生长相关蛋白及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达

为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白 (GAP-4 3 )及其 m RNA的表达 ,采用正常 SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型 ,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织 ,以 Western Blot和 RT-PCR法检测 GAP-4 3及其 m RNA的表达。RT-PCR法检测结果显示 ,正常大鼠坐骨神经组织中 GAP-4 3 m RNA表达量较低 ,而损伤坐骨神经的远侧段 GAP-4 3 m RNA的表达量明显增加 ,于损伤第 2周时达高峰。用抗 GAP-4 3抗体进行 Western Blot检测 ,结果表明 ,正常坐骨神经 43 k Da处出现弱阳性反应的蛋白区带 ,而损伤后坐骨神经远侧段 43 k Da处阳性反应条带着色明显加深 ,损伤后第 3周时阳性反应着色最强。本研究结果提示 ,GAP-4 3及其 m RNA在大鼠损伤坐骨神经远侧段组织中表达增强 ,其 m RNA表达上调高峰在神经损伤后的第 2周 ;而其蛋白合成增加最为明显的时间是在神经损伤后的第 3周。     

大鼠羊膜上皮细胞移植对损伤脊髓生长相关蛋白43表达的影响

目的:探讨羊膜上皮细胞(AECs)移植对大鼠损伤脊髓生长相关蛋白43(GAP-43)表达和神经功能恢复的影响.方法: 取E12d～14d的SD大鼠AECs体外培养;改良-Allen撞击法制备大鼠脊髓损伤(SCI)模型,并随机分成假手术组、SCI+生理盐水对照组和SCI+AECs移植组;分别于术后第1、3、7、14和28天通过BBB 神经行为学评分法对神经功能进行评估,观察其恢复状况,并采用免疫组织化学和免疫印迹法检测脊髓组织GAP-43表达的变化.结果: GAP-43的表达于脊髓损伤后第7天显著增加,AECs移植后损伤脊髓中的GAP-43持续高表达至第28天,而盐水对照组的表达于术后14d左右逐渐恢复至正常水平.与盐水对照组相比较,AECs移植后2～4周脊髓损伤大鼠的后肢运动功能得到一定的改善.结论: AECs移植后可使损伤大鼠脊髓GAP-43的表达增高,并在一定程度上促进了大鼠后肢运动功能的恢复.     

生长相关蛋白-43对脊髓损伤后大鼠骨代谢和骨密度变化的影响

目的:探讨生长相关蛋白(GAp-43)对脊髓全横断损伤后骨质疏松的修复作用,为临床治疗提供实验依据.方法:实验采用 SD 大鼠,制成脊髓损伤模型后随机分为 GAP-43 抗体组、GAP-43 抗原组和对照组.观察各组大鼠肢体功能的恢复情况,用 BBB 评分法进行不同时段的行为学评分;H-E 染色;检测不同时期大鼠血清钙、碱性磷酸酶和骨密度的变化.结果:对照组在不同的时间段行为学评分最低,抗原组评分最高,脊髓损伤区出现明显的病理改变,术后对照组的血清钙、碱性磷酸酶水平呈下降趋势;抗原组的血清钙水平呈上升趋势、碱性磷酸酶水平先上升后下降;抗体组的血清钙水平呈上升趋势、碱性磷酸酶水平呈下降趋势.术后3组的骨密度水平先上升后下降,总体呈下降趋势,对照组的下降最快、抗原组最慢.结论:GAP-43 能通过促进损伤脊髓神经元功能的恢复和再生而抑制骨量丢失,对进一步探索脊髓损伤并发骨质疏松症的机制以及寻找防治骨质疏松的方法具有重要的意义.     

