研究.采用不连续系统垂直板SDS-PAGE分析了PaorNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽.应用5种限制性内切酶对PaorNPV基因组DNA进行了酶切分析.结果表明:经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为31.5 kD,不经热处理的多角体蛋白有三条带,分子量分别为31.5 kD、29.1 kD、28.6 kD;病毒粒子包含有25种结构多肽,分子量范围在17.6-114.6 kD之间.PaorNPV DNA经BamH I.EcoR I、HindⅢ、Pst I和Xho I酶切分别产生9、12、12、12和14条片段.基因组大小平均为124.6 kb.     

异源多角体蛋白对家蚕核型多角体病毒粒子的包装

利用PCR方法从AcMNPV基因组DNA中分离出多角体蛋白基因 ,将该扩增片段克隆到转移载体pBacPAK8中 ,得到重组转移载体pOAc。将该质粒DNA与线性化的Bm BacPAK6病毒基因组DNA共传染BmN细胞 ,得到了能形成多角体且不产生蓝色空斑的重组病毒hp BmNPV。纯化该重组病毒的多角体颗粒 ,并对多角体蛋白、病毒核酸及多角体病毒颗粒进行分析 ,发现AcMNPV的多角体蛋白能在家蚕细胞中大量表达且能在细胞内识别家蚕核型多角体病毒并组装成多角体颗粒 ;病毒基因组DNA因部分交换 ,其酶切行为发生了相应的变化 ;电镜观察发现经AcMNPV多角体蛋白包装的家蚕核型多角体病毒的多角体颗粒大小为1 2 μm～ 2 9μm ,明显小于野生型家蚕核型多角体病毒的多角体颗粒     

杉叶毒蛾核型多角体病毒的分离鉴定

杉叶毒蛾 (Ｄａｓｙｃｈｉｒａｔｈｗａｉｔｅａｉ) ,又名大茸毒蛾 ,属鳞翅目 ,毒蛾科[1] 。在我国广东 ,广西及西南等省区均有分布 ,贵州省全省杉木产区均有发生 ,主要危害杉木、茶、油茶、枫香和华山松等 ,1 995年于贵州省黄平采集到自然病死幼虫 ,经分离鉴定 ,该病原物为一种核型多角体病毒。1　材料与方法1.1　ＤｔＳＮＰＶ多角体的分离纯化取自然病死虫体充分捣碎 ,以 50 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,去除细胞碎片和沉淀 ,取上清于 4 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 30ｍｉｎ。用蒸馏水悬浮沉淀 ,重复上述方法差速离心 2次 ,所得多角体较为纯净 ,置冰…     

川尾尺蠖核型多角体病毒的分离鉴定

川尾尺蠖 (ＯｕｒａｐｔｅｒｙｘｅｂｕｌｅａｔＭｏｏｒｅ) ,属鳞翅目 ,尺蛾科。又名寸寸虫 ,拱拱虫。川尾尺蠖食性杂 ,最近发现在贵州危害茶树。川尾尺蠖一年发生两代 ,以老龄幼虫在枝条或叶片上越冬 ,越冬代成虫在湄潭地区于 5月上旬出现 ,第二代成虫于 9月上旬至 1 0月下旬陆续羽化产卵 ,9月下旬至 1 1月上旬孵化进入越冬。 1 995年 8月于贵州湄潭茶园获得自然死亡的川尾尺蠖幼虫 ,经分离鉴定是一株核型多角体病毒。1　材料与方法1.1　多角体的分离纯化将自然死亡的病死虫体充分捣碎 ,以 50 0ｒ/ｍｉｎ离心 3ｍｉｎ ,除去沉淀 (细胞碎片…     

赤松毛虫(Dendrolimus spectabilis)质型多角体病毒经卵传递的研究

昆虫病毒的经卵传递,对于昆虫种群中病毒病的自然发生和传播有着重要意义,有关这方面的工作,前人已有一些报道,作者在利用质型多角体病毒(CPV)防治赤松毛虫工作中,对赤松毛虫CPV经卵传递的现象进行了观察,报道如后。 材料和方法 CPV系中国林科院林科所提供。将CPV悬液浸湿松枝,室内晾干后饲喂6—7龄幼虫,室外选择虫口密度较大的林地,在幼虫6—7龄时用CPV悬液喷雾防治。分别收取室内和防治区松树上的虫蛹,单个置于灭菌玻璃容器中,成虫羽化后,检查蛹便有无多角体。解剖部分成虫观察肠道病变,检查中肠有无多角体,另部分成虫置养虫笼中产卵,幼虫孵化后,单个饲养于灭菌容器中,逐日检查记载子代病死虫数。用扫描电镜检查雌蛾外生殖器和卵的表面有无多角体。     

