固定化酵母酿造黄酒试验初报

本文用海藻酸钙凝胶固定活酵母细胞酿造黄酒试验在实验室获得成功,试验结果表明:(1)黄酒发酵周期为10天,与传统生产工艺相比可缩短50—70天;(2)本试验制成之黄酒含乙醇16％(v)左右,糖份为0.6(g/1OOml),总酸为0.4(g/100ml)以下。     

固定化细胞生产黑色素的研究

利用固定化产酪氨酸酶的假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）以酪氨酸为底物生产黑色素．该黑色素的紫外扫描光谱图显示随波长的减小其吸收值增大，在２１０ｎｍ处有一吸收峰；红外光谱显示它在３μｍ和６μｍ处有吸收峰，从而证实它是一种黑色素．固定化细胞摇瓶半连续发酵产黑色素结果表明，最适温度为３７℃，最适ｐＨ为９．５．加入微量铜离子、供氧良好和较低的底物加入量有利于黑色素的生成．在生理盐水中低温振荡处理可提高操作稳定性，使重复利用次数达到９次，连续使用１８０ｈ     

脂肪酶在聚乙二醇二丙烯酸酯交联聚合物上的固定化

研究了聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)作为预聚物,三羟甲基丙烷三丙烯酸酯(TMPTA)为交联剂,紫外光引发交联聚合,实现对脂肪酶固定化的方法.结果表明所制备的固定化酶与游离酶相比催化活性提高了8倍以上,且其稳定性及对环境的适应性也大大提高,在95%的乙醇中浸泡5 d后,其催化活力仍有96%之多.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究Ⅱ，酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究

本文研究了酿酒酵母与糖化酵母的种间融合杂种HU-KDF-185在不同温度条件下发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液的酒精生成率、发酵强度和发酵速率。实验结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185在所试条件下的发酵力均超过两融合亲株,并优于酒精生产菌株K氏酿酒酵母。例如,在30℃、32℃和35℃发酵葡萄糖时,它比对照株K氏酵母分别增产酒精3.0％、1.93％和1.85％;其中在32℃发酵时,各菌株可获得最高的酒精生成率。而在32℃发酵麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液时,杂种HU-KDF-185也比K氏酵母分别增产2.0％、9.71％和5.26％。     

新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)毕赤酵母高密度发酵条件的研究

新疆家蚕抗菌肽具有明显的抑菌活性 ,利用基因工程技术生产新疆家蚕抗菌肽有助于实现工业化生产 .本研究探索通过巴斯德毕赤酵母工程菌 SMD1 1 68高密度发酵生产新疆家蚕抗菌肽 ( Cecropin-XJ)的条件 ,包括培养基中碳源、氮源、初始 p H值、磷酸盐等因素对毕赤酵母工程菌生长和抗菌肽分泌的影响 .通过多因素正交实验确定了生产新疆家蚕抗菌肽高密度发酵培养的最适培养条件 ,条件优化后毕赤酵母工程菌发酵后密度OD6 0 0 可达 48.92± 0 .5 9,较优化前提高了 3倍 ,为基因工程生产新疆家蚕抗菌肽奠定了基础     

甲醇酵母植酸酶的热稳定性

对甲醇酵母发酵生产的植酸酶性质和热稳定性进行了研究。实验结果显示该酶活的最佳pH值为pH5．5，酶液的活性稳定区间为pH5．0-6．0，当酶液中添加10mmolCaCl2时，能明显提高植酸酶的热稳定性，在80℃保温15min，其保留酶活可达到原酶液的77．8％。植酸酶液经过多羟基化合物颗粒化处理后，其酶制剂的高温热稳定性比液体酶或普通固体化处理的植酸酶制剂提高50％。     

