阳离子脂质体Lipofectin^TM对WT1反义酸在K562细胞的摄 …

目的 探讨阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ＾ＴＭ对ＷＴ１反义寡核苷酸（反义核酸）细胞摄入胞内分布的影响。方法 采用阳离子脂质介导ＷＴ１反义核酸转染Ｋ５６２细胞,应用流式细胞仪、荧光显微镜分别观察反义核酸的细胞摄入和胞内分布,ＲＴ－ＰＣＲ检测处理前后ＷＴ１ｍＲＮＡ表达水平。结果 （１）脂质体提高Ｋ５６２细胞对反义核酸的摄入,细胞摄入率达７０．９％,平均荧光强度提高６倍以上;脂质体介导转染反义核酸对其     

ODC反义寡核苷酸对K562细胞凋亡及分化和相关基因表达的影响

目的：观察鸟氨酸脱羧酶反义寡核苷酸（ＯＤＣａｓＯＤＮ）引起鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）表达及活性的抑制对人红白血病Ｋ５６２细胞生长、凋亡的影响,为探索抑制多胺生物合成的抗癌新途径提供实验依据。方法：采用硫代修饰的ＯＤＣａｓＯＤＮ处理细胞,观察生长曲线,及用Ｇｉｅｍｓａ染色观察形态变化,ＲＮＡ斑点杂交检测基因表达,放射微量法测定ＯＤＣ活性。结果：ＯＤＣａｓＯＤＮ能抑制Ｋ５６２细胞生长、诱导凋亡,并证明了该细胞的ＯＤＣ、Ｂｃｌ２表达下降及ＯＤＣ活性受到抑制。结论：ＯＤＣａｓＯＤＮ能下调ＯＤＣ表达、降低其酶活性,引起ｂｃｌ２基因表达抑制,导致Ｋ５６２细胞生长抑制及凋亡诱导。     

阳离子脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸促进对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 考察阳离子脂质体(CL)为载体的反义寡核苷酸(ASODN)序列对HeLa细胞的抑制作用.方法 选择以人端粒酶模板RNA(hTR)和人逆转录酶催化亚基(hTERT)为靶点的两种ASODN,用3β[N-(N‘,N‘-二甲氨基乙基)氨甲酰基]-胆固醇(DC-Chol)和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)制备CL,考察其形态和粒径分布,并用其介导反义寡核苷酸转染HeLa细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT)研究对细胞的抑制作用.结果 CL外观呈圆形,粒径均匀,在体外能够有效转染反义hTR和反义hTERT寡核苷酸序列(anti-hTR,anti-hTERT).CL/ASODN处理后的HeLa细胞,72 h后的存活率为(19.82±12.19)%(antihTR,2.0 μmol·L-1)和(16.59±4.10)%(anti-hTERT,2.0 μmol·L-1),而相同浓度游离的ASODN没有发现抑制作用.CL/ASODN复合物能够在120 h内持续抑制HeLa细胞的生长.结论 CL能够有效提高ASODN对HeLa细胞的抑制作用,作为端粒酶抑制剂的新型非病毒载体,具有良好的应用前景.     

阳离子脂质体增加造血系统恶性肿瘤细胞株对寡核苷酸G3139的摄入

目的观察阳离子脂质体DOSPER介导或Bcl-2反义寡核苷酸G3139直接作用时,造血系统恶性肿瘤细胞株对G3139的摄入,为阳离子脂质体和反义寡核苷酸的进一步应用提供依据.方法利用异硫氰酸荧光素标记的G3139,流式细胞仪(FCM)测定造血系统恶性肿瘤细胞株HL60、K562、U937、CA46和CEM细胞内的平均荧光强度.结果 G3139直接作用于细胞时,细胞内荧光强度U937>HL60>CA46>K562>CEM(P<0.05);DOSPER介导转染时,各细胞内的荧光强度均显著高于直接转染时(P<0.01),而且当DOSPER/G3139(μg/μg)为2～3∶1时,转染效率最佳,但此时各细胞间细胞内平均平均荧光强度无明显的差别(P>0.05).结论不同造血系统恶性肿瘤细胞株对G3139的摄入不同,阳离子脂质体DOSPER可普遍提高细胞对G3139的摄入.     

