P物质对大鼠三叉神经节神经元H+-门控电流的调制

目的 探讨P物质(SP)对大鼠三叉神经节(TG)神经元膜H+-门控电流的调制作用及其机制.方法 急性分离TG神经元,通过排管快速换液装置行胞外给药,电极内灌药行胞内透析后,采用全细胞膜片钳技术记录神经元膜H+-门控电流.结果 依照我们在背根神经节(DRG)神经元分类的方式,同样可将TG神经元H+-门控电流也分为四型,即T-型、S-型、B-型、O-型;共加SP和H+能浓度依赖性增强S-型H+-门控电流,SP受体拮抗剂GR82334不能阻断此作用;共加SP和H+能增强B-型H+-门控电流,GR82334和胞内透析GDP-β-S能阻断SP对B-型H+-门控电流的这一增强作用,而预加SP则抑制B-型H+-门控电流,并以短暂成分尤为明显,此抑制效应不能被GR82334阻断.结论 SP对H+-门控电流的调制依ASIC亚基组成不同,其作用机制有所不同:S-型H+-门控电流的ASIC分子膜外结构上可能存在SP的别构位点.     

三叉神经节离体培乔后降钙素基因相关肽调变的细胞内信号转导机制研究

目的：探讨大鼠三又神经节（TG）离体培养后降钙素基因相关肽（CGRP）表达增高的细胞内信号转导通路。方法：成年雄性SD大鼠TG在DMEM培养液离体培养12、24和48h,应用免疫组化和实时定量PCR法分别检测CGRP阳性细胞数和mRNA表达水平变化。在培养液中分别加入一定浓度的炎症抑制剂地塞米松、转录水平特异性抑制剂放线菌素D、蛋白翻译水平特异性抑制剂环己酰胺,以及细胞内丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导系统ERK1／2、JNK、P38的3条信号通路上关键激酶的特异性阻断剂U0126、SP600125、SB239063与三叉神经节共同培养24h,免疫组化和实时定量PCR法分别检测CGRP阳性反应细胞数和mRNA表达水平变化。结果：TG离体培养后12、24和48h后CGRP阳性反应细胞数、平均吸光度和累积吸光度值均比新鲜组织明显增高,CGRPmRNA表达水平也明显增高。浓度为1×10～mol·L^-1的地塞米松、放线菌素D、环己酰胺以及U0126、SP600125分别与三叉神经节共同孵育24h后,CGRPmRNA表达水平都显著降低。结论：TG离体培养后CGRP表达水平增高是通过细胞核内转录因子上调mRNA转录和蛋白翻译水平,是TG内非特异性炎症反应的结果,细胞内MAPK信号转导的ERK1／2通路和JNK信号通路参与了上调过程。     

电刺激三叉神经节对蝶腭神经节内一氧化碳合酶和血管活性肠肽阳性神经元的影响

目的：观察实验性偏头痛大鼠副交感神经蝶腭神经节内一氧化氮合酶（NOS）和血管活性肠肽（VIP）阳性神经元的变化。方法：12只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组（均n=6）。实验组为电刺激三叉神经节建立的偏头痛大鼠模型。对照组仅作手术而不刺激三叉神经节。用组织化学的方法观察蝶腭神经节内NOS阳性神经元的变化,用免疫荧光法观察蝶腭神经节内V1P阳性神经元的变化。结果：实验组和对照组大鼠的蝶腭神经节内均有NOS和VIP阳性神经元,但实验组NOS和VIP阳性神经元均较对照组显著增加（P〈0．01）。结论：电刺激三叉神经节可以通过三叉-副交感神经反射系统,显著升高蝶腭神经节中NOS和VIP神经元的数目。偏头痛发病过程中脑膜及颅内大血管的剧烈扩张很可能与蝶腭神经节中NOS和VIP神经元增加有关。     

通心络胶囊对实验性偏头痛大鼠CGRP及α-CGRP基因表达的影响

目的研究通心络胶囊对硝酸甘油性偏头痛大鼠模型血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、脑干及三叉神经节αCGRP基因mRNA表达的影响,以探讨通心络治疗偏头痛的可能机制。方法50只SD大鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、模型组、苯噻啶防治组、通心络防治组。模型组和药物干预组用硝酸甘油10mg/kg皮下注射造模,每周1次,连续4周,第2次造模后每天分别灌服通心络1.5g/kg/d(通心络组)或苯噻啶0.5mg/kg/d(苯噻啶组)进行干预。第4次造模后用放射免疫法测定血浆CGRP、RTPCR技术测定脑干及三叉神经节区αCGRP基因mRNA的表达。结果与空白对照组比较,反复硝酸甘油造模后,通心络组血浆CGRP水平明显升高(55.63±9.01ng/Lvs45.23±1.79ng/L,P<0.05);苯噻啶组和通心络组αCGRP基因mRNA表达分别为0.67±0.12和0.64±0.12,与空白对照组的0.88±0.09比较,明显下调(P<0.05)。结论通心络胶囊下调了脑干及三叉神经节αCGRP基因mRNA的表达,增加了血浆CGRP含量,提示通心络胶囊不是通过下调血浆CGRP含量而起到预防偏头痛的作用。     

