研制14型肺炎链球菌培养基和优化其荚膜多糖提纯的工艺

目的研制国产培养14型肺炎链球菌的培养基,然后制备和纯化该菌的荚膜多糖,并对其全过程的工艺进行优化。方法测试添加不同种血清、培养基成分对肺炎链球菌生长的影响,在此基础上对比进口培养基和本实验自制培养基培养细菌的效果。测试不同裂解细菌方案对获得荚膜多糖多少的影响,并比较DNA酶和RNA酶酶解方法和常规乙醇沉淀方法去除残留核酸的效果。结果实验室自配培养基与进口培养基均能使肺炎链球菌较好生长。用1%NP40加胰酶的裂解方法可使多糖从细菌菌体更好的释放,使用DNA酶和RNA酶去除残留核酸,在多糖产量和核酸去除效率方面都取得了较好的结果,再进一步纯化后可以得到较纯的多糖。结论本文在培养基国产化、菌体裂解后多糖释放和核酸去除三大方面为肺炎球菌荚膜多糖提取提供了有效可行的方案。     

营养因素对哺乳动物成纤维细胞谷胱甘肽S—转移酶的影响

体外培养幼年仓鼠肾成纤维细胞(BHK—21/C13)发现,谷胱甘肽S—转移酶(GST)的活性受多种因素的修饰。在含10％胎牛血清(FCS)的培养基中培养72.96和120h,该酶的相对活性分别为84％、100％和131％;在96h换新鲜培养液,并继续培养24h,酶的活性相当于未换培养液组的75％;培养基中FCS的含量降低50％、酶的活性升高一倍。进一步研究抗氧化性营养物质对GST活力的影响发现:维生素E(14μmol/L)使此酶活性稍有降低,但不显著;微量元素硒(0.1μmol/L)则使该酶的活力降低22％。用马来酸二乙酯(DEM)耗竭70％谷胱甘肽(GSH),酶的活性升高33％。推论:GST的活力可望成为营养不良,甚或慢性氧化应激的定量评价指标之一。     

非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响

目的 探讨非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响。方法 以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定最佳培养时间,并将纤维素酶（cellulase R-10）和果胶酶（pectolyase Y-23）按2︰1（质量比）混合分别酶解悬浮细胞18、20、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定最佳酶解时间。分别以原生质体基础培养基提取愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率。结果 悬浮细胞培养8天细胞增殖率最大,细胞活力93.8%; 4%（质量分数）纤维素酶和2%（质量分数）果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2%,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5%。以不同组分培养基培养原生质体,最早于第6 d在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂;第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用。结论 以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8 d并以4%纤维素酶和2%果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体;愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖。     

氟化物对变形链球菌生长和产酸影响的体外实验研究

目的:通过研究氟化物浓度对致龋菌生长和代谢的影响,以进一步阐明氟化物的防龋机制。方法:在含有不同浓度(0～1.0%)氟化钠的培养基内培养变形链球菌标准菌株,以分光光度法检测培养前后培养基光密度值(OD值),以反映变形链球菌的生长情况;以复合玻璃pH电极法检测培养前后培养基pH的变化(△pH),以反映变形链球菌的产酸代谢情况。结果:与对照组相比,各实验组变形链球菌的生长受到明显抑制,且随着培养基内氟化钠浓度的增加,变形链球菌的数量呈浓度依赖性减少;同时随着培养基内氟化钠浓度的增加,各组培养基的pH变化也逐渐减小,当氟化钠的浓度达0.5%～1.0%时,培养前、后培养基的pH几乎未发生明显的变化。各组培养基的OD值与△pH间无明显相关性。结论:氟化钠可显著抑制致龋菌的生长及产酸代谢活动,但氟化钠可能主要通过干扰牙菌斑内致龋菌的产酸代谢活动来发挥其局部防龋作用,而其对致龋菌生长的抑制或杀灭仅起次要作用。     

链球菌酶试验临床应用的初步观察

本文应用链球菌酶试验(Stz)、抗链球菌溶血素O溶血试验(ASOH)和抗链球菌溶血素O胶乳试验(ASOL),对风湿热、急性肾炎以及其他疾病患者血清中抗链球菌胞外产物的抗体进行了测定,结果表明,风湿热、急性肾炎的ASTZ、ASOH和ASOL阳性率及其滴度较其他疾病和正常人显著增高,ASTZ的阳性率较ASOH高10％左右,与ASOL接近,但三种方法无统计学差异。链球菌酶试验操作简易,结果稳定,重复性好,本试验作为一种检测链球菌抗体的血清学方法,对提高风湿热、急性肾炎的诊断水平,具有一定的临床实用价值。     

耐药性金黄色葡萄球菌青霉素酶的研究

南京临床分离的耐药性金黄色葡萄球菌75号菌株产生细胞结合青霉素酶和胞外青霉素酶,但未能证明有细胞结合胞外青霉素酶。于对数生长期的培养物中加入苯唑青霉素,青霉素酶的产生率较低;如于培养基中加入柠檬酸钠,则笨唑青霉素对青霉素酶的诱导作用显著增加。以0.15M 柠檬酸钠对青霉素酶产生的刺激效果最显著。总酶和胞外酶的活力分别是未加柠檬酸钠培养基的8.7和16.9倍。柠檬酸钠的加入对细菌的生长有明显的抑制作用。用改良的 Richmond 方法纯化葡萄球菌胞外青霉素酶,平均总收率为25.33%,其平均比活力为21729单位/微克蛋白。     