坐骨神经损伤模型大鼠神经传导速度及损伤运动神经元内生长相关蛋白43表达与磁刺激干预

背景：磁刺激可促进损伤神经的修复。 目的：观察磁刺激对大鼠损伤坐骨神经神经传导速度及相应水平脊髓运动神经元内生长相关蛋白43表达的影响。 方法：将60只SD大鼠随机分为实验组(n=24)、模型组(n=24)和假手术组(n=12),用一新的长17 cm的止血钳钳夹坐骨神经至第二扣,以21.95×10³ Pa维持10 s制备损伤模型。造模后24 h,实验组每天给予0.09 T的磁刺激。 结果与结论：造模后第2,4,8,12周,免疫组织化学染色显示实验组脊髓L4~5运动神经元生长相关蛋白43的表达较模型组相应时间点明显增高( P < 0. 05);造模后12周,电生理检测发现,与模型组比较,实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏期缩短(P < 0.05)。说明磁刺激能提高损伤坐骨神经的传导速度,增加其对应脊髓节段运动神经元中生长相关蛋白43的表达,对大鼠损伤坐骨神经的修复起促进作用。     

神经生长相关蛋白GAP-43在脊髓损伤后不同时段的表达

目的探讨成年大鼠脊髓损伤后不同时段神经生长相关蛋白GAP-43表达的改变及其在脊髓损伤修复中的意义。方法应用改良的Allen’s法和数字化脊髓损伤模型制备仪建立大鼠脊髓损伤模型,用免疫组织化学方法检测脊髓在损伤后不同时段GAP-43的表达,分析免疫阳性细胞数和细胞的积分光密度值,资料用q检验进行统计分析。结果GAP-43表达于脊髓神经元胞浆及突起中,在前角运动神经元中更为明显,损伤后一周内免疫反应逐渐增强,损伤后第5天积分光密度值（10D）达到高峰（P〈0．01）,2周后明显下调（P〈0．05）。结论脊髓损伤可能诱导损伤区GAP-43表达,在损伤后7d左右表达高峰期出现,提示其可能参与了脊髓损伤神经的生长修复过程。     

硫酸软骨素酶ABC对大鼠脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖与生长相关蛋白43表达的影响

目的:探讨硫酸软骨素酶ABC对严重的大鼠脊髓损伤蛋白多糖及生长相关蛋白43(GAP-43)基因表达的影响。方法:制作大鼠脊髓横断伤模型,分为脊髓损伤组和脊髓损伤治疗组,给于治疗组硫酸软骨素酶ABC鞘内注射,用免疫荧光组织化学观察硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)的表达,半定量RT-PCR、Western印迹法观察GAP-43 mR- NA及蛋白的表达。结果:治疗组与损伤组比较,CSPGs的表达减少,差异具有显著性,而GAP-43mRNA及蛋白表达增多。结论:硫酸软骨素酶ABC能够裂解CSPGs,改善脊髓损伤区的微环境,促进GAP-43 mRNA及蛋白的表达,是修复脊髓损伤和促进神经再生的机制之一。     

生长相关蛋白在损伤坐骨神经中的表达

目的：研究大鼠周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白的表达。方法：取正常SD大鼠坐骨神经和离断损伤后不同时间近侧端和远侧端神经组织，采用Anti-GAP－43抗体以Western blot方法检测GAP－43的表达变化。结果：NC膜上43kDa位置出现阳性反应条带，在正常坐骨神经中反应微弱，损伤后明显加强，随损伤时间延长，神经近侧端的反应无明显改变，神经元侧端的反应逐渐加强，以第3周为最强，之后逐渐减弱，结论：GAP－43在正常坐骨神经中低表达，损伤后近侧端与远侧端表达均增加，远侧端的表达增加以第3周为高峰。     

糖尿病大鼠海马生长相关蛋白GAP-43表达的研究

目的:确定链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠早期海马区生长相关蛋白(GAP-43)的表达,研究GAP-43在糖尿病时海马组织中的变化并讨论其意义。方法:SD雄性大鼠16只分为对照组和糖尿病组。用STZ制作糖尿病大鼠模型,饲养5 d,然后测血糖以确定模型大鼠成功。4周后进行灌注固定,按要求进行组织学病理检查和免疫组织化学方法观察糖尿病组和对照组的大鼠海马CA1、CA2、CA3和CA4区GAP-43的表达情况。结果:与对照组大鼠比较,糖尿病大鼠血糖明显升高(P0.05),部分锥体细胞的胞体明显增大,核显著着色;海马各区GAP-43的表达显著,特别是CA1和CA3区的表达增高更为显著(P0.05),同时海马各区GAP-43阳性颗粒平均灰度值明显降低(P0.05)。结论:结果表明,在糖尿病大鼠早期海马中GAP-43的表达发生了改变,提示大脑出现了实质性损伤并伴有再生,而这些改变主要发生在记忆相关的CA1和CA3区,这对研究糖尿病性神经病变具有重要意义。     

