不同类型标本的衰老相关-β-半乳糖苷酶染色方法

目的：研究衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)组化染色在不同类型组织切片中的应用。方法：比较血涂片、冰冻切片及石蜡切片在不同条件下SA-β-Gal的显色效果。结果与结论：冰冻切片结果良好;石蜡切片经抗原修复后,结果不及未经抗原修复者;血涂片以g／L多聚甲醛固定min者效果最佳。SA-β-Gal可用于不同类型的组织标本。     

米曲霉β—半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖

研究了温度、ＰＨ酶量和起始乳糖浓度对低聚半乳糖合成的影响，发现乳糖水解为单糖和合成低聚糖所需的最佳条件并不相同；     

嗜热芽孢杆菌β—半乳糖苷酸发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酸的条件,应用均匀设计优化发酵培养基组成,结果为：服糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ＰＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍｉｎ和１０％接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酸酶活力达１３．２Ｕ／ｍＬ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

逆转录病毒转移的β—半乳糖苷酶基因在成纤维细胞中的表达

为了研究逆转录病毒载体转移外源基因的实用性，我们采用小鼠白血病病毒（ＭｏＭＬＶ）载体将大肠杆菌的β－半乳糖苷酶基因（ｌａｃＺ）和抗新霉素（Ｎｅｏ＾Ｒ）基因转移到大鼠成纤维细胞内，对整合后的前病毒结构和基因表达进行了酶活性测定和ＤＮＡ分析。结果表明：ｌａｃＺ基因可以在大鼠皮肤成纤维细胞和２０８Ｆ细胞株中较长时间地表达；前病毒整合位点。靶细胞特性和整合后的载体结构与转入基因表达的稳定性紧密相关。     

重组α—半乳糖苷酶A替代治疗法布里病的安全性和有效性

据《N Eng1 J Med》2001年345卷第1期报道 法布里(Fabry'S)病为溶酶体α-半乳糖苷酶A缺乏症,由于N-脂酰鞘氨醇三己糖苷(globotriaosylceramide)及相关的糖鞘脂(glycosphingolipids)进行性积聚而引起,受累病人有肾脏、心脏和脑微血管病变。美国纽约     

重组β—半乳糖苷酶腺病毒载体的构建及其在血管闰滑肌细胞中的表达

目的构建表达β-半乳糖苷酶(β-gal)的重组腺病毒,以期为再狭窄的基因治疗研究提供一个对照载 体和为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、转染效率的研究提供一有用的工具。方法采用基因重组方法构 建穿梭质粒pAd-β-gal,通过同源重组法制备出重组腺病毒Ad-β-gal,转染的293细胞用X-gal染色鉴定Ad-β -gal的正确与否。通过测定260nm的紫外光吸收值估计病毒高度。原代大鼠血管平滑肌细胞采用组织块培养 法。Ad-β-gal以100moi感染VSMCs并行X-gal染色,以观察β-gal在VSMCs中的表达情况。结果成功构建了 pAd-β-gal穿梭质粒和Ad-β-gal重组腺病毒,转染的293细胞和VSMCs经X-gal染为蓝色,病毒浓度为9×l011 pfu/ml,以100moiAd-β-gal转染VSMCs,其转染效率接近l00%。结论表达β-gal的重组腺病毒构建成功,并在 VSMCs中得到有效表达,本研究为将来再狭窄基因治疗研究提供了一对照载体,也为腺病毒介导的基因转移的安 全性、可行性、有效性的研究提供了一有用的工具。     

不同年龄大鼠VSMCs培养及衰老相关β-半乳糖苷酶的表达

目的：培养出不同年龄组SD大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）,探讨VSMCs复制衰老过程。方法：取出主动脉,0．2％Ⅱ型胶原酶溶液消化分离细胞,培养,按比例1：3传代。免疫细胞化学鉴定平滑肌细胞β-actin。制备老年组、年轻组的第2．6、11代细胞爬片,用SA-β-gal工作液染色,显微镜下计数蓝染细胞阳性,计算衰老细胞率。结果：免疫细胞化学染色显示细胞纯度在95％以上。细胞衰老β-半乳糖苷酶染色显示随代龄增加,衰老细胞数量增加（P〈0．05）;第6、11代龄,老年组衰老细胞率较年轻组高。结论：1．单纯Ⅱ型胶原酶消化法可以成功培养出不同年龄组大鼠主动脉VSMCs。2．培养的SD大鼠VSMCs表现出复制衰老过程,这可能为探讨细胞衰老及其与年龄相关的疾病机制提供新的视角。     

D—半乳糖致小鼠衰老模型海马突触蛋白的改变

用Ｄ－半乳糖所致衰老模型组和正常对照组小鼠的海马制备突触体总蛋白，进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层扫描分析。结果：和对照组相比Ｄ－半乳糖造模组海马有８种蛋白的相对百分含量变化大于５％，４种升高，４种降低。提示：Ｄ－半乳糖可能对小鼠海马多种突触蛋白的相对百分含量均有影响。     

β-半乳糖苷酶的糖苷键作用特异性研究

研究了不同微生物来源乳糖酶的糖苷键键型作用特异性,研究表明米曲霉乳糖酶的水解优先顺序是β-1－6键＞β-1－4键＞β-1－3键,乳酸克鲁维酵母乳糖酶的水解顺序则是β-1－4键＞β-1－6键＞β-1－3键。并发现所实验所用的环状芽孢杆菌对β－1－4键表现出了高度的键专一性。乳糖水解合成低聚双糖的种类和有关动力学数据都表明不同酶源的乳糖酶在键特异性方面存在很大差异。     

