不同原代培养方法培养人牙髓细胞的研究

目的：比较并建立一种操作简单方便的人牙髓细胞原代培养方法。方法：选择因正畸拔除的完整无龋双尖牙,无菌条件下取出牙髓,分别采用组织块法、酶消化法和改良组织块法进行人牙髓细胞的体外原代培养,比较观察三种不同培养方法的成活率、细胞形态和数量,测定生长曲线并进行细胞来源鉴定。结果：三种方法均可从人牙髓组织分离培养获得外胚间充质来源的牙髓细胞,呈成纤维细胞样,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。组织块法耗时较长,培养成功率26.7%;酶消化法培养成活率较低,且细胞数量较少,培养成功率仅为13.3%;在改良组织块法中未发现有漂浮的组织块,培养成活率较高为80%。结论：改良组织块法解决了传统组织块法中组织块难以贴壁的问题,简化了操作步骤并具有较高的成功率,是一种科学可行的人牙髓细胞原代培养方法。     

昆明种乳鼠肝细胞原代培养方法的比较研究

目的 通过比较3种昆明鼠乳鼠肝细胞原代培养的方法,探索一种更有效、快捷的原代培养方法。方法 取30只1~3日龄昆明种乳鼠,随机分为3组,分别采用组织块培养法、胰酶消化法、组织块联合胰酶消化法进行肝细胞原代培养,用倒置显微镜观察实验过程中肝细胞的形态及生长情况。结果 3种方法均能进行乳鼠肝细胞的原代培养,其中组织块联合胰酶消化法培养的肝细胞形态学和生物学特性优于其他两种方法培养的细胞。结论 组织块联合胰酶消化法是3种方法中最快速和高效的一种方法,获得的乳鼠肝细胞形态及生物学特性好,为体外建立乳鼠肝细胞实验模型奠定了实验基础。     

酶消化组织块盖玻片培养法原代培养人牙周膜细胞

<正>人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDL)是牙周组织中重要的细胞成分,其可产生胶原纤维,能合成胶原并释放到胞外基质,对牙体组织有着重要作用。基于牙周膜细胞的重要角色,广大学者对HPDL的研究数不胜数,而体外培养是研究HPDL体外模型的一种主要方法,传统的细胞体外培养方法有酶消化法和组织块法。这两种方法已被证明是体外培养HPDL的可行有效方法,但是两者均存在一     

肾小管上皮细胞原代培养及鉴定

目的探讨肾小管上皮细胞体外培养及鉴定方法。方法①采用机械分离结合酶消化法获取肾小管,原代培养肾小管上皮细胞。②利用动态观察、细胞化学染色法及细胞的透射电镜扫描进行鉴定。结果①肾小管段不同换液时间24h、48h、72h、96h、120h,贴壁率分别为:0.1378±2.048E-02、0.3300±7.969E-02、0.5411±3.919E-02、0.5344±2.506E-02、0.4389±3.018E-02,以72小时首次换液最佳。②肾小管上皮细胞成功原代培养并于第4～7天处于对数生长期。细胞碱性磷酸酶染色均呈阳性,透射电镜扫描见细胞面向液层的刷状缘有大量微绒毛形成。结论采用机械结合酶消化法可分离到较纯的肾小管,肾小管段培养72h首次换液细胞贴壁最佳,肾小管上皮细胞用化学结合形态学及鉴定。     

条件性重编程技术分离培养人原代乳腺癌干细胞

目的 应用条件性重编程细胞(Conditionally Reprogrammed Cells,CRCs)技术建立高效、稳定的人乳腺癌千细胞体外培养,建立潜在的乳腺癌干细胞靶向药研究模型.方法 收集人乳腺癌组织样本,采用CRCs技术分离培养原代乳腺癌细胞,用CD24免疫磁珠标记原代乳腺癌细胞后使用磁性细胞分选仪分选出乳腺...     

乳鼠心肌细胞的原代培养方法改良

目的探讨乳鼠原代心肌细胞分离、培养和纯化的方法,得到存活率高、搏动频率强、纯度高的心肌细胞。方法采用0.08%胰蛋白酶及0.05%Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁60 min,加入终浓度为0.1 mmol·L~(-1)的5-Brdu纯化心肌细胞。倒置显微镜下观察不同时间心肌细胞形态学变化;记录心肌细胞搏动频率;台盼蓝染色,测定心肌细胞存活率。结果心肌细胞生长状态良好,4 h开始贴壁,48~72 h基本完全贴壁,形成放射状排列的细胞簇,同步搏动;5~9 d心肌细胞搏动频率在80~110次·min~(-1),活力好且稳定;采用台盼蓝染色法测得心肌细胞平均存活率为97.7%。结论此方法可得到存活率高、搏动频率强、纯度较高的心肌细胞,可为科研研究提供良好的实验模型。     

新生小鼠大脑皮层神经元的原代培养

目的：建立一种简便易行的体外原代培养新生小鼠大脑皮层神经元的方法。方法：采用低浓度．短时间的酶分离细胞培养法和含B-27的特殊培养基培养新生小鼠大脑皮层神经元。结果：神经元结构特征明显，生长好、得率高。结论：通过本方法可以稳定地获得较高纯度的新生小鼠大脑皮层神经元。     

小脑皮层神经细胞的体外原代培养

本文探讨了神经细胞培养的方法,建立了稳定的神经细胞培养模型。对培养各阶段的神经细胞进行了观察且系统地描述了它们的形态特征。并对培养的神经细胞的来源、轴突的形成、生长锥的形态和特点、神经细胞和突起聚集的原因等方面进行了讨论。     