大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析

目的：提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43)，并对PNP-43进行生化初步分析。方法：纯化抗PNP-43单克隆抗体，将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activated Sepharose 4B交联，用亲和层析的方法，提取PNP-43，并将提取的PNP-43进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PACE)和等电聚焦凝胶电泳(IEF)分析，考马斯亮蓝染色，取SDS-PAGE后染色的43kDa蛋白区带胶条，进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱检测(MALDI-TOF-MS)，测定肽质量指纹图谱，在相应的蛋白质谱数据库(MS-Fit)中检索。结果：(1)、经层析系统紫外检测，亲和层析后洗脱，在280nm波长处显示一个的紫外吸收峰。(2)、亲和层析获得的蛋白，经SDS-PAGE分析，在43．0kDa标准蛋白位置出现单一蛋白条带。(3)、经IEF。分析，PNP-43的等电点(pI)为5．8。(4)、经MALDI-TOF-MS检测，测定肽质量指纹图谱，通过MS-Fit检索未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。结论：用亲和层析的方法，获得了大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的PNP-43，通过质谱分析和MS-Fit检索提示未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。为进一步深入研究PNP-43的结构与功能提供了科学依据。     

生长相关蛋白GAP-43的研究现状

在分子水平 ,神经发育和再生时轴突的生长与一组生长相关蛋白 (ＧｒｏｗｔｈＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎｓ ,ＧＡＰｓ)的表达有关 ,这些ＧＡＰｓ被认为在神经生长阶段起着特殊作用[1] 。根据其表达与轴突生长的关系可将ＧＡＰｓ分为两类 :一类与远向延伸的轴突本身有关     

银杏叶提取物对大鼠脑出血后神经元保护作用的研究

目的:探讨银杏叶提取物对大鼠脑出血(ICH)周围神经元的保护作用。方法:胶原酶注入大鼠尾壳核建立ICH模型,然后将大鼠随机分为脑出血后治疗组,模型组和正常对照组。模型组和治疗组动物均于注射后6、24 h,3、7、14 d后处死。对各组大鼠进行神经功能评分;用干/湿重法测定脑组织的含水量;透射电镜观察神经元的超微结构并对线粒体进行体视学分析。结果:治疗组大鼠神经功能评分较模型组明显增加(P<0.05);模型组大鼠脑出血后24 h脑含水量开始升高,72 h达到高峰。银杏叶提取物治疗组脑含水量较模型组明显下降(P<0.05);与模型组相比治疗组神经元线粒体的数量明显增多(P<0.05);线粒体肿胀明显减轻(P<0.05)。结论:银杏叶提取物能保护神经元,促进神经功能恢复。     

重组水蛭素对大鼠坐骨神经损伤后神经功能的影响及可能机制

目的探讨重组水蛭素对大鼠坐骨神经损伤后神经功能的影响及对坐骨神经微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF-M)与生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白表达的影响。方法 60只SD大鼠,雌雄不限,随机分为随机分为假手术组、实验组与重组水蛭素处理组。通过钳夹大鼠坐骨神经制备周围神经损伤大鼠模型,对各组大鼠进行坐骨神经指数与小腿三头肌湿重比测定,western blot方法检测坐骨神经MAP-2、NF-M与GAP-43的表达,Real time-PCR方法检测坐骨神经MAP-2 mRNA、NF-M mRNA与GAP-43 mRNA的表达水平。结果给予重组水蛭素处理后,坐骨神经损伤大鼠的坐骨神经指数明显升高,小腿三头肌湿重比减小(P<0.05);坐骨神经MAP-2、NF-M与GAP-43蛋白与mRNA的表达升高(P<0.05)。结论重组水蛭素能促进周围神经损伤后再生和功能恢复,其机制可能与上调MAP-2、NF-M与GAP-43表达相关。     

