菱叶红景天组织培养及植株再生

目的:探索菱叶红景天组织培养与植株再生技术并优化体外繁殖体系。方法:采用正交试验设计分别研究外植体种类、植物生长物质种类和浓度对菱叶红景天愈伤组织的诱导、丛生芽的产生以及生根诱导的影响,实验数据进行极差和方差分析。结果:影响菱叶红景天愈伤组织诱导的因素依次为外植体2,4-D6-BA,叶片产生愈伤组织最佳的培养基为MS附加2,4-D 1.5 mg.L-1和6-BA0.5 mg.L-1;影响菱叶红景天丛生芽诱导的因素依次为外植体NAA6-BA,茎段产生丛生芽最佳的培养基为MS附加6-BA1.5 mg.L-1和NAA1.0 mg.L-1;试管苗生根的最佳培养基为1/2MS附加IBA1.0 mg.L-1,生根率可达90%以上,生根试管苗移栽成活率达98%以上。结论:本试验初步建立了菱叶红景天组织培养与植株再生的基本体系。     

正交法优化植物生长调节剂在黄芪愈伤组织生长中的应用

目的 研究膜荚黄芪叶愈伤组织诱导、生长及黄芪多糖合成的最佳生长调节剂组合.方法 以膜荚黄芪叶为外植体,运用正交设计研究 6-BA、2,4-D 和 NAA 等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导、培养及黄芪多糖合成的影响.结果 分别以诱导率、相对生长速率和黄芪多糖含量为指标,结果表明 NAA 和 6-BA 对愈伤组织诱导率影响显著,6-BA、2,4-D 和 NAA 都对愈伤组织的生长影响显著,2,4-D 和 NAA 对黄芪多糖合成影响显著.结论 诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS 2,4-D(0.5 mg·L-1) 6-BA(1.0 mg·L-1) NAA(2.0 mg·L-1);愈伤组织生长的最佳培养基为:MS 2,4-D(0.5 mg·L-1) 6-BA(2.0 mg·L-1) NAA(2.0 mg·L-1);促进黄芪多糖合成的最佳培养基为:MS 2,4-D(1.0 mg·L-1) 6-BA(1.0 mg·L-1) NAA(1.0 mg·L-1).     

盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析

以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+BA2.0mg·L-1+2,4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的最适培养基为MS+BA0.1mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为MS/2+IAA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显。     

外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响

目的 筛选最佳激素组合,提高锁阳组织培养效率.方法 以锁阳肉质茎维管组织作为外植体,以MS为基本培养基,基于正交实验设计研究三种外源激素配比(NAA、2,4-D和6-BA)以及蔗糖和琼脂浓度对锁阳愈伤组织诱导的影响.结果 NAA、2,4-D和6-BA三种激素对锁阳愈伤组织诱导均有显著影响,不同激素之间对出愈率的作用效应大小为2,4-D ＞NAA＞6-BA,诱导锁阳愈伤组织最佳激素配比为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA(2.0mg/L).培养基中琼脂浓度和蔗糖浓度对锁阳愈伤组织诱导率有一定影响,蔗糖浓度以30g/L,琼脂浓度以4.5g/L时愈伤组织诱导率最高.结论 锁阳愈伤组织诱导最适培养基为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA (2.0mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(4.5 g/L).     

不同激素配比对远志愈伤诱导及其黄酮积累的影响

目的:研究不同激素配比对远志根、茎、叶愈伤组织诱导的影响,并对远志根、茎、叶愈伤组织中的黄酮量进行测定分析。方法:以MS为基本培养基,分别以远志无菌苗的根、茎、叶为外植体,应用正交试验法确定2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),萘乙酸(NAA),6-苄氨基嘌呤(6-BA)这3种激素对远志根、茎、叶不同部位愈伤组织诱导及其黄酮积累量的影响。结果:2,4-D,NAA,6-BA对远志根、茎、叶愈伤诱导率均有显著影响。叶的最佳愈伤诱导组合为MS+3. 0 mg·L~(-1)2,4-D+1. 0 mg·L~(-1)NAA+1. 5 mg·L~(-1)6-BA;茎的最佳愈伤诱导组合为MS+1. 0 mg·L~(-1)2,4-D+3. 0 mg·L~(-1)NAA+1. 5 mg·L~(-1)6-BA;根的最佳愈伤诱导组合为MS+1. 0 mg·L~(-1)2,4-D+1. 0 mg·L~(-1)NAA+1. 0 mg·L~(-1)6-BA。2,4-D,NAA,6-BA对远志茎愈伤组织中黄酮积累均影响显著,以MS+3. 0 mg·L~(-1)2,4-D+1. 0 mg·L~(-1)NAA+0. 5 mg·L~(-1)6-BA为最佳黄酮积累组合; NAA,6-BA对远志叶愈伤组织中黄酮积累影响均显著,而2,4-D则无明显影响,以MS+3. 0 mg·L~(-1)2,4-D+2. 0 mg·L~(-1)NAA+1. 0 mg·L~(-1)6-BA为最佳黄酮积累组合; 3种激素分别对远志根愈伤组织中黄酮积累无明显影响,以MS+2. 0 mg·L~(-1)2,4-D+1. 0 mg·L~(-1)NAA+1. 5 mg·L~(-1)6-BA为最佳黄酮积累组合。结论:在该条件下远志根、茎、叶愈伤组织诱导率均达100%,其中尤以远志叶愈伤组织长势最好,其次分别是远志茎和远志根。在该条件下远志根、茎、叶愈伤组织中黄酮量分别达到21. 31,24. 56,23. 61 mg·g-1。     