α—半乳糖苷酶消除猪血管内皮Galα（1,3）Gal的初步研究

为了探讨预防异种器官移植产生的免疫排斥反应,采用α－半乳糖苷酶（α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）处理猪股静脉内皮,观察猪血管内皮上的主要异种抗原决定簇α－半乳糖α（１,３）半乳糖（Ｇａｌα（１,３）Ｇａｌ）的表达变化及血管内皮形态学改变,结果发现用α－半乳糖苷酶能在３０分钟内消除猪血管内皮上的异种抗原Ｇｌａα（１,３）Ｇａｌ被处理的猪血管内皮在１小时内未见形态学的病理改变,提示α－半乳糖苷酶直接处     

衰老海马神经元的体外鉴定

目的:鉴定培养的海马神经元衰老状况。方法:利用SD新生鼠进行海马神经元原代培养,分别取培养6、12和20d的神经元进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)的细胞化学染色。结果:随着培养时间的延长,SA-β-GAL阳性率增加(P<0.01)。结论:海马神经元可能随着培养时间的延长而衰老细胞增加。     

天麻对D—半乳糖所致衰老小鼠的改善作用

小鼠球后注射D－半乳糖80mg／kg，50d后造成亚急性衰老模型，同时口服天麻4、8g／kg能显著恢复D－半乳糖衰老模型小鼠被动回避反应能力的下降，明显提高RBC中SOD活力，皮肤羟脯氨酸含量，减少心肌脂褐质，对脑、肝脂褐质减少不明显。     

人参茎叶皂甙对D—半乳糖拟衰老大鼠的作用

目的：探讨人参茎叶皂甙对Ｄ－半乳糖拟衰老大鼠的作用。方法：Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠自５０日龄起每日皮下注射Ｄ－半乳糖４８ｍｇ／ｋｇ,连续６周。其中一组同时喂饲人参茎叶皂甙（２５ｍｇ／２０ｇ饲料比例掺入）。应用邻苯三酚法、ＴＢＡ比色法、放射免疫分析法分别测定下丘脑超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、脑组织丙二醛（ＭＤＡ）含量、血清及原代垂体细胞培养液中催乳素（ＰＲＬ）浓度。结果：人参茎叶皂甙可阻止Ｄ－半乳糖诱发下丘脑ＳＯＤ活性下降、脑组织ＭＤＡ含量增加、血清ＰＲＬ升高以及垂体细胞对促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）及多巴胺（ＤＡ）刺激的反应性降低等作用。结论：人参茎叶皂甙有对抗Ｄ－半乳糖致“衰老”的作用     

人胃癌结合β半乳糖苷凝集素的免疫效应研究

为了探讨人胃癌结合β半乳糖苷凝集素的免疫效应，将不同剂量的凝集素注入小鼠腹腔，观察其对小鼠溶血素、抗体形成细胞、大颗粒淋巴细胞及淋巴细胞转化率的影响。结果表明，β半乳糖苷凝集素具有促进淋巴细胞转化并抑制抗体产生的作用。实验组与对照组相比Ｐ＜０．０１，差异有高度显著性。表明该凝集素具有增强细胞免疫、抑制体液免疫的作用。     

慢性失神经后衰老相关β-半乳糖苷酶在成年大鼠施万细胞的表达

目的 探讨成年大鼠长时程轴突缺失对大鼠施万细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated beta galactosidase, SA-β-gal)表达的影响。方法 成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、 1周失神经组、2周失神经组、4周失神经组、5周失神经组、6周失神经组、7周失神经组和8周失神经组。各组动物进行右侧坐骨神经永久性横断手术或者相应的假手术,根据各组设定的远侧段失神经时间分别获取损伤神经的5 mm近侧段和10 mm远侧段以及假手术组同侧神经和手术组对侧神经的对应节段,采用SA-β-gal染色检测SA-β-gal的表达,并对8周失神经组大鼠获取的损伤神经标本用SA-β-gal和施万细胞特异性蛋白（S100β）双标染色分析远侧段神经中SA-β-gal表达的细胞定位。结果 成年大鼠右侧坐骨神经永久横断后,近侧段神经的远端SA-β-gal表达在2周一过性增加,而远侧段神经中SA-β-gal表达在2周明显增加,并且在更长的失神经过程中保持这种高表达水平。而且,绝大部分SA-β-gal的表达出现在S100β免疫反应阳性的施万细胞中。结论 长时程轴突缺失增加成年大鼠施万细胞中SA-β-gal表达。     

正常人成纤维细胞老化过程中活性氧水平的变化

目的 研究正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平的变化。方法 取常规体外培养的原代人成纤维细胞,按不同传代数（PD22－24和PD50－52）分为两组,代表老化过程中两个阶段（早期和中－晚期）,用流式细胞仪检测罗丹明123显示细胞活性氧水平,同时用β-半乳糖苷酶组化染色,形态观察衰老细胞,用群体倍增时间和流式细胞周期分析显示细胞增殖情况。结果 中－晚期细胞中衰老细胞增多,活性氧水平增高,未出现增殖阻滞。结论 正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平呈升高趋势。