神经生长相关蛋白在脑损伤修复中的作用

Neuronal growth associated protein (GAP-43 ) is a membrane bound phosphoprotein found in the axonal growth cones of sprouting central nervous system axons. It is neuron specific and is proposed to play a critical role in growth cone function during development of the nervous system or the regenerative recovery from axon injury. The injury leads to the transfection of fibroblasts with the GAP-43 gene, which result in increasing GAP-43 expression. GAP-43 is expressed at high levels during the course of recovery of brain injury. GAP-43 acts with calmodulin and G protein to regulate metabolic responses that initates axonal growth. It is important to reestablish neuronal structure and axonal sprouting. The level of GAP-43 returns to basal level once sprouting has finished. So more and more researchers attach importance to the study of GAP-43, which will improve the level of treatment with brain injury.     

NADPH-diaphorase activity in the spinal cord after ischemic injury and the effects of pretreatment with Ginkgo biloba extract (EGb 761)

Histochemical analysis of NADPH-diaphorase (NADPH-d) activity was performed on segments of the lumbar spinal cord in rabbit after 7 days pretreatment with the Ginkgo biloba extract Tanakan, and 30 min of ischemia followed by 24 h of reperfusion. In sections of the L5 segment of the spinal cord of untreated controls, NADPH-d-positive neurons were identified in the dorsal horns, in the pericentral region and occasionally in the ventral horns. The rabbits were completely paraplegic after 30 min of ischemia and 24 h of reperfusion. High NADPH-d activity was found in the wall of blood vessels in sections of the L5 segment and the numbers of NADPH-d-positive neurons in all sites was moderately elevated. After 7 days of Tanakan pretreatment, 30 min of ischemia and 24 h of reperfusion, the animals did not show paraplegia. Only a light tremor of the hind limbs was observed. NADPH-d activity in blood vessels and neurons was similar to that in controls. In the dorsal horns, NADPH-d positivity in neurons and fibres was increased. Our results indicate that Tanakan can scavenge free radicals produced during ischemia/reperfusion and may reduce reperfusion damage.     

银杏叶提取物对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

探讨银杏叶提取物（GBE）对脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI0的保护作用。给大鼠静脉LPS复制ALI动物模型。首先动态观察ALI的形成过程，注LPS后2h已形成明显的ALI。另批大鼠随机分成：对照组（静注生理盐水），LPS组（静注LPS，5mg/kg体重），CBE＋LPS组（注LPS前三天开始每天灌胃给GBE一次，按黄酮甙8mg/kg体重计算，当日在给LPS前h再给一次GBE），每组6只大鼠。注LPS或盐水后2h收集标本，进行测定。发现：注LPS后肺湿／干重量比，肺泡灌洗液中蛋白含量及肺血管通透指数均升高（均P＜0．01）；血中乳酸（LD），一氧化氮（NO），内皮素－1（ET－1），肿瘤坏死因子－α（TNF－α）含量及血乳酸脱氢酶（LDH）活性，均有显著升高（P＜0．01，P＜0．001）。而肺组织细胞膜Na^ -K^ ATPase活性显著下降（P＜0．01）。预先给予GBE可显著缓解上述变化（P＜0．05，P＜0．01）。提示GBE在防治肺的急性炎症性疾病中有一定的应用前景。     