玉屏风散影响上呼吸道甲型链球菌生长的实验研究

目的:体外观察玉屏风散水煎剂对上呼吸道优势菌甲型链球菌以及乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌等几种常见致病菌的影响作用,为开发玉屏风散口含片提供理论依据.方法:制备玉屏风散水煎剂.用液体培养基比浊法对实验菌液进行定量检测,并将定量的菌液接种到含药液体培养基.培养24h后用平板菌落计数法观察药物对细菌生长的影响作用.结果:玉屏风散水煎剂能促进甲型链球菌的生长,并能抑制乙型链球菌、大肠杆菌和肺炎链球菌的生长.结论:在体外实验条件下,玉屏风散水煎剂能有效促进液体培养基甲型链球菌的生长,同时能够抑制大肠杆菌、肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌的生长,为下一步开发玉屏风散口含片提供了实验依据.     

耐热乳糖酶产生菌株的筛选及产酶条件试验

目的探讨耐热乳糖酶产生菌的筛选方法及其产酶条件。方法利用含有X-gal平板培养基,于60℃划线培养,筛选出耐热乳糖酶产生菌,并观测了培养温度、培养时间、培养基初始pH及乳糖浓度对菌株生长及产酶条件的影响。结果筛选出含耐热乳糖酶菌株,该菌株的最适产酶条件分别为培养温度(60±1)℃,培养时间18～21h,培养基起始pH7.0～8.0,培养基乳糖浓度41.7mmol/L。结论在含有X-gal培养基进行划线培养是筛选产乳糖酶菌株的有效方法,同时该菌株具有嗜热性。     

蜂胶对变形链球菌产酸的影响

目的探讨北京蜂胶提取物对变形链球菌产酸的影响。方法以TPY液体培养基为溶剂,分别配制5g/L和1·25g/L水溶性蜂胶溶液,1·5625g/L醇溶性蜂胶溶液,1·6g/L洗必泰液体培养基,并以空白液体培养基作为对照,加入变形链球菌培养48h后离心,用乳酸分析仪测定培养基中乳酸含量并进行比较。结果醇溶性蜂胶溶液和水溶性蜂胶溶液皆可使乳酸值降低,蜂胶各组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0·05)。5g/L水溶性蜂胶溶液降低乳酸值的作用明显大于1·25g/L水溶性蜂胶溶液(P<0·05)。醇溶性蜂胶溶液和5g/L水溶性蜂胶溶液与洗必泰3组降低乳酸值的作用比较差异均无统计学意义(P>0·05)。结论北京蜂胶提取物影响变形链球菌的代谢,使变形链球菌代谢产酸减少。     

海因酶产生菌的微孔快速筛选法

目的　建立微孔快速筛选法以筛选海因酶活力较高的菌株。方法　比较底物对羟基苯海因的多种有机溶剂对酶反应的影响。结果　筛选出一株酶活力较高的海因酶产生菌腐臭假单胞菌 95 0 5 (Pseudomonasputida95 0 5 )。发现吐温 - 80 (1% )能很好溶解底物 ,促进酶反应。结论　为从大批量菌株中快速筛选出较高酶活力的菌株提供了一种新的方法。较好地解决了酶反应体系中底物不易溶解的关键性问题     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的：探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法：收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neu ECD阳性患...     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素与血脂检测结果分析

目的:探讨血清胆红素浓度与四种动脉粥样硬化( AS)性疾病的关系。方法:观察组分为四组,单纯性高血压组、冠心病组、糖尿病组、脑梗死组,对照组为同年龄段健康查体者,检测空腹血清总胆红素、直接胆红素、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,计算间接胆红素,并对检测结果进行统计学分析。结果:与对照组比较,观察组中直接胆红素均有所下降,但差异无显著统计学意义( P>0 .0 5 ) ,总胆红素与间接胆红素除脑梗死组外,其他各组均明显降低( P<0 .0 5 ) ;除脑梗死组HDL - C与对照组无显著差异外,其他观察组血脂各指标与对照组比较均有显著统计学差异( P<0 .0 5 ) ,且糖尿病组三酰甘油及冠心病组低密度脂蛋白胆固醇与对照组比较有极显著统计学差异( P<0 .0 1 )。结论:高血压、冠心病、脑梗死、糖尿病等动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素浓度有不同程度降低,其中,间接胆红素降低更明显,提示可将胆红素水平作为AS患者体内氧化活性增加的一个临床监测指标     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。     

青蒿琥酯静脉注射7天疗程治疗恶性疟疗效观察

青蒿琥酯注射剂治疗恶性疟以及凶险型疟疾的推荐剂量为3天疗程,总量240mg。该剂量具有速效、低毒的优点,但原虫复燃率高达50%左右.试用7天疗程,总量480mg方案治疗恶性疟40例,原虫复燃率降至5.6%,亦未见毒副反应。本文结果提示,适当延长青蒿琥酯注射剂的疗程和增加总剂量,可明显地降低疟原虫的复燃率;延长疗程、增加总剂量而不增加每天量,未见毒副作用出现。