三种方法检测奶粉中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)的比较分析

参加盲样考核,比较传统国标法、VETIK及荧光PCR法检测奶粉中阪崎肠杆菌的检测效果。文章参考GB/T 4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》和SN/T 1632.3-2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌的检验方法》,对10份盲样采用传统国标法、VETIK及荧光PCR法比较验证。结果表明3种检测方法结果吻合,10份样品中有四份检测阪崎肠杆菌,编号分别为#2、#4、#5和#8,其他6份样品未检出。三种方法检测时效比较,荧光PCR法VITEK传统国标法,荧光PCR检测方法快速、可靠、灵敏度高,可以作为传统检测方法的有效补充。     

免疫磁珠的制备

在综合国内外最新相关技术的基础上,研究了免疫磁珠的制备工艺,建立了一种合成免疫磁珠的新方法。对磁性颗粒进行氨基化修饰、醛基化修饰并且考察了免疫磁珠对抗体（兔抗O157：H7多克隆抗体）的吸附量。结果免疫磁珠的饱和吸附量是275μg／mg。表明此种新方法所制备的磁珠的表面特性及分离效果均较良好。     

抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠的制备及初步应用

目的制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,并进行初步应用。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗荧光素单克隆抗体;制备腹水,经50%硫酸铵粗提后,再经阴离子交换树脂DE52进一步纯化单克隆抗体;采用氧化共沉淀法制备纳米磁性粒子;乳液聚合法制备羧基磁性微球;用碳二亚胺将抗荧光素单克隆抗体共价偶联于磁性微球表面,制备抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠。用制备的免疫磁珠检测乙肝表面抗原,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果共获得5株杂交瘤细胞株,其中1F12细胞株分泌的抗体效价、相对亲和力较高,特异性较好;纯化的1F12株单抗的纯度达95%,蛋白含量为2.4 mg/ml,ELISA效价为106,相对亲和力为0.2 mg/L,与FITC标记的BSA可特异性结合;纳米磁性粒子的平均粒径为150 nm,铁含量为71.63%;羧基磁性微球的平均粒径为210 nm,羧基含量约为2.15 mmol/g;每克羧基磁性微球可结合抗荧光素单克隆抗体约12 mg,制备的免疫磁珠可有效结合荧光素标记的蛋白。应用抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠检测乙型肝炎表面抗原的灵敏度高于ELISA试剂,检测限达0.1 ng/ml。结论成功制备了抗荧光素单克隆抗体免疫磁珠,其具有应用于免疫检测分析的价值。     

抗甲胎蛋白聚苯乙烯磁珠的制备

在磁流体存在下,进行苯乙烯-丙烯酸-马来酸酐-二乙烯基苯的共聚合,合成出粒径介于500～625nm、表面光滑、单分散的球形聚苯乙烯磁珠;磁珠耐酸碱,在浓度为1mol/L盐酸或氢氧化钠及氯化钠溶液中不凝集;控制丙烯酸用量可使磁珠表面羧基量达4 5mg/g。物理吸附法致敏磁珠的最佳条件为:包被用甲胎蛋白(AFP)抗体最适稀释度为:V(AFP抗体)∶V(磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液)=1∶200,最适pH=7 0,温度37℃,作用时间1h。     

肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备

目的制备可高效、特异性富集肠出血性E.coli O157(enterohemorrhagic Escherichia coli O157,EHEC O157)的免疫磁珠。方法分别用5种不同规格磁珠与E.coli O157特异性单克隆抗体偶联制备免疫磁珠,通过比较磁珠蛋白偶联量,选取包被效果最佳的磁珠规格;对制备工艺进行优化(包括活化时间、温度,偶联缓冲液p H值,偶联温度、时间);对制备的O157免疫磁珠选择性集菌的敏感性和特异性进行评价,并与进口磁珠吸附率进行比较。结果直径0.5~1.0μm羧基磁珠抗体包被效果及目的菌分离效果最好。加入NHS后,活化30 min为最佳时间;4℃磁珠活化温度、0.01 mol/L PBS(p H 7.4)构成的体系对磁珠偶联单克隆抗体效果最佳;偶联温度为37℃、偶联时间为120 min时,偶联蛋白量最高,且波动范围较小,为最佳偶联温度及时间。在复杂的微生物环境中,O157免疫磁珠的敏感性达到20 CFU/ml。在混合菌液中,E.coli O157菌含量在1.4×10~3 CFU/ml时,免疫磁珠特异性捕获率达到90%。结论获得羧基磁珠与E.coli O157单克隆抗体偶联的最佳条件。制备的免疫磁珠能够特异性富集EHEC O157,具有操作简便,分离速度快,捕获率高等特点,可用于临床样品或食品中EHEC O157的分离鉴定。     