阳离子脂质体对反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒作用的促进

目的 :考察阳离子脂质材料 3β [N (N′,N′ 二甲基胺乙基 )胺基甲酰基 ]胆固醇 (3β [N (N′,N′ dimethylaminoethane) carbamoyl]cholesterol,DC chol)与反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,asODN)的结合能力及asODN阳离子脂质体的细胞毒性和抗病毒活性。方法 :以DC chol从水相中萃取asODN的萃取率评价不同条件下DC chol与asODN的作用力 ;通过四唑盐比色法检测含DC chol的阳离子脂质体对HepG2 2 .2 .1 5的细胞毒性 ;以酶联免疫法 (ELISA)检测细胞上清培养液中HBsAg和HBeAg的含量 ,考察不同asODN阳离子脂质体的抗病毒活性。结果 :当正负电荷比 >0 .6时 ,DC Chol能有效的从水相中萃取asODN (萃取率 80 %～ 1 0 0 % ) ;碱性条件和强离子 (Na+ /Cl-)的存在不利于DC Chol与asODN的作用 ;DC chol阳离子脂质体具有一定的细胞毒性 ,在低质量浓度时 (0 .84～ 2 6 .94mg·L-1 )脂质体的细胞毒性与DC chol浓度成正比 ;当asODN在 1 .2 5～ 5 .0 0 μmol·L-1时 ,其抗病毒活性与剂量相关 ;脂质体可提高asODN对乙肝病毒的抗病毒活性 ,其中阳离子脂质体对asODN抗病毒活性的促进作用较明显 (从 6 0 %到 95 % )。结论 :表面修饰DC Chol阳离子脂质体能有效地促进asODN的抗乙肝病毒活性。     

阳离子脂质体介导的反义c-myb寡核苷酸对脑胶质瘤生长的抑制作用研究

目的　观察阳离子脂质体 lipofect AMINE介导的反义 c- myb寡核苷酸 (L ipo AON)对肿瘤生长的影响。方法　取雄性 Wistar大鼠 48只 ,行脑内 C6胶质瘤接种 ,术后 6天 ,将携瘤大鼠随机分成 L ipo AON组、反义 c- myb寡核苷酸组 (AON组 )、阳离子脂质体 lipofect AMINE组 (L ipo组 )和生理盐水对照组 (NS组 ) ,每组各 12只。经大鼠右股静脉给药 ,间隔 1天后 ,再次用同法经大鼠左股静脉等量给药。给药后严密观察各组大鼠饮食、四肢活动及体重变化情况 ,并于给药后第 4天和第 10天每组分别处死 6只大鼠 ,进行肿瘤的生长情况和大体形态学观察。结果　 L ipo AON组在静脉给药期间及停药后的短期内其肿瘤生长被明显抑制 ,c- m yb表达下调 ;而 AON组、L ipo组与 NS组相比 ,其肿瘤生长未见抑制现象 ,c- myb表达亦未见下调。但随着停药时间的延长 ,L ipo AON对肿瘤的抑制作用下降。结论　 1阳离子脂质体 L ipofect AMINE作为 c- m yb AON转移载体 ,使水溶性 c- myb AON容易透过 BBTB进入瘤内发挥治疗作用 ,且具有操作简单、安全、转染率高等特点 ;2 L ipo AON对 C6胶质瘤生长有明显抑制作用 ,用反义技术抑制 c- myb的表达在胶质瘤的治疗中具有研究前景 ;3 L ipo AON对胶质瘤生长的抑制作用随时间延长而下降 ,如何让     

