银杏叶提取物对MPP+诱导的中脑多巴胺能神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物（EGB761）对1-甲基4-苯基吡啶离子（MPP^＋）诱导的帕金森病细胞模型是否具有保护作用．方法：采用胚胎大鼠中脑原代细胞培养法,分离培养中脑神经细胞,随后进行EGB761及MPP^＋处理,最后通过3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）微量比色法,酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学,研究EGB761对MPP^＋损伤后的中脑原代培养细胞及DA能神经细胞活性的影响,同时进行iNOS免疫细胞化学法,了解iNOS的表达情况．结果：在MPP^＋诱导的中脑原代细胞凋亡中,MPP^＋组TH阳性细胞数及细胞存活率均显著低于各EGB761组及阳性对照组（P〈0．01）．而iNOS的表达则显著多于各EGB761组（P〈0．01）．结论：EGB761对MPP^＋诱导的胚胎大鼠中脑原代培养细胞损伤具有保护作用,且此作用有随剂量的增大而增加的趋势．     

银杏叶提取物对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对帕金森病(PD)大鼠黑质细胞保护的可能性.方法:通过帕金森病大鼠模型,采用TUNEL法、Nissle's染色、HE染色、旋转行为观察的方法,与对照组比较,观察模型成功后GBE治疗1,7,14d大鼠旋转行为及黑质病理变化.结果:GBE组黑质凋亡细胞数、旋转圈数均较PD组减少,而尼氏细胞数...     

银杏叶提取物对部分损毁的帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的了解银杏叶提取物(EGb)对帕金森病(PD)大鼠多巴胺(DA)能神经元的作用。方法以6-OHDA部分损毁内侧前脑束的方法建立类似于人类PD早期的大鼠模型,通过电生理学及免疫组织化学方法观察PD大鼠黑质DA能神经元电活动和形态学的改变,以及EGb对其的影响。结果 PD组SNc、VTA区TH阳性细胞数明显减少,染色变浅,形状不规则,DA残存神经元百分比明显降低;给予EGb后,随剂量增加损伤侧SNc、VTA区TH阳性细胞数增加,染色变深,形状规则,DA神经元残存数量明显升高,以高剂量组升高最为明显。PD组大鼠神经元放电频率显著高于对照组,低剂量治疗组和高剂量治疗组放电频率虽低于PD组,但均无统计学差异。4组大鼠的DA神经元放电形式均表现为规则放电、爆发式放电和不规则放电3种,其中PD大鼠爆发式放电比率高于正常组,治疗组大鼠爆发式放电比率低于PD组,与正常组接近。结论 PD状态下,SNc的DA神经元电活动增强;EGb能够减少PD大鼠SNc DA神经元的丢失,部分抑制PD大鼠的电活动,对PD大鼠DA神经元具有一定保护作用。     

银杏叶提取物对帕金森病模型大鼠神经形态学的影响

目的探讨银杏叶提取物（EGb）对帕金森病（PD）模型大鼠神经形态学的影响,了解EGb时PD大鼠多巴胺（DA）能神经元的作用。方法以6-OHDA部分损毁内侧前脑束的方法建立类似于人类PD早期的大鼠模型,通过Nissl染色及免疫组织化学方法观察PD大鼠黑质DA能神经元形态学的改变,并对尼氏体积分光密度（IOD）定量分析。结果GEb组尼氏染色下脑组织病理改变均较模型组轻。模型组尼氏体10D值低于正常组（P〈0.05）;GEb组尼氏体10D值高于模型组（P〈0.05）。模型组SNc、VTA区TH阳性细胞数明显减少,染色变浅,形状不规则,DA残存神经元百分比明显降低。EGb组损伤侧SNc、VTA区TH阳性细胞数增加,染色变深,形状规则,DA神经元残存数量明显升高。结论EGb能够抑制脑黑质DA能神经元的数量减少,减轻PD大鼠的神经元变性,对PD模型大鼠DA能神经元具有保护作用。     