肝癌血清甲胎蛋白免疫磁珠酶联免疫法的建立

采用戊二醛两步交联法将辣根过氧化物酶(HRP)结合于甲胎蛋白(AFP)抗体上制成酶标AFP抗体,质量鉴定结果表明其比活性为200 U/mg,抗体效价为1∶256,满足酶联免疫吸附测定法(ELISA)要求;通过滴定法确定酶标AFP抗体的最适工作稀释度为V(酶标抗体)∶V(磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液)=1∶160;血清用量及孵育时间的影响实验表明:血清100μL、孵育时间2 h为最佳测定条件。建立了肝癌患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的规范化检测程序。初步应用实验显示:免疫磁珠ELISA法测定受试健康组血清AFP值平均为3.9 ng/mL,肝癌组血清AFP值平均为316.7 ng/mL,对肝癌诊断阳性率为72.0%。批内及批间CV值分别为5.05%和8.20%。该项技术有较高的灵敏度和很好的特异性,操作简便、分离快速,适用于肝癌的初期快速诊断。     

免疫磁珠分离技术在微生物学检测中的应用

免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。本文主要介绍了免疫磁珠分离技术的基本原理及其在微生物学检测中的应用概况。     

国产免疫磁珠与溴化氢活化Sepharose 4B亲和层析分离羊抗人IgG的比较

目的比较国产免疫磁珠与溴化氢活化Sepharose 4B两种不同介质偶联人免疫球蛋白纯化羊抗人IgG的差别。方法采用亲和层析的方法纯化羊抗人IgG,通过血凝实验检测不同介质纯化产物的效价和特异性。通过SDS-PAGE检测其纯度。通过计算偶联率及蛋白回收率,比较两种介质纯化效率。结果两种不同介质纯化的羊抗人IgG特异性良好,效价均为1∶512,SDS-PAGE检测均为单一条带。采用两种介质纯化羊抗人IgG,蛋白回收率分别为10·03%和17·45%。结论两种不同介质采用亲和层析方法纯化均可获得纯度较高的羊抗人IgG。     

用于分离大肠杆菌O157∶H7的免疫磁珠的制备与表征

以Fe2+、Fe3+、羧基化葡聚糖(CMD)为原料,采用共沉淀法,一步合成了CMD-Fe3O4磁性纳米粒子,并对其进行表征。用EDC和NHS将纳米粒子表面的羧基活化,再进一步与标记有荧光基团的anti-E.coli结合,合成了表面结有大肠杆菌O157∶H7抗体的新型免疫磁珠anti-E.coli-CMD-Fe3O4,可以用于分离大肠杆菌O157∶H7。     

磁珠技术在生命科学领域的应用及其制备

本文概述了磁性微球的发展情况和在生命科学领域的应用,用简单的化学合成方法制备出了能从血液中提取DNA的磁珠,并通过提取实验选择出了最佳磁珠制备方法。     

免疫磁珠-高效液相色谱法测定虎杖中抑制前白蛋白转化酶枯草菌素9成分含量

基于免疫磁珠结合超高效液相色谱仪对虎杖中白蛋白转化酶枯草菌素9(PCSK9)的成分进行含量测定.首先优化免疫磁珠与PCSK9的孵育时间、孵育温度和提取液比例对PCSK9抑制剂结合程度的影响.在优化条件下,样品经高效液相色谱仪进行快速分析,该方法可靠,精密度良好.结果表明,免疫磁珠-高效液相色谱法种方法在富集虎杖中白蛋白...     

磁珠理化特性及分选工艺的研究

磁珠理化特性及分选工艺的研究从五十年代起，人们就研究从粉煤灰中回收磁珠，进而用作炼铁原料，高强度耐磨混凝土掺合料，磁性塑料的填料，电缆保护层的配料，海底管道包壳配料以及代替磁铁矿粉作为重介质选煤的加重质等。它是煤在锅炉中燃烧时大部分含铁矿物质与碳及一...     

离子液体的制备及其捕获CO_2性能

制备了一种新型离子液体,1-二乙二醇单甲醚基-3-甲基咪唑甘氨酸盐,并对其捕获CO2性能进行了研究。研究结果表明,产物具有高的CO2捕获容量和快的捕获速度,在燃气和烟气脱碳领域具有良好的应用潜力。     

粉煤灰磁珠作选煤加重质的研究及应用

介绍了粉煤灰磁珠替代磁铁矿粉用作选煤加重质的可行性研究及工业性试验情况。结果表明，磁珠不但可以用作选煤加重质，而且具有较好的经济效益和社会效益。     

基于阴阳离子染料对的光捕获体系构建及其在光催化CDC反应中的应用研究

针对荧光素类染料单独使用中存在光响应范围窄、能量利用率低等问题,利用离子染料之间的静电作用力构建阴阳离子染料对光捕获体系,探究光捕获体系对交叉脱氢偶联(CDC)反应的催化性能及其影响因素。结果表明,染料间阴、阳离子的相互作用可形成稳定的光捕获体系,以阴、阳离子染料玫瑰红(RB)和吖啶橙(AO)为受体和供体构建了光捕获体系“D⁺_AOA^-_RB”(浓度为2×10^-5 mol/L),其荧光共振能量转移(FRET)效率可达72%。光捕获体系的荧光共振能量转移(FRET)过程可有效拓宽光响应范围、提高受体光催化性能,“D⁺_AOA^-_RB”体系对CDC反应展现出优异的光催化性能,其光催化反应速率是以RB为催化剂时的1.60倍。     