MAPK反义寡核苷酸对K562细胞系的增殖抑制作用

目的 :探讨MAPK在慢性髓细胞白血病 (CML)信号转导中的作用及其作用机制 .方法 :用脂质体转染法将MAPKASO导入K5 6 2细胞中 ,通过集落形成、DNA合成、蛋白质含量和MAPK活性的变化检测MAPKASO对K5 6 2细胞的作用 .结果 :MAPKASO可明显抑制细胞集落形成、DNA合成、蛋白质含量和MAPK活性 ,其抑制率分别为 4 6 .1% ,5 7.1% ,4 3.2 %和 6 2 .0 % ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :MAPK在CML信号转导中起重要作用 ,极有可能成为CML治疗的新靶点     

反义核酸对白血病细胞化疗药物敏感性的影响

①目的 了解白血病化疗过程中药物的副作用和白血病细胞的抗药性。②方法 将人工合成的与Ｃ－ｍｙｂ基因起密码子２～７互补的反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ）和化疗药物阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）联合作用于急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）细胞,观察其对细胞活力奏落形成和凋亡的影响。③结果 ＡＳＯ可明显提高白血病细胞对化疗药物的敏感性。④结论 ＡＳＯ和化疗药物联合应用可望成为根治白血病的一项新手段。     

阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星状细胞激活的抑制作用

为探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides, ASON)对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的作用,作者合成了特异性的针对TGFβ1 mRNA转译起始区的硫代磷酸ASON及其对照(正义、错义寡核苷酸),并和阳离子脂质体形成复合物.通过测定细胞内32P标记的ASON的放射量来观察ASON的细胞摄入率,用细胞免疫化学分析α-SMA的表达来观察星状细胞的激活 .结果显示:阳离子脂质体可以明显增加TGFβ1 ASON的细胞摄入率(P＜0.05);阳离子脂质体-TGFβ1 ASON复合物和单独使用TGFβ1 ASON相比,在相同浓度下(ASON浓度为1μmol/L)可以明显增高ASON对星状细胞激活的抑制作用,而单独使用阳离子脂质体或阳离子脂质体-正义或错义TGFβ1寡核苷酸复合物在相同浓度下未见抑制效应.ASON或阳离子脂质体-ASON复合物均无细胞毒性作用.由此提示,阳离子脂质体-ASON复合物可能发展成一种治疗肝纤维化的药物.     

阳离子脂质体增加造血系统恶性肿瘤细胞株对苷酸G3139？…

目的 观察阳主子脂质体ＤＯＳＰＥＲ介导或Ｂｃｌ－２反义寡核苷酸Ｇ３１３９直接作用时,血系统恶性肿瘤细胞株对Ｇ３１３９的摄入,为阳离子腊质体的反义寡核苷权的进一步应用提供依据。方法 利用异硫氰酸荧光素标记的Ｇ３１３９,流式细胞仪（ＦＣＭ）测定造血系统恶性肿瘤细胞株ＨＬ６０、Ｋ５６２、Ｕ９３７、ＣＡ４６和ＣＥＭ细胞内的平均荧光强度。结果 Ｇ３１３９直接作用于细胞时,细胞内荧光强度Ｕ９３７〉ＨＬ６０〉Ｃ     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用

目的观察阳离子脂质体介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒载体,用阳离子脂质体ＬｉｐｏｆeｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导的含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒ＤＮＡ分别体外转染小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体－ＤＮＡ复合物,观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性,转染效率为１０％左右,瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子的治疗效果较佳。结论ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用,ＤＯＳＰＥＲ的效果较好。     

反义脱氧寡核苷酸诱导HL-60细胞分化及对c-myc基因表达的影响

目的 研究二个针对c-myc基因的反义脱氧寡核苷酸（简称反义核酸）对急性白血病细胞HL－60的分化及基因表达的作用。方法 以人工合成二个硫代寡核苷酸作用于HL－60细胞后,采用流式细胞仪检测c-myc蛋白表达和HL－60细胞分化抗原,RT－PCR方法检测c-myc基因表达,并在光镜下观察以瑞特染色及NBT染色的HL－60细胞形态。结果 经反义核酸作用后,c-myc蛋白的表达有明显下降,与作用浓度与时间相关。急性白血病HL－60细胞出现中,晚幼粒细胞增多,出现CD15增高,HLA－DR及CD34降低是细胞分化的表现。同时RT－PCR分析c-myc基因扩增明显减少。结论 反义核酸对急性白血病细胞HL－60的诱导分化的同时抑制c-myc基因表达。     