异氟烷预处理对偏头痛大鼠行为学症状及三叉神经节相关蛋白表达的影响

目的探讨异氟烷(ISO)对硝酸甘油所致偏头痛大鼠行为学症状及三叉神经节内相关蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将SD大鼠分为对照组(S组)、模型组(M组)、ISO预处理组(包括低剂量和高剂量组,即L组和H组),每组10只,并采用皮下注射硝酸甘油法制备偏头痛模型。L组和H组于造模前30 min分别给予1%和2%ISO吸入麻醉30 min。观察并比较各组大鼠造模后耳红出现和消失的时间及每30 min时间(T_(1-7))段内的挠头、爬笼次数。采用Western blot测定三叉神经节内白介素-1β(IL-1β)、环氧合酶-2(COX2)、降钙素基因相关肽(CGRP)及核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达水平。结果与S组相比,M组和ISO预处理组大鼠造模后均出现双耳发红及挠头、爬笼次数均增多等现象,三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP及胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显升高,胞浆NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P 0. 05);与M组相比,ISO预处理组大鼠耳红消失的时间明显缩短,T_(2-7)时挠头次数均明显减少,T_(2-6)时爬笼次数均明显减少,三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP及胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显降低,胞浆NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P 0. 05),且H组较L组更明显(除胞浆NF-κB p65蛋白外)。结论异氟烷能改善偏头痛大鼠的行为学症状,其机制可能与下调三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP蛋白的表达水平及抑制NF-κB的激活有关。     

硬脑膜传入神经末梢敏化对初级感觉神经元电压门控型钙电流的影响

目的 探讨化学刺激硬脑膜传入神经末梢对大鼠三叉神经节神经元的高电压激活钙电流(HVA-ICa)的调控效应. 方法 雄性SD大鼠16只按随机数字表法分为生理盐水(NS)组和致炎剂(IS)+释放降钙素基因相关肽(CGRP)组(n=8),大鼠上矢状窦处脑膜给药造模1h后急性分离大鼠三叉神经节中小神经元,采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钙离子通道(VGCC)电流. 结果 与NS组钙电流峰电流[(-49.5±5.18)pA/pF]比较,IS+CGRP组[(-80.48±4.43) pA/pF]增高,差异有统计学意义(P＜0.05);IS+CGRP组神经元钙电流激活曲线的半数激活电压Val/2为(-20.9±0.4)mV,较NS组[(-16.2±0.5)mV]向超级化方向移动了4.7 mV,差异有统计学意义(P＜0.05); IS+CGRP组神经元钙电流的半数失活电压V1/2为(-12.4±0.2) mV,较NS组[(-22.5±0.3)mY]向去极化方向移动了10.1 mV,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 激活硬脑膜传入神经末梢诱导初级感觉神经元的外周敏化过程,突出表现为钙电流的增高.     

前脑缺血及再灌流对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 :探讨脑缺血及再灌流内皮素、降钙素基因相关肽和神经元凋亡变化规律及关系。方法 :前脑缺血及再灌流大鼠为模型 ,检测海马ET、CGRP含量和神经元凋亡。结果 :缺血后 1 5minET显著高于其他各组 ;再灌流后降低 ,1d时最低 ,2d时恢复正常。缺血后 1 5minCGRP显著低于其他各组 ;再灌流后升高 ,1d达高峰后下降。缺血后出现神经元凋亡 ,再灌流后仍增加 ,1d达高峰后下降。ET含量与凋亡细胞呈负相关。CGRP含量与凋亡细胞呈正相关。结论 :缺血和再灌流均可导致神经元凋亡。     

侧脑室注射腺苷A1受体激动剂对硝酸甘油偏头痛模型大鼠的影响

目的通过对硝酸甘油偏头痛模型大鼠侧脑室注射腺苷A1受体激动剂(R-phenylisopropyl-adenosine,R-PIA),探讨腺苷在偏头痛中的作用及机制。方法观察各组大鼠不同时间段内挠头、爬笼次数及心率变化,采用Elisa、免疫组织化学法、Western blot技术检测血液、三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)、三叉神经脊束核尾核(spinal trigeminal nucleus caudalis,TNC)处降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的表达。结果(1)与模型组相比,治疗组大鼠挠头、爬笼次数均减少并呈剂量依赖性(P0.05),且大鼠心率没有明显变化;(2)治疗组大鼠血液、TG、TNC部位CGRP的表达较模型组均降低(P0.05)。结论激活的腺苷A1受体能够通过抑制神经源性炎症反应及痛觉传导,从而抑制三叉神经血管系统的激活及痛觉敏化,对偏头痛产生镇痛作用。     