新型聚离子液体的制备及其捕获CO_2性能研究

CO2的捕获和封存是当前关注的重要问题。采用自由基聚合制备了一种新型聚离子液体,聚四亚乙基五胺丙烯酸盐(PTEPAA),并对其捕获CO2性能进行了研究。结果表明,PTEPAA捕获CO2具有捕获容量高、速度快、高度可逆的特点,在低温捕获的CO2可以在高温下有效解吸,捕获/解吸过程可以重复进行,PTEPAA可再生。每个捕获/解吸循环,每克PTEPAA可以分离大约0.24克CO2。PTEPAA作为一种新型固态CO2捕获材料,在烟气及燃气脱碳领域表现出良好的应用潜力。     

对苯醌电化学捕获CO2机理研究及捕获产物的结构分析

利用循环伏安法(CV)、现场红外光谱法、恒电位电解法开展了BQ在乙腈溶液中的电化学捕获CO2的研究.结果显示,CO2在BQ还原过程中被一价阴离子自由基BQ·-所捕获,表明BQ·-是可以当作亲核试剂来捕获CO2.采用恒电位电解的方法,得到了BQ电化学捕获CO2后的终产物.1H-NMR、IR、13C-NMR以及元素分析的结果表明,捕获CO2后的终产物为BQ与CO2进行化学反应的加合物,其化学计量比为1:2,且亲核进攻CO2的是BQ羰基上的氧,形成较为稳定的羧酸式结构.产物酸化处理生成对苯酚,进一步证明BQ电化学捕获CO2产物结构.     

人巨细胞病毒IgM抗体生物素-亲和素单克隆抗体捕获时间分辨荧光免疫法检测试剂盒的研制与评价

目的建立人巨细胞病毒IgM(human cytomegalovirus IgM,HCMV IgM)抗体生物素-亲和素单克隆抗体捕获时间分辨荧光免疫法(biotin-avidin monoclonal antibody capture time-resolved fluoroimmunoassay,BA Mac TrFIA)检测试剂盒,并对其性能进行评价。方法采用鼠抗IgMμ链单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)作为固相反应板的包被抗体,生物素(biotin)标记的HCMV基因重组抗原作为桥接抗原,链酶亲和素(SA)标记铕(Eu3+)作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,应用BA Mac TrFIA法进行HCMV IgM抗体的检测,对连续制备的3批试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、热稳定性进行评价,并与巨细胞病毒IgM抗体诊断试剂盒同时对1 020份血清或血浆样本进行临床研究比对试验,采用Kappa检验进行一致性分析。结果选择4μg/ml作为鼠抗IgMμ链McAb最佳包被浓度,1∶10 000稀释作为HCMV-Bio最佳工作浓度,1∶1 500稀释作为SA-Eu3+最佳工作浓度,试剂盒参考值建议为阴性对照品检测荧光值(negative control counter,NCx)×2.1;连续制备的3批试剂盒最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均达到国家检定标准;于37℃恒温箱放置6 d后,检测性能无明显改变;临床研究比对试验Kappa指数为1,一致程度达100%。结论成功制备了HCMV IgM BA Mac TrFIA法检测试剂盒,该试剂盒灵敏度高,精密性较好,与同类产品检测结果相关性好,为临床HCMV lgM抗体的检测提供科学、可靠的诊断依据。     

氮修饰木质素基超交联聚合物的制备及其放射性碘捕获

开发高效、低成本的放射性碘捕获材料对核能的安全利用和核废料处理具有重要意义。本文针对目前碘捕获材料吸附容量低、成本高等问题,以含有羟基、羧基等活性位点的木质素为基础原料,N,N-亚甲基双丙烯酰胺（MBA）为氮源,对氯甲基苯乙烯（VBC）为功能单体,通过自由基聚合接枝与Friedel-Crafts烷基化两步反应,原位构筑一系列氮修饰木质素基超交联聚合物（NLHCPs）,其比表面积最高可达715.8m²/g,且有较高的氮含量（3.95%~4.48%,原子分数）。分别研究了NLHCPs对碘蒸气和碘正己烷溶液的吸附性能,结果表明NLHCP-2的碘蒸气吸附容量最高,可达2.5g/g,吸附作用主要为化学吸附,碘分子在聚合物表面转变成聚碘阴离子的形式。而其对正己烷中碘的吸附等温线更符合Freundlich模型,吸附最大平衡容量可达230.8mg/g,动力学拟合表明其吸附速率主要受扩散过程控制。吸附碘蒸气后的材料,在乙醇中可快速脱附,具有良好循环使用性能。