臂丛损伤脊髓运动神经元与神经根GAP-43 mRNA表达

目的：探讨臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达变化及其影响因素,为臂丛损伤的修复治疗提供理论依据.方法：本实验创立三种臂丛根性撕脱伤模型：C7前根撕脱（Ⅰ组）;C7前根撕脱＋切断同侧C5～T1后根（Ⅱ组）;C7前根撕脱＋C5和C6之间作同侧脊髓半横断（Ⅲ组）.术后2周按CBS评分标准检查动物神经缺失症状,用SYBR Green荧光定量RT-PCR方法检测脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达改变.结果：根据CBS评分标准,对照组计为0分,Ⅰ组计分较低、Ⅲ组计分最高.对照组C7神经元胞体和C7神经根中GAP-43 mRNA表达量相近,但三种损伤组术后2周神经元胞体内GAP-43 mRNA表达均上调,而神经根内表达却下调.结论：（1）臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体GAP-43 mRNA表达受突触前机制的调控;（2）臂丛损伤2周时神经元胞体内GAP-43 mRNA表达呈现高峰期,此时进行神经移位术将显著提高神经修复的效果.     

腺病毒介导CNTF基因转染嗅鞘细胞移植对视神经损伤大鼠GAP-43表达影响

目的:通过检测大鼠视神经损伤后生长相关蛋白(GAP-43)的表达变化观察腺病毒介导睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)基因转染的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生的促进作用.方法:建立额下显微外科入路大鼠颅内段视神经损伤动物模型并分组,构建腺病毒介导CNTF基因转染的嗅鞘细胞并移植入动物眼玻璃体内,检测GAP-43表达的积分光密度值.结果:成功培养分离出稳定分泌腺病毒介导CNTF基因的嗅鞘细胞,CNTF治疗组和OECs-CNTF治疗组GAP-43表达较损伤对照组显著增加(P<0.01), OECs(嗅鞘细胞)-CNTF组较单纯CNTF治疗组GAP-43表达明显增加,两组间差异明显(P<0.05).结论:腺病毒介导CNTF转染嗅鞘细胞移植对大鼠颅内段视神经损伤后神经纤维长距离再生具有明显的促进作用.     

一氧化氮合酶在坐骨神经夹伤后腓肠肌中的表达变化

目的:探讨外周神经损伤后同侧腓肠肌中3种一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达变化及定位。方法:采用H-E染色及Masson三色染色法分析大鼠坐骨神经夹伤后同侧腓肠肌的病理变化,NADPH-黄递酶组织化学研究其总NOS的改变,并利用Western印迹法、免疫荧光双标法,对3种NOS表达变化及定位进行分析。结果:神经夹伤后相应腓肠肌发生了明显的病理变化且总NOS发生改变,3种NOS变化不尽相同,其表达高峰均约在4周左右。nNOS与神经丝标记物NF-200有共定位,iNOS、eNOS则分别在巨噬细胞、血管内皮细胞中有表达。结论:3种NOS在坐骨神经夹伤后相应腓肠肌中表达变化不同,可能对肌肉损伤及再生修复发挥不同作用。     

银杏酮酯对雪旺细胞合成与分泌神经生长因子的影响

目的观察银杏酮酯(EGb50)对雪旺细胞合成与分泌神经生长因子(NGF)的影响,探讨其促进周围神经再生的可能机制.方法将纯化的雪旺细胞分为EGb50.组和对照组,EGb50组(低、中、高剂量)分别加含终浓度为10、25、50μg/mlEGb50的FBS-DMEM培养液培养,对照组培养液中不加银杏酮酯.24h后应用ELISA与RT-PCR法分别于蛋白质和mRNA水平测定其对细胞合成与分泌NGF的影响.结果培养上清液中NGF吸光度(A)值对照组为(0.33±0.04),EGb50低剂量组为(0.57±0.05),EGb50中剂量组为(0.94±0.04),EGb50蜘高剂量组为(1.23±0.06),对照组均低于银杏酮酯各剂量组,差异有统计学意义(P＜0.01).NGF和内标基因(GAPDH)PCR产物的荧光强度比值EGb50低剂量组(0.97±0.06),EGb50中剂量组(1.46±0.04),EGb50高剂量组(1.83±0.06),均较对照组(0.72±0.04)高(P＜0.05).结论银杏酮酯可促进雪旺细胞合成与分泌NGF,这可能是其促进损伤神经再生的机制之一.