银杏叶提取物对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 观察银杏叶提取物（EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响，探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法 采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型，将90只大鼠随机分为研究组及对照组，在损伤后15min,60min及24h分别腹腔注射EGb761及生理盐水。第5天用TUNEL法测定神经细胞原位凋亡、大脑半球含水量、光镜下观察细胞形态学改变。结果 与对照组比较，大鼠脑外伤后15min及60min给予EGb761能显著降低神经细胞凋亡率和脑组织含水量（P＜0．05），外伤后24h给药，神经细胞凋亡率和脑组织含水量差异无显著性（P＞0．05）。结论 EGb761有抗大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及减轻脑水肿的作用，但应在外伤后尽早用药。     

银杏内酯和银杏叶提取物对纹状体和边缘系统多巴胺及其代谢产物含…

应用高效液相色谱电化学检测方法，发现银杏内酯１０ｍｇ／ｋｇ人大鼠灌胃６ｄ，能够升高纹状体多巴胺（ＤＡ）含量和ＤＡ与二羟苯乙酸（ＤＯＰＡＣ）和高香草酸（ＨＶＡ）比值，降低边缘系统ＨＶＡ含量，但升高ＤＡ／ＤＯＰＡ，ＤＡ／ＨＶＡ比值。银杏叶提取物５０ｍｇ／ｋｇ给大鼠灌胃６ｄ，对纹状体和边缘系统ＤＡ／ＨＶＡ比值有升高作用，提示银杏内酯和银杏叶提取物对大鼠纹状体和边缘系统ＤＡ代谢有一定抑制作用。     

中脑多巴胺能神经元自身受体DRD2的功能与调控

多巴胺受体家族共有5个成员,在运动、奖赏、情感、记忆等多种神经功能中发挥重要的作用。尽管大部分多巴胺受体分布在非多巴胺能神经元上,还有一部多巴胺受体分布于多巴胺能神经元中,这部分多巴胺受体被称为多巴胺自身受体,其中多巴胺受体D2(dopamine receptor D2,DRD2)是最重要的多巴胺自身受体。本文将对DRD2自身受体的结构、功能、调节机制进行综述,以期对多巴胺神经系统的功能和作用机制加深理解。     

银杏内酯和银杏叶提取物对纹状体和边缘系统多巴胺及其代谢产物含量的影响

应用高效液相色谱电化学检测方法，发现银杏内酯10mg／kg给大鼠灌胃6d，能够升高纹状体多巴胺（DA）含量和DA与二羟苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）比值，降低边缘系统HVA含量，但升高DA／DOPAC，DA／HVA比值。银杏叶提取物50mg／kg给大鼠灌胃6d，对纹状体和边缘系统DA／HVA比值有升高作用。提示银杏内酯和银杏叶提取物对大鼠纹状体和边缘系统DA代谢有一定抑制作用。     

trichostatin A对多巴胺能神经细胞的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂 trichostatin A（TSA）对多巴胺能神经细胞的影响。方法将体外培养多巴胺能神经细胞 SH - SY5Y 分为6组,DMSO 处理为对照组,不同浓度（50、100、200、500、1000 nmol/ L） TSA 处理为 TSA 组,处理48 h 后行 MTT 法检测细胞活力;采用200 nmol/ L TSA 处理细胞不同时间段,MTT 法检测细胞活力,Western blot 检测 Fra1表达;构建腺病毒载体过表达 Fra1或对照 GFP,检测正常或 TSA 处理条件下过表达 Fra1对细胞活力的影响。结果对照组与50 nmol/ L TSA 组比较,细胞存活率差异无统计学意义,与100 nmol/ L TSA 组比较,细胞活力明显减少（P ＜0.05）,随 TSA 浓度升高,活力减少更显著（P ＜0.05）;200 nmol/ L TSA 处理细胞8 h 未检测到抑制细胞存活（ P ＜0.05）,处理16 h 有显著抑制作用,处理时间越久抑制效应越明显（ P ＜0.05）;Western blot 结果显示,TSA 处理6 h 未抑制 Fra1表达（P ＜0.05）,处理12 h 明显抑制 Fra1表达,24 h 抑制效应更显著（P ＜0.05）;过表达 Fra1促进细胞存活（P ＜0.05）,显著拮抗 TSA 的抑制存活效应（P ＜0.05）。结论TSA 抑制多巴胺能神经细胞存活通过抑制 Fra1表达。     