大尺蠖核型多角体病毒的研究

1977年从湖南省网岭茶园内罹病大尺蠼幼虫中分离获得大尺蠖核型多角体病毒。多角体近圆形、菱形、三角形或六方形,大小约1.2—3.6微米。电镜下观察病毒粒子为杆状(49—63毫微米×251—282毫微米)。属杆状病毒科(Baculoviridae)杆状病毒属(Baculovirus)A亚组(Subgroup A)。 对4—5龄大尺蠖室内口服的致死中浓度(LC₄₀):4天为10^-4.497(787个多角体),9天为10^-5.0(243个多角体),11天为10^-6.321(7个多角体)。不同感染方法感染3—4龄幼虫7其致病力不同。大田防治杀虫效果达98%,并有后效作用。     

用免疫金颗粒标记鉴定舞毒蛾核型多角体病毒的抗原

用免疫电镜金颗粒标记技术准确、快速地对舞毒蛾(Lymantria dispar)核型多角体病毒抗原进行了定位和鉴定.舞毒娥病毒的多克隆抗体与同源的多角体抗原之间存在着强烈的亲和性,但与不同源的松柏锯角叶蜂(Neodiprion sertifer)病毒多角体抗原仅有极微弱的交叉反应.舞毒蛾病毒粒子和核衣壳抗原也能与同源的多克隆抗体作用.在被病毒感染的舞毒蛾脂肪体细胞核中,成熟的多角体被金颗粒重重标记,其外缘的游离病毒粒子和核衣壳亦被标记,但亲和力较弱.在被感染的脂肪体细胞核和质内发现一种与多角体蛋白晶体不同源的菱形结晶体.     

用核酸斑点杂交法比较油桐尺蠖核型多角体病毒与某些昆虫杆状病毒的同源性

有关核型多角体病毒基因同源性的研究报道不多,结果也不甚一致。目前,国内外普遍用SDS-PAGE法分析昆虫杆状病毒结构多肽,以限制性内切酶谱法测定基因组大小,借此区分来自不同宿主的病毒株,和基因组密切相关     

苜蓿丫纹夜蛾杆状病毒在四个异源连续细胞系内的传代复制

本文比较了苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)在贪食夜蛾IPLB-SF-21AE细胞及其克隆株IPLB-SF-21AEC细胞,棉铃虫SIE-HAH-806细胞和粘虫SIE-MSH-805细胞系内长期连续传代复制的情况,每代病毒复制的历程为7天,观察指标是,细胞内形成多角体的百分率,游离病毒粒子的TCID50,对幼虫活体感染性,以及受感染后细胞超微结构的变化,结果证实,AcNPV在异源IPLB-SF-21AE昆虫细胞系内连续复制至50代次后,依然具有正常的形态和感染性,这为在离体下长期有效地复制杆状病毒提供了可能,我们还发现,在离体系统内增殖的病毒,其正常形态和感染性的维持与选用敏感细胞的种类有关。     

在大肠杆菌中人腺病毒5型及昆虫核多角体病毒晚期启动子表达CAT基因

本文证明,含有人5型腺病毒及苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AutograPha californica Nuclear Polyhedrosis Virus, AcNPV)启动子的DNA片段,可在大肠杆菌中起始氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol Acetyltransferase,CAT)基因的转录和表达,使转化宿主菌表现为氯霉素抗性型。这说明,除痘苗病毒启动子外,其它人类病毒及昆虫病毒的启动子也能有效地在大肠杆菌中工作。     

银染色测定粘虫核多角体病毒多角体基因序列

LsMNPV DNA用EcoRV酶切进行基因组克降,用AcMNPV的部分多角体基因顺序DNA片段作探针,菌落原位杂交法结合测序筛选到分别含LsMNPV部分多角体基因的重组质粒pLsEV1和pLsPH5。用银染色PCR线性扩增双脱氧法测序,发现LsMNPv的完整基因即位于这两个片段上。LsMNPV多角体基因长741bp,编码区碱基同源性与AcMNPV和MbMNPV分别为80.0％和97.0％,氨基酸同源性分别为89.8和97.5％。氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,谷氨酰胺和色氨酸含量最低。密码子选用以第三个碱基为嘧啶的密码子频率最高。多角体蛋白N端有一类似信号肽结构的26个氨基酸的疏水区。