米曲霉菌体细胞固定化及DL-蛋氨酸的光学拆分

用亚硝基胍对产氨基酰化酶的米曲霉(Aspergillus oryzae)3042进行诱变,经过筛选获得诱变菌株3042-5,再进行自然分离后得到了一株高产菌株3042-5-5a,其自由酶活力提高了215-7％-采用此菌株进行了固定化细胞酶法拆分DL一蛋氨酸(DL-Met)的研究,得到了最好的固定化条件为8％明胶包埋,0-1％戊二醛交联12h-制得的固定化细胞酶活力为81-99u／g-固定化细胞酶的最适作用温度为65℃,最适作用pH为8-0-用固定化细胞装柱,将连续拆分得到的产物用离子交换法进行分离精制,L-蛋氨酸盐酸盐的得率为理论产值的69-4％。     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究IV.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-lay菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var, ellipsoideus H UK-1> aa, his一)与糖化酵一母(Saccharomyces dia-staticus, a, arg')的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下刘一其发酵生物学进行比较研究后，在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验结采表明，种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77男，这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71 0o)和新市一号(29.54落)分别增产3.56%和4.16劣。在大米原料的发酵中，其酒精产量平均为35.38不，比大米酒精生产菌株M-85(32.87男)相对增产酒精7.64形，而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20男，比生产菌株新市一号(28.70男)相对增产酒精5.23男.由此可见，种间融合杂种HU-KDF-ls5在不同类型的淀粉质原料的发酵中，其酒精增产效果显著而稳定，这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融台技术对酒精酵母的选育，特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅳ.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-185菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var. ellipsoideus HUK-1,(1a,his~-)与糖化酵母(Saccharomyces diastaticus, a, arg~-)的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下对其发酵生物学进行比较研究后,在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验。结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77％,这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71％)和新市一号(29.54％)分别增产3.56％和4.16％;在大米原料的发酵中,其酒精产量平均为35.38％,比大米酒精生产菌株M-85(32.87％)相对增产酒精7.64％,而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20％,比生产菌株新市一号(28.70％)相对增产酒精5.23％.由此可见,种间融合杂种HU-KDF-185在不同类型的淀粉质原料的发酵中,其酒精增产效果显著而稳定,这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融合技术对酒精酵母的选育,特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的制备及理化性质研究

采用壳聚糖吸附和成二醛交联的方法,将胰蛋白酶固定于壳聚糖上．初步探讨了壳聚糖的脱乙酰度、交联剂用量及给酶量对固定化效果的影响,并对固定化酶的理化性质进行了研究．结果表明,用88％脱乙酰度壳聚糖0．2g,5％戊二醛2mL,8mg胰蛋白酶固定化效果较好;固定化胰蛋白酶的热稳定性较天然酶有较大提高,最适反应温度70℃,较天然酶提高了25℃;最适pH为7．0;表观米氏常数K’m为0．24％,天然酶Km为1．16％;室温下酪蛋白的半衰期为41d．     

硒酵母对鱼酱油品质的影响

以鱼蛋白为原料，在酶解与曲酶发酵相结合的基础上，于后熟阶段加入硒酵母作为有机硒的载体和增香工具，生产品质优良的富硒营养鱼酱油。试验结果表明：采用后熟温度35℃，酵母液量10％，酱醅盐度8％和12％，后熟发酵周期12d的工艺条件，可生产出优质的富硒鱼酱油。产品的氨基氮、有机酸等营养成分均高于国家标准，有机硒的含量达到国内专用硒保健品的水平。     

有机溶剂中固定化脂肪酶催化水解植物油脂的研究

研究了在有机溶剂中固定化脂肪酶对樟核油、棕油水解反应的催化作用,考察了有机溶剂／水、固定化酶量、反应时间等因素对水解反应的影响。实验结果表明：在３７℃时,水解樟核油的最佳条件是有机溶剂／水９８％、固定化酶量０．０２ｇ／ｇ油、反应时间６ｈ,而水解棕榈油的最佳条件是温度３５℃、有机溶剂／水９５％、固定化酶量０．０２ｇ／ｇ油、反应时间４ｈ。     