银杏叶提取物对坐骨神经损伤后运动神经元超微结构的影响

目的　研究银杏叶提取物 (EGb761)对大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动细胞超微结构的影响。方法　SD大鼠 18只 ,随机分成两组 ,银杏叶提取物 (EGb761)组和生理盐水 (SAL)组。切断大鼠坐骨神经并将神经远近端分别反折结扎 ,术后经腹腔分别注射EGb761( 10 0mg (kg·d)和同体积的SAL ,于 2、4、6周取材L4～ 6 节段脊髓 ,电镜下观察前角大型运动神经元细胞核及细胞器的超微结构形态变化 ,用体视学方法计算每张照片线粒体、内质网及溶酶体面积密度变化。结果　两组脊髓前角大型运动神经元超微结构均发生损伤性改变 ,实验组超微结构形态以及线粒体、内质网及溶酶体体积密度变化程度明显好于对照组。结论　银杏叶提取物能减轻大鼠坐骨神经损伤后前角运动神经元超微结构的损伤性改变 ,对运动神经元有一定的保护作用     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

Protective Effects of Quercetin on Cadmium-induced Cytotoxicity in Primary Cultures of Rat Proximal Tubular Cells

Objective To investigate the protective effects of quercetin on cadmium-induced cytotoxicity in primary cultures of rat proximal tubular(rPT)cells.Methods Primary cultures of rPT cells undergoing exponential growth were incubated with 1.0 μg/mL quercetin and/or cadmium(2.5,5.0 μmol/L),in a serum-free medium at 37 ℃ at different time intervals.Commercial kits were used and flow cytometric analyses were performed on rPT cell cultures to assay apoptosis and oxidative stress.Results Exposure of rPT cells to cadmium acetate(2.5,5.0 μmol/L)induced a decrease in cell viability,caused an increase in apoptotic rate and apoptotic morphological changes.Simultaneously,elevation of intracellular reactive oxygen species,malondialdehyde and calcium levels,depletion of mitochondrial membrane potential and intracellular glutathione,and inhibition of Na +,K +-ATPase,Ca 2+-ATPase,glutathione peroxidase(GSH-Px),catalase(CAT),and superoxide dismutase(SOD)activities were revealed during the cadmium exposure of rPT cells.However,simultaneous supplementation with 1 μg/mL quercetin protected rPT cells against cadmium-induced cytotoxicity through inhibiting apoptosis,attenuating lipid peroxidation,renewing mitochondrial function and elevating the intracellular antioxidants(non-enzymatic and enzymic)levels.Conclusion The present study has suggested that quercetin,as a widely distributed dietary antioxidant,contributes potentially to prevent cadmium-induced cytotoxicity in rPT cells.     

