榆黄菇多糖对体外诱导炎症模型细胞因子的分泌及一氧化氮合酶（NOS）的影响

以榆黄菇为原料,采用水提醇沉法提取榆黄菇粗多糖,Sevage法去除蛋白,利用DEAE-Cellulose离子交换和Superdex-75凝胶层析方法纯化获得PSI和PSII两个组分;通过脂多糖（LPS）刺激建立炎症模型;利用MTT法筛选出两个多糖的优势浓度,采用吸光度分析法测定一氧化氮合酶（NOS）的活力、酶联免疫吸附试剂盒测定细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平来评价多糖对RAW264.7细胞的抗炎作用。研究结果显示,LPS浓度为5 μg/mL时,细胞炎症水平达到最高,在模型的基础上筛选出PSI的优势浓度为500 μg/mL、PSII的优势浓度为200 μg/mL;与LPS模型组相比较,PSI对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为37.54%、28.84%、28.27%和30.25%,PSII对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为51.24%、37.56%、31.35%和32.67%。研究证实,榆黄菇多糖PSI和PSII对LPS诱导RAW264.7炎症细胞具有缓解作用,主要表现在抑制炎症细胞因子的分泌水平、促进细胞增殖、降低巨噬细胞的吞噬能力等方面,而对比PSI来说,PSII对于一氧化氮合酶（NOS）以及细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平的抑制力要更强,具有更好的抗炎效果。     

沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性

本实验在体外应用脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症模型的基础上,探讨沙葱总黄酮水洗组分的体外抗炎活性。应用CCK-8法检测0、50、100、200、400、800 μg/mL沙葱总黄酮水洗组分对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活力的影响;将细胞分为空白对照组、LPS应激模型组及不同质量浓度沙葱总黄酮水洗组分预处理组,采用Griess法及酶联免疫吸附测定法分别测定各处理组细胞上清液中NO浓度和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-10的质量浓度,反转录实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各处理组细胞中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、髓样分化蛋白（myeloid differential protein,MyD）88、核因子 κB（nuclear factor κB,NF-κB）mRNA的表达水平。结果显示：与对照组相比,沙葱总黄酮水洗组分在50～800 μg/mL时对小鼠腹腔巨噬细胞无明显细胞毒性作用。与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮水洗组分能够极显著抑制促炎介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.01或P＜0.001）;高度显著提高抗炎细胞因子IL-10质量浓度及其mRNA的表达（P＜0.001）,且呈剂量依赖效应;极显著降低MyD88、NF-κB mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.001）。由此得出,沙葱总黄酮水洗组分对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞具有抗炎作用,其抗炎活性可能是通过抑制促炎性介质NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌并提高抗炎性细胞因子IL-10的质量浓度实现的,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr- Asp-Asp对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

为了研究兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr（DDDY）、Asp-Tyr-Asp-Asp（DYDD）对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞抗炎活性。以合成的兜唇石斛发酵多肽为研究对象,采用噻唑蓝法筛选增殖活性最高的发酵多肽浓度,通过中性红吞噬实验和倒置显微镜观察发酵多肽对细胞的吞噬作用和分化形态变化,使用ELISA试剂盒测定细胞中NO及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量。结果表明：12.5、25、50和100 μg/mL四组质量浓度的发酵多肽对细胞无毒性并有增殖作用;100 μg/mL的DDDY和DYDD和1 μg/mL的LPS处理可以激活细胞,增强细胞吞噬能力,相对吞噬率为2.05%、1.97%和2.19%;构建LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,发现两种发酵多肽处理有效抑制细胞分化,使细胞恢复正常形态;抑制细胞NO分泌能力,100 μg/mL DDDY和DYDD处理组的NO分泌能力降低到LPS组的0.41倍和0.49倍;并且对抑炎细胞因子分泌能力的提高和促炎细胞因子的降低有显著效果,均表现出剂量反应关系。由此可知,DDDY和DYDD对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有抗炎作用,为后面探究发酵多肽的炎症机制提供理论支持。     

海参水煮液多糖提取物体外抗炎活性的研究

目的研究海参水煮液多糖提取物(PESCPL)的体外抗炎活性。方法 PESCPL作用于经LPS诱导产生炎症的RAW264.7细胞模型,通过检测其对该模型中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1)及白介素-6(IL-6)的分泌水平、NO释放能力、诱导型一氧化氮合酶(iNOS酶)活力及环氧化酶(COX-2)表达水平的影响,共同表征其体外抗炎活性。结果 PESCPL在12.5~200μg/ml范围内可显著降低LPS诱导炎症细胞分泌促炎因子的水平,且对TNF-α和IL-1β的抑制作用呈浓度依赖性;在12.5~50μg/ml范围内可抑制炎症细胞对NO的释放能力,降低iNOS的酶活力,降低COX-2蛋白表达量。结论海参水煮液多糖有良好的抗炎活性,有望成为天然功能食品与药品的良好基料。     