野藤茶愈伤组织的诱导研究

目的探讨影响野藤茶愈伤组织诱导因素,建立野藤茶愈伤组织培养方法。方法以生长旺盛的野藤茶的叶、茎为外植体,采用组织培养方法,观察不同外植体、光照和植物生长物质种类及其配比对野藤茶愈伤组织诱导的影响。结果叶和茎都能诱导愈伤组织,25℃、暗培养有利于愈伤组织生长,6-苄氨基嘌呤(6-BA)与α-萘乙酸(NAA)和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的配合使用有利于愈伤组织的诱导,出愈率可达86.1%。结论野藤茶愈伤组织的最适宜培养基为MS+6-BA 1.5 mg.L-1+NAA 8 mg.L-1+2,4-D 40 mg.L-1(pH 5.8)。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。     

土贝母组织培养及植株再生

用土贝母茎段和叶片作外植体培养,可获得大量的试管苗。茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 2,4-D 2.0 mg/L NAA 0.5 mg/L BA 1.0 mg/L(单位下同);叶片愈伤组织诱导的最佳培养基配方为MS 2,4-D0.5 NAA 2.0。叶片接入MS BA 3.0 NAA 1.0培养基可直接产生不定芽;愈伤组织用MS BA 2.0 IAA 1.0培养基也可产生不定芽。MS BA 2.0 IAA 0.1适于腋芽发育、增殖。壮苗生根培养基为1/2 MS IBA 1.0。诱导愈伤组织和不定芽,选用pH 6.0,琼脂0.8%~1.0%;诱导生根选用pH 5.8,琼脂0.6%~0.7%。经炼苗后,组培苗移栽成活率达90%。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

何首乌茎愈伤组织的诱导和大黄素、大黄酸含量的检测

目的研究何首乌茎愈伤组织的诱导和大黄素、大黄酸的检测。方法以何首乌茎为外植体,在26℃和暗培养条件下,在含有1 mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和0.4 mg·L-1萘乙酸(NAA)的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,共转接3次,通过HPLC测定大黄素和大黄酸的含量。结果茎愈伤组织的大黄素和大黄酸含量分别为0.036 mg·g-1和0.019 mg·g-1。结论何首乌愈伤组织诱导培养基为含有1 mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和0.4 mg·L-1萘乙酸(NAA)的MS培养基,茎愈伤组织中存在大黄素和大黄酸。     

玄参组织培养及炼苗技术

目的:以玄参茎段、叶柄、带腋茎段和叶片为外植体,筛选出适宜的植株再生体系以及最佳的炼苗条件。方法:通过L_(16)(4~5)正交试验研究玄参不同外植体、不同激素和不同浓度对丛生芽的诱导和增殖;采用单因素方差分析不同浓度激素对不定芽生根的诱导;同时选择不同基质、不同浇水周期和不同过渡方式对玄参生根苗炼苗关键技术的优选。结果:带腋茎段为最佳外植体,其次依次为茎段,叶片和叶柄;其在MS+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA) 0. 5 mg·L~(-1)+萘乙酸(NAA) 0. 2 mg·L~(-1)中不定芽诱导率和芽增殖倍数分别为100%和9. 84;适宜不定芽生根的培养基为1/2 MS+吲哚-3-丁酸(IBA) 0. 2 mg·L~(-1),生根率100%,根数为39. 45条;就基质而言,以营养土-蛭石-珍珠岩(5∶2∶1)为移栽基质,可保持基质中肥力、透气性与保水性适当搭配;浇水周期选择每2 d浇1次水,过渡方式为室内炼苗20 d,室外遮阴大棚炼苗10 d后移栽大田,成活率可达到95%以上。结论:建立玄参无性快速繁殖体系,为提供玄参高效、快速、稳定的植株再生,优质的种苗繁育以及适宜的炼苗条件提供了有效途径。     