EGb761促进臂丛根性撕脱伤运动神经元功能修复的多靶点机制

【目的】研究银杏叶标准提取物(EGb761)保护创伤脊髓运动神经元的细胞机制。【方法】成年Sprague-Dawley雄性大鼠行臂丛神经根撕脱术后,随机分为:撕脱组(生理盐水治疗)和EGb761组[EGb761100mg/(kg·d)治疗]。各组动物分别存活5d,2、4、6周后处死。硝酸还原酶法检测大鼠脊髓组织NO含量和cNOS酶活力,取C7节段切片行胆碱乙酰转化酶(ChAT)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组化、NADPH-d酶组化和中性红活细胞染色。【结果】EGb761组与撕脱组相比:不仅降低脊髓组织NO含量(μmol/g)(2周组0.24vs0.36、4周组0.22vs0.30、6周组0.19vs0.23;P均<0.05),也降低脊髓组织cNOS酶活力(U/mg)(5d组0.047vs0.057、2周组0.13vs0.20、4周组0.065vs0.14、6周组0.061vs0.083;P均<0.05)。EGb761恢复部分损伤运动神经元的ChAT活性、EGb761降低nNOS蛋白的异位表达,NADPH表达率(%)(2周组26.0vs40.7、4周组21.7vs36.9、6周组18.2vs26.7、8周组12.6vs20.9;P均<0.05);EGb761提高损伤运动神经元的生存率(%)(5d组92.2vs87.1、2周组77.1vs71.3、4周组56.8vs49.8、6周组48.0vs43.4、8周组31.3vs22.0;P均<0.05)。【结论】EGb761可能通过多靶点干扰损伤运动神经元的基因表达、蛋白酶活性以及代谢进程,减少臂丛撕脱伤诱导的运动神经元死亡。     

银杏叶提取物对大鼠中脑原代细胞的作用

目的:观察银杏叶提取物(EGB761)对中脑原代培养细胞的作用.方法:采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,培养了中脑神经细胞,再将细胞分为对照组、阳性对照组(神经生长因子,NGF组)、实验组(EGB761组),给予EGB761和NGF进行配组干预,然后观察细胞生长状况,同时运用MTT(四唑盐)比色法检测神经细胞活性;用抗酪氨酸羟化酶(TH)对多巴胺(DA)能免疫细胞化学染色,比较各组阳性神经元数目及突起的变化情况.结果:实验组细胞生长旺盛,轴突延长明显.MTT法测得细胞A值,实验组0.677及免疫细胞化学TH阳性细胞数(实验组61.90)与空白对照组(A值0.596,TH阳性细胞数50.88)相比差异显著(P<0.05),但与阳性对照组比较二者均无统计学意义(P>0.05).结论:EGB761对中脑原代培养细胞有一定的保护作用.     

银杏叶提取物EGB761对AS家兔PON-1和ox-LDL的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对动脉粥样硬化家兔对氧磷酶-1(PON-1)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的影响。[方法]将24只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、EGB761组(n=8)。正常组给予普通饮食,模型组和EGB761组高脂饮食10周。EGB761组从第7周起给予EGB761 50 mg/(kg·d)灌胃4周,正常组和模型组给予等量生理盐水。采用酶免疫吸附法(ELISA法)和生化法检测PON-1的活性和含量,ELISA法检测ox-LDL的含量。[结果]模型组PON-1活性和含量明显降低(P0.05),ox-LDL的含量明显升高,银杏叶提取物组PON-1活性和含量明显升高,ox-LDL明显降低(P0.05)。[结论]银杏叶提取物EGB761降低ox-LDL、抗动脉粥样梗化(AS)的机制可能与其上调PON-1活性和含量有关。     

TPRC3通道对MPP+所致MN9D细胞损伤的保护作用

目的探讨经典瞬间受体电位通道蛋白(transient receptor potential-canonical channel,TRPC)家族在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-Methyl-4-phenylpy ridinium ion,MPP+)导致的MN9D细胞毒性损伤中的作用。方法用不同浓度(62.5、125、250、500、1000μmol/L)的MPP+处理MN9D细胞24h,500μmol/L MPP+处理MN9D细胞不同时间(3、6、12、24、36h),建立细胞损伤模型。用RT-PCR的方法检测MN9D细胞中内源性TRPC的表达情况;500μmol/L MPP+作用于MN9D细胞,以Western blot法检测MN9D细胞内源性TRPC表达的变化;构建GFP与TRPC3-GFP腺病毒载体,转染到MN9D细胞中,以四甲基偶氮唑盐比色法(methods the tetrazolium,MTT)的方法检测过表达的TRPC3对MPP+引起的MN9D细胞损伤的保护作用。结果500μmol/LMPP+处理MN9D细胞6h就可以显著降低细胞内TRPC3蛋白水平的表达,但对TRPC6的表达无影响。过表达TRPC3能够保护MN9D细胞免受MPP+的毒性损伤。结论MPP+特异性地降低MN9D细胞TRPC3蛋白水平,过表达TRPC3可以抑制MPP+引起的MN9D细胞损伤。这种现象提示TRPC3通道可能参与了帕金森病发病的分子机制。     