解脂耶氏酵母W29产脂肪酶最佳条件

优化了解脂耶氏酵母W29的产酶条件,了解了解脂耶氏酵母W29的产酶能力。研究结果表明,该菌株产脂肪酶的最佳条件为:发酵温度30℃、起始pH 7.0、摇床转速150r.min-1、橄榄油含量7.0g.L-1、接种量2.5%、培养时间60h。在该条件下,解脂耶氏酵母W29所产脂肪酶的活性为7.7μ.mL-1。结果提示,解脂耶氏酵母W29在处理油脂废水时能产生较高活性的脂肪酶,可进一步实现废水处理的资源化利用。     

固定化单宁对酒类营养成分的吸附性能研究

采用固定化单宁对酒中可能存在的营养成分蛋白质、氨基酸、糖类、有机酸、乙醇和铁离子等进行吸咐试验。结果表明：固定化单宁对不同营养成分的吸附率差别明显，它通过氢键和疏水作用对蛋白质有较大的吸附率，通过多个酚羟基与中心铁离子形成螯合物而对其有较大的吸附率，对氨基酸、糖、有机酸和乙醇等营养成分或风味物质吸附率不大，固定化单宁可以作为一种较为理想的酒类处理剂。     

离子注入剂量与酒精酵母存活率关系研究

研究了以低能离子注入为手段,来选育斯托尔酒精酵母。在此过程中,如何确定最佳的出发菌株注入时间和限定干燥时间,对所获得的离子注入剂量与酒精酵母存活率关系曲线进行了讨论。     

PVA包埋产延胡索酸酶的黄色短杆菌的固定化研究

研究了用聚乙烯醇包埋黄色短黄杆菌的固定化成技术。最佳的方法是ＰＶＡ３ｇ，海藻酸钠１ｇ，黄色短杆杆菌湿细胞１４ｇ，总体积为１００ｍＬ，制成直径为４ｍｍ的小珠。比较了ＰＶＡ包埋和卡拉胶包埋黄色短杆菌固定化细胞的延胡索酸酶活力和回收率，以及最适Ｐｈ和最适温度。     

糖化酵母及酿酒酵母原生质体制备中若干条件的探索`

本 文意欲从糖化酵 母 ( a Se eha r om ye e sd ia s t a tie u s) 菌株5 1 0 1 一 7 C、5 2 0 6 一 I B、5 3 0 1 一 1 4 D及酿酒酵母 sr.cer ve is ae ) 菌 株 H U 一 T Y 一 I A 出发,按 L S ( 27) 正 交 表 设 计 实 验,进一步探 索酵母原 生质体制备条件.结果表 明,在选择 的诸因素 中,菌体菌龄与酶解脱壁时间之间有着极显 著的交互作用.各 因素对原 生 质体形 成和再生 的影响程度依次为:酶解脱 壁时 间与菌 龄交互作用 > 酶解脱壁时间> p一 硫基 乙醇预处理浓度> 菌龄。经实验确认,原生质体制备 最优条件为:取菌龄为 15hr的菌体,以。.01 m ol / L 的 p一 琉基 乙 醇预 处理,蜗牛酶温浴时 间为60 m in.依此约可获得 80 % 的原生质体形成率和 50 环的原生 质体再生率.     

三种形态的壳聚糖固定化脲酶的研究

以戊二醛为交联剂制备了3种固定化载体，即粉末状(I)，凝胶状(Ⅱ)，海棉状(Ⅲ)，并测定了固定化酶的特性．结果显示：固定化脲酶I，Ⅱ，Ⅲ的最适pH都是6，而游离酶的最适pH为7；固定化腮酶I，Ⅱ，Ⅲ的最适温度分别为55，55，45℃，游离酶为50℃；固定化酶I，Ⅱ，Ⅲ的表观米氏常数Km分别为2．78，14．5，34．5mmo1／L，游离酶的Km为55．5mmol/L．以上结果并结合固定化酶pH耐受性及贮存稳定性可知，凝胶状(Ⅱ)固定化载体更适于酶的固定化．     

固定化假单胞菌产L-多巴

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量，过高的底物加入量不利于固定化细胞的重复使用