款冬叶柄愈伤组织培养与再生体系建立

以款冬幼嫩叶柄为材料,研究植物生长调节剂对其离休培养与植株再生的影响,建立了款冬离体快繁技术体系。结果表明:款冬叶柄切段较理想的灭菌方法为75%乙醇浸泡30 s,转入饱和漂白粉上清液浸泡15 min;适合愈伤诱导的培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L~(-1)+2,4-D 2.0 mg·L~(-1),诱导率96.2%;在培养基MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1)上芽苗分化效果较好,分化率91%,平均芽数8.26个;较佳的不定芽增殖培养基为MS+KT 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.3 mg·L~(-1),增殖倍数为11.81,平均苗高4.9 cm;生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1),生根数平均为5.68条,生根率为95.22%以上;瓶苗移栽于河沙-有机肥3∶1的基质中生长良好,成活率达90%以上;大田试验表明:同等栽培条件下款冬组培株、栽培株和野生株在生长量与花粒产量等方面存在显著差异,以组培株生长量与花粒产量相对较高。组培品与野生品有效成分含量基本一致。     

夏枯草愈伤组织诱导和植株再生技术的研究

目的:探讨夏枯草愈伤组织诱导和植株再生条件。方法:采用正交试验法研究不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对夏枯草愈伤组织诱导和分化的影响。结果和结论:以叶片为外植体诱导愈伤效果最好,茎段次之,叶柄不能诱导出愈伤组织;6-BA是影响夏枯草愈伤组织形成的主要因素;诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA 3.0 mg.L-1+NAA 0.1mg.L-1+2,4-D 0.5 mg.L-1+蔗糖3%;宜于愈伤组织分化的培养基为1/2 MS+6-BA 3.25 mg.L-1+NAA1.25 mg.L-1+蔗糖2%;最佳生根培养基:MS+IBA 1.0 mg.L-1+蔗糖3%。     

滇龙胆丛芽高效诱导与植株再生体系的建立

目的以滇龙胆Gentiana rigescens带叶茎尖、带芽茎段、叶片、根为外植体,建立滇龙胆高效、稳定的丛芽诱导体系,筛选出适宜的植株再生途径。方法以MS为基本培养基,在单因素实验的基础上,通过L16(45)正交及完全组合实验研究不同外植体和不同植物激素种类及其质量浓度对愈伤组织诱导、丛芽发生及植株再生的影响。结果带芽茎段为间接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L中培养10 d、节上腋芽开始萌发后,基部可诱导出再分化能力极强的愈伤组织,得愈率为97.73%;15 d后愈伤组织开始分化出绿色丛芽,分化率100%;30 d后不定芽分化系数达18.65,增殖系数可达63.58。带叶茎尖为直接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5mg/L中培养30 d后,增殖系数亦可达44.36。2种材料培养获得的试管苗茎细瘦弱,不利于生根培养,试管苗在MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L+PP333 10 mg/L中培养60 d后可获得健壮度大为改善的复壮苗。复壮苗生根则在1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 2.0 mg/L中进行,45 d后可获得生长健壮的再生植株,生根率100%。再生苗移栽成活率达95%以上。结论建立的滇龙胆无性快速繁殖体系,为保护滇龙胆野生资源、优质种苗繁育提供了有效途径,也为其遗传转化研究奠定了实验基础。     

药用植物墨旱莲的组织培养研究

 目的研究利用组织培养技术对药用植物墨旱莲进行快速繁殖。方法以顶芽、茎、叶和幼苗(上部为绿体,下部为愈伤组织)为外植体,诱导愈伤组织及根和芽的分化。结果在顶芽、茎、叶和幼苗4种外植体中,顶芽的愈伤组织诱导率和芽分化率均高达100%,愈伤组织褐化少,生长良好,易被诱导出不定芽,是较为理想的快速繁殖材料;茎段的愈伤组织诱导率也达100%,但其中不带茎节的茎段不能直接诱导芽分化。在适宜的培养基中顶芽和带节的茎段能大量生根,生根率均达100%。结论较适宜诱导愈伤组织的激素组合是MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.5mg·L^-1,诱导芽分化适宜的激素组合为MS+6-BA3.0mg·L^-1+NAA0.3mg·L^-1,根的诱导则在MS+NAA0.2mg·L^-1上进行。     

雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L^-1 IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L^-1 NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 mL摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。     

华重楼植株的快速繁殖研究

目的以华重楼Paris polyphylla var.chinensis根茎为外植体,建立华重楼植物的快速繁殖技术。方法以MS为基本培养基,通过研究激素6-BA、2,4-D、NAA、IBA、KT、IAA和头孢曲松钠、活性炭等对愈伤组织诱导、不定芽分化和不定根产生的影响,找出组培苗诱导培养的最佳培养基配方。结果华重楼最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.5mg/L+2,4-D 3.0 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L+头孢曲松钠300 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+活性炭0.5%。当组培苗长出第1片叶且不定根长出4条以上时将组培苗取出,先放在无菌水中栽培5 d,再移栽至松软土壤中,组培苗生长健壮,成活率为100%。结论在获得愈伤组织的基础上,进一步完成对不定芽的诱导与无根苗生根培养,筛选出了培育华重楼组培苗的最佳条件。