MPTP对小鼠行为学及脑纹状体多巴胺含量的影响

目的：观察不同剂量对1－甲基－4－苯基－1,2,3,6－四氢吡啶（MPTP）小鼠行为学及脑纹状体多巴胺（DA）去甲肾上腺素（NE）,5－羟色胺（5－HT）及其代谢产物含量的影响,探讨MPTP致帕金森病（PD）样小鼠模型的最佳条件。方法：C57BL小鼠分别给予MPTP不同单日剂量（20－40mg/kg),不同给药次数（1－7）天处理,测定各组小鼠爬杆时间检测动物运动协调性,测定自发活动记数评价动物神经兴奋性,测定通道式水迷宫游出时间评价各组小鼠空间学习记忆能力。应用高效液相色谱法检测动物纹状体内DA,NE,5－HT及其代谢产物含量。结果：MPTP30mg /kg腹腔注射1天,3天,7天及40mg/kg腹腔注射1天,3天后小鼠都再现不同程度爬杆时间延长,自发活动次数减少,但不鼠水迷宫游出时间在给药前后未见明显改变。MPTP处理组与对照组相比DA及其代谢产物3,4－二羟基苯乙酸（DOPAC）含量都有明显降低,而NE,5－HT,及其代谢产物5－羟吲哚乙酸（5－HIAA）含量均未见明显改变。结论：MPTP处理可造成小鼠的帕金森病样症状,但不伴有明显智力障碍,在此种动物模型中,应根据科研目的选择MPTP的应用剂量和给药途径。     

银杏叶提取物对HeLa炎症细胞模型应激作用的影响

目的探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导人宫颈癌细胞(HeLa细胞)炎症应激作用的影响。方法将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组3组,通过细胞骨架染色了解细胞结构的稳定性;应用OLYMPUS-AU2700自动生化分析仪测定细胞上清液C反应蛋白(CRP)、前白蛋白(PA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,了解细胞应激反应情况和细胞死亡情况。结果 GbE+LPS组培养48h后细胞骨架较松散,稳定性明显低于LPS组和对照组;GbE+LPS干预组培养8 h后细胞上清液CRP含量显著低于LPS组(tGbE+LPS=-3.649,P<0.05),而LDH含量高于LPS组,但差异无统计学意义(tGbE+LPS=-3.56,P>0.05);各组各时间段细胞上清液PA含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GbE具有介导HeLa炎症细胞凋亡及减轻细胞炎症反应的作用。     

安定对胎鼠脑细胞内钙的影响

目的研究安定在中枢神经系统的钙拮抗作用.方法采用钙敏感的荧光探针Fura-2技术测定细胞内钙及变化.结果在不同外钙(0 mmol/L,0.01 mmol/L,0.10 mmol/L,1.00mmol/L,1.30 mmol/L)条件下,细胞内钙离子浓度(简写[Ca2+]i)分别为(41±6)mmol/L,(59±6.85)mmol/L,(85±2)mmol/L,(104±8)mmol/L,(126±5)mmol/.安定0.4 mmol/L对细胞内钙没有显著影响.但安定(0.1 mmol/L～1.0 mmol/L)能浓度依赖性地抑制高钾及L-谷氨酸诱发的[Ca2+]i增高的作用(外钙1.3 mmol/L).其50%抑制率(IC50)分别为0.649 mmol/L(95%可信度为0.224 mmol/L～2.152 mmo[/L)及0.440 mmol/L(95%可信度为0.305 mmol/L～0.635 mmol/L).结论安定通过阻滞电压依从性钙通道及受体操纵性钙通道,在中枢神经系统具有较强的钙拮抗作用.