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响

目的探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响。方法设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸(S-as ODN)靶序列。应用ELISA方法、MTT比色法、观察S-as ODN对HBsAg、HBeAg抗原表达及Hep G22215细胞毒性的影响。结果不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用,在浓度为20μmol／L时,对细胞无明显杀伤作用。结论S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg的抑制作用为抗HBV治疗提供了新的途径。     

姜黄素与羟基脲对K562细胞的体外联合作用

目的 了解姜黄素与羟基脲合用对人白血病Ｋ５６２细胞的体外作用。方法 采用ＭＴＴ法测定药物的体外杀伤作用,应用ＡＯ／ＥＢ荧光染料染色观察药物诱导细胞凋亡,金氏公式进行联合用药分析。结果 姜黄素５,１０ｕｇ／ｍｌ,羟基脲２５,５０ｕｇ／ｍｌ同时给药,对Ｋ５６２细胞可产生单纯相加的协同杀伤效果。姜黄素与羟基脲同时给药诱导Ｋ５６２细胞凋亡率高于羟基脲单独用药,低于姜黄素单独用药。结论 姜黄素与羟基脲同时联     

中药安迪注射剂对白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨安迪(Adi)注射剂对人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响.方法:MTT法测定K562在Adi作用后的细胞活力(A值);流式细胞技术检测细胞凋亡变化;电镜观察细胞的形态学改变等;综合评价Adi对K562细胞株增殖和凋亡的影响.结果:①MTT法测得Adi在(2.5～20.0)μg/mL浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有浓度依赖性,20.0 μg/mL Adi作用36 h的K562细胞株A值最低;②流式细胞仪检测结果显示10.0,20.0 μg/mL Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P＜0.05);③电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变.结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,并具有显著促进细胞凋亡的作用.     

c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。     

5′-荧光素标记的RelA反义脱氧寡核苷酸在人白血病细胞HL-6O中的分布及稳定性

目的　比较修饰型及未修饰型 Rel A反义脱氧寡核苷酸 ( AS- ODN)在人白血病细胞 HL- 60中的分布及稳定性。方法　将荧光素 ( FAM)标记的硫代磷酸酯修饰型及未修饰型 AS- ODN经脂质体介导或直接转染人 HL- 60细胞 ,应用荧光显微镜及流式细胞仪观察细胞内荧光的时相分布。结果　发现 1μm ol/ L 修饰型 AS- ODN进入细胞后 ,细胞内荧光强度 6h达到高峰。在有脂质体存在时 ,细胞内荧光明显增强 ,12 h后荧光减弱并逐渐消失 ;而 AS- ODN直接转染细胞 ,细胞内特别是核内荧光强度明显比脂质体组弱。未修饰型 AS- ODN直接或经脂质体介导转染 ,细胞内荧光强度均很弱 ,滞留时间不超过 4h。结论　脂质体可以提高细胞对 AS- ODN的摄取及核聚积 ,而硫代磷酸酯修饰型 AS-ODN具有更好的稳定性     

联合应用反义核酸对慢性粒细胞性白血病骨髓及外周血的净化的 …

目的：比较单独及联合应用ＢＣＲ－ＡＢＬ反义寡核苷酸（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳ ＯＤＮ）及Ｃ－ＭＹＢ ＡＳ ＯＤＮ对慢性粒细胞性细胞白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）细胞及正常造血细胞的抑制作用。方法：用ＢＣＲ－ＡＢＬ ＡＳ ＯＤＮ、Ｃ－ＭＹＢ ＡＳ ＯＤＮ及错配ＯＤＮ,分别对１０例ＣＭＬ骨髓和外周血单个核细胞（Ｍｏｎ