大鼠小直径痛觉三叉神经节神经元同时存在三磷酸肌醇敏感性钙库和阿诺碱敏感性钙库？P2X和P2Y嘌呤受体介导细胞内钙信号转导通路的变化

背景： 面部创伤或面部手术等可能损伤三叉神经系统而导致三叉神经疼痛,由于其疼痛剧烈难忍、易复发,长期以来一直为口腔临床治疗的一大难题。现有大量研究发现嘌呤类受体与三叉神经痛相关,目前对其作用机制知之甚少。 目的：探讨在小直径三叉神经节神经元中嘌呤类受体介导钙信号途径。 方法：用Fura-2荧光染料通过显微镜荧光测定技术实时检测急性分离成年大鼠小直径三叉神经节神经元的细胞内钙离子浓度。 结果：用正常外液或去除细胞外Ca2+灌流细胞,分别给予thapsigargin（1 μmol/L）,内质网钙泵ATP酶抑制剂,和咖啡因（20 mmol/L）,ryanodine受体激动剂,均能够引起细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）不同程度地升高。ATP（100 μmol/L）也能够产生类似的效应。在去除细胞外Ca2+条件下,ATP引起的[Ca2+]i升高可被thapsigargin可逆性地抑制,而不能被咖啡因抑制;然而在正常外液环境中,ATP引起的细胞内[Ca2+]i 升高不能完全地被thapsigargin抑制。 结论：在痛觉三叉神经节神经元中,嘌呤类受体介导的[Ca2+]i升高有两条途径,一种途径是通过代谢型P2Y受体作用于三磷酸肌醇敏感性钙库;另一种途径是通过离子型受体P2X受体引起外钙内流。     

CGRP及其受体在偏头痛发病机制中的研究

偏头痛是一种具有多种神经系统和非神经系统表现的综合征,表现为一侧或双侧发作性、搏动性的剧烈头痛,发作时常伴有众多植物神经系统症状。但其发病机制众多,且尚存在许多疑问,目前占位主导地位的学说为三叉神经血管学说。其中降钙素基因相关肽(CGRP)是血管周围神经释放的最主要的血管活性肽类物质,是迄今已知最强的血管舒张     

胰岛素样生长因子-1对背根神经节神经元感觉神经肽mRNA表达的调节作用(英文)

目的利用背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)神经元,观察胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对谷氨酸(Glu)神经毒性引起的编码P物质(substanceP,SP)的前速激肽原(preprotachykinin,PPT)mRNA和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)mRNA表达下降的调节作用。方法取15d胎龄大鼠的DRG神经元,分散培养48h后,在培养液中加入Glu(0.2mmol/L),或同时加入不同浓度的IGF-1(5nmol/L,10nmol/L,或20nmol/L)孵育12h,利用倒置相差显微镜对神经元活细胞进行观察,并用RT-PCR法检测神经元中PPT和CGRP的mRNA表达水平。对照组DRG神经元培养液中不含Glu和IGF-1。结果Glu能引起神经元突起的缩短,而IGF-1则显著减弱这一作用。此外,Glu的神经毒性使得DRG神经元内PPT和CGRP的mRNA水平显著降低,而IGF-1则能明显抑制这种降低,且呈一定的浓度依赖性。结论IGF-1可能通过调节PPT和CGR...     

降钙素基因相关肽对缺氧时大鼠海马培养神经元c—fos表达的影响

采用免疫组化（ABC）方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。结果显示，缺氧后海马神经元中Fos-免疫反应（Fos—IR）阳性胞核百分率随缺氧时间的延长而逐渐增多，图像分析的结果显示，缺氧后Fos—IR阳性胞核的平均失密度亦随缺氧时间的延长而逐渐增强。经CGRP孵育的海马神经元缺氧后Fos-IR阳性胞核的百分率和Fos-IR阳性胞核的平均光密度均明显低于非CGRP孵育组。本结果表明，缺氧能诱导体外培养海马神经元。c-fos的表达，神经肽CGRP能抑制缺氧海马神经元c-fos的表达。提示CGRP对海马神经元缺氧损伤可能具有一定保护作用。     

天舒胶囊对偏头痛动物模型血浆一氧化氮、一氧化氮合酶、降钙素基因相关肽含量及血流动力学的影响

目的 研究天舒胶囊对偏头痛动物模型血浆及脑组织血管活性物质及血流动力学的影响.方法 皮下注射硝酸甘油分别制作大鼠和兔偏头痛模型.给予天舒胶囊后用放免法和分光光度法测大鼠血浆一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量;通过免疫组织化学染色观察三叉神经脊束核神经元型NOS(NOS1)和CGRP表达;用经颅多普勒检测兔颈内动脉血流速度改变.结果 模型组大鼠血浆NO、NOS和CGRP较对照组明显升高;经不同剂量天舒胶囊灌胃后大鼠血浆NO、NOS和CGRP的增加受到抑制,尤以中、高剂量组明显(P<0.05～0.01).模型组兔颈内动脉收缩期峰值流速明显下降,经中剂量天舒胶囊干预后流速下降也受到抑制 (P<0.05).免疫组织化学染色发现灌胃天舒胶囊后,偏头痛大鼠三叉神经脊束核NOS1和CGRP表达增加的程度减小(均P<0.05).结论 天舒胶囊可改善偏头痛发作时血管活性物质和神经递质水平失常,从而缓解偏头痛症状.