山银花不同萃取部位抗炎、抗氧化体外活性评价及化学成分分析

本研究采用脂多糖（LPS）诱导的细胞炎症模型和H₂O₂诱导的细胞氧化应激模型,对山银花不同萃取部位进行抗炎、抗氧化活性评价,并通过超高压液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）分析具有显著活性的萃取部位的化学成分。结果表明,山银花甲醇提取物及其各萃取部位（50 μg/mL）均有不同程度的抗炎、抗氧化活性。其中水饱和正丁醇萃取部位的抗炎活性最强,对RAW264.7细胞内NO、TNF-α、IL-6等炎症因子的抑制率分别达66.40%、13.14%、79.66%,初步鉴定该部位中的17个有机酸类和皂苷类成分;乙酸乙酯萃取部位的抗氧化能力最强,可对RIN细胞中抗氧化酶SOD、GSH、CAT三种抗氧化因子的活性分别提高2.51、4.40、8.89倍,初步鉴定该部位中的12个有机酸类成分。因此,有机酸和皂苷类成分可能是山银花具抗炎、抗氧化活性的主要物质基础。本文为进一步阐明山银花具生物活性的物质基础及开发利用提供数据支撑。     

低聚半乳糖体外抗炎活性及其构效关系

以脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7为体外炎症模型,以促炎症细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和炎症介质NO为指标,考察低聚半乳糖(GOS)的体外抗炎活性,并从聚合度的角度探究GOS抗炎活性的构效关系。结果表明,GOS能显著降低促炎症细胞因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)和炎症介质NO的分泌,表现出良好的体外抗炎活性。不同聚合度的GOS在调控促炎症细胞因子与炎症介质分泌能力上差异显著,较高聚合度的GOS表现出更强的体外抗炎活性。     

紫甘蓝总花色苷提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的炎症反应

探讨紫甘蓝总花色苷提取物对脂多糖(LPS,1μg/mL)诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响。以不同质量浓度(1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的紫甘蓝总花色苷提取物处理RAW264.7细胞后,试剂盒法分别检测一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE_2)的分泌水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8分泌水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平。结果显示,紫甘蓝总花色苷提取物能有效下调iNOS与COX-2的m RNA表达,抑制NO和PGE_2的释放。特别地,高浓度的紫甘蓝总花色苷提取物(50μg/mL)能显著地抑制LPS所诱发的iNOS(65.80%)与COX-2(48.28%)的m RNA表达,降低NO(58.81%)和PGE_2(46.26%)的释放水平。同时,紫甘蓝总花色苷提取物还能显著下调TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平,并抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的分泌。结果表明,紫甘蓝总花色苷提取物具有较强的抗炎活性,能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞所发生的炎症反应。     

咖啡果壳多酚的提取及抗氧化和抗炎特性

咖啡果壳是咖啡生产中的主要副产品，富含多酚类物质，然而目前人们对其开发利用有限。作者以咖啡果壳为原料，对其富含的多酚进行提取纯化和表征，研究其抗氧化活性，并通过建立脂多糖（lipopolysacchride，LPS）诱导的Caco-2细胞炎症模型来探究多酚的抗炎作用。结果显示，LX-17大孔树脂的纯化效果优良，纯化的咖啡果壳多酚主要成分为3，4-二羟基苯甲酸（15.78 μg/mg），绿原酸（37.85 μg/mg）和生物碱咖啡因（55.82 μg/mg）；抗氧化测定显示提取的多酚具有良好的抗氧化活性，对DPPH自由基、ABTS+自由基和羟基自由基都具有极强的清除能力；在细胞炎症模型中，5~200 μg/mL的纯化多酚均能抑制LPS诱导的细胞炎症因子的表达（IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α），为咖啡果壳多酚的提取纯化和综合利用提供了理论基础。     

蜂胶乙醇提取物对小鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究蜂胶乙醇提取物（ethanol extracts of propolis,EEP）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠主动脉内皮细胞（mouse aortic endothelial cell,MAEC）炎症因子损伤的保护作用。方法:将细胞分为对照组,LPS模型组,蜂胶低（2.5 μg/mL）、中（5 μg/mL）、高（10 μg/mL）剂量组。采用CCK-8检测MAEC的细胞增殖率,ELISA酶联免疫吸附实验测定MAEC炎症细胞中TNF-α、IL-6的含量,Western Blot法测定MAEC炎症细胞中ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的表达水平。结果:与对照组相比,LPS组MAEC的细胞增殖率极其显著降低（P<0.001）,ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、TNF-α以及IL-6的水平极其显著升高（P<0.001）。经不同浓度EEP处理后,MAEC的细胞增殖率显著上升（P<0.05或P<0.01）,TNF-α、IL-6的含量以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1表达水平降低,各蜂胶组与LPS组相比均有显著性差异（P<0.01或P<0.001）。结论:EEP能够抑制LPS诱导的MAEC中炎症因子的表达,对血管内皮细胞具有保护作用。     

酱香型白酒中非乙醇类物质抗炎活性研究

研究酱香型白酒中非乙醇物质(maotai-flavor liquor extract,MTE)的体外抗炎活性及其作用机制。采用氯仿萃取及真空冻干获得MTE,液相色谱-质谱联用技术(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)分析其成分,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导IEC-6细胞建立炎症模型;检测MTE及MTE中26种化合物对LPS诱导的IEC-6细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定MTE及α-雪松醇处理细胞对NO及相关炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-10及细胞迁移能力的影响。结果表明,MTE、α-雪松醇(0.22 mg/mL)可显著提高IL-10分泌、降低LPS诱导的细胞凋亡、提高细胞迁移能力,降低IL-6、IL-8、TNF-α等的分泌,上调细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1 mRNA表达。酱香型白酒中含有的非乙醇物质具有一定的抗炎活性,其中α-雪松醇可显著降低LPS诱导引起的IEC-6细胞凋亡,可通过抑制炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的分泌及提高IL-10分泌发挥抗炎能力。