脑微血管内皮细胞的原代培养方法概述

脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelialcells,BMECs)是构成血脑屏障的主要成分,与脑水肿、脑缺血以及脑肿瘤等脑血管疾病的发生、发展密切相关。BMECs原代培养模型已被广泛应用于血脑屏障、脑血管疾病的病理、生理及分子生物学研究。该文对近年来国内外有关BMECs原代培养的方法进行综述,为脑血管疾病的研究提供基础。     

原代乳腺癌细胞对中药体外敏感性研究

目的 探讨中药提取有效成份康莱特在乳腺癌临床治疗中的作用.方法 采用手术切取的乳腺癌组织制备原代乳腺癌细胞悬液,MTT法体外药敏实验检测原代乳腺癌细胞对康莱特及数种临床常用化疗药的不同敏感性,并进行比较分析.结果 原代乳腺癌细胞对康莱特的敏感性低于5-Fu、ADM及MMC,且有显著性差异(P＜0.05);乳腺癌细胞对康菜特具有中度敏感性,而与常用化疗药物相近,且无显著性差异(P＞0.05).结论 中药提取有效成份康莱特对乳腺癌的临床治疗具有中度敏感性,可作为临床二线用药或联合用药.     

A comparison of two human cell lines and two rat gonadal cell primary cultures as in vitro screening tools for aromatase modulation

Environmental toxicants are a serious health concern, and numerous studies have been devoted to studying the effects of environmental Endocrine Disrupting Chemicals (EDCs). The balance between androgens and estrogens controls the function of many EDC-sensitive organs, and the aromatase enzyme plays a key role in maintaining this balance. In vitro studies have suggested that aromatase expression and activity is a promising biomarker for initial screenings of putative hormonal disrupting compounds. To further validate the aromatase biomarker, we tested several EDCs (atrazine, bisphenol A, methoxychlor, methoxychlor metabolite HPTE, vinclozolin, vinclozolin metabolite M2) in four different models (human cell lines H295R and JEG-3, rat primary cultures of granulosa and leydig cells). We evaluated the similarities/differences in the chemical impact on aromatase mRNA levels and enzymatic activity for the different species and cell types. Aromatase gene expression was assessed by q-RT-PCR, and enzymatic activity was assessed via a tritiated water method with either intact cells or isolated microsomes. The aromatase gene mRNA levels and cellular enzymatic activity varied between the four different models tested, which suggests that the EDC effect varies among different cell types. However, regulation of microsomal aromatase activity appeared to be conserved across all the species and cell types tested. These results suggest that several well characterized complementary cellular models are required to fully characterize the effects of putative EDCs and predict the in vivo effects.     

乳腺癌患者应用两种方法经心电图定位瓣膜式经外周静脉穿刺中心静脉置管的对比研究

目的探讨乳腺癌患者应用0.9%氯化钠注射液手工推注法与自然垂降生理盐水柱法经三向瓣膜式经外周静脉穿刺中心静脉置管(PICC)引导腔内心电图的效果比较。方法选取2017年1月至2018年10月我院收治的98例单侧乳腺癌患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组49例和对照组49例,对照组采用0.9%氯化钠注射液手工推注法打开三向瓣膜,观察组采用0.9%氯化钠注射液自然垂降法打开三向瓣膜,比较2种方法引导腔内心电图的导管尖端位置准确性、P波中断率、特征性P波出现率、0.9%氯化钠注射液用量及操作便捷性满意度。结果观察组导管尖端位置正常比例为94%,对照组导管尖端位置正常比例为80%,2组差异有统计学意义(P<0.05);观察组导管尖端位置最佳比例为90%,对照组导管尖端位置最佳的比例为73%,2组差异有统计学意义(P<0.05)。观察组P波中断比例为24%,对照组P波中断的比例为96%,2组差异有统计学意义(P<0.05);观察组出现特征性P波的比例为92%,对照组出现特征性P波的比例为71%,2组差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的0.9%氯化钠注射液用量显著少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的操作便捷性满意度评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论静脉化疗的乳腺癌患者应用自然垂降0.9%氯化钠注射液柱法经三向瓣膜式PICC引导腔内心电图的效果理想,且操作更简便。     

25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的体外药敏研究

目的:研究25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的敏感性,探究抗乳腺癌药物敏感性的一般规律。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞生长的影响,计算各自抑制率(%)。结果:对人乳腺癌细胞抑制率超过30%的药物依次为紫杉醇、多西他赛、表柔比星、环磷酰胺、氟尿嘧啶、替尼泊苷、丝裂霉素、长春新碱、卡铂。S期、M期和周期非特异性药物对乳腺癌平均抑制率分别为(36.2±9.5)%、(29.1±5.6)%和(27.5±8.8)%,差别无显著意义。S期、M期和周期非特异性药物中抑制率最高的药物分别是紫杉醇、氟尿嘧啶和表柔比星。结论:肿瘤药敏的结果佐证了临床联合化疗的合理性。     

Insulin suppresses the expression and function of breast cancer resistance protein in primary cultures of rat brain microvessel endothelial cells

The aim of this study was to investigate the role of insulin in the regulation of breast cancer resistance protein (BCRP) function and expression using primary cultured rat brain microvessel endothelial cells (rBMECs) as an in vitro model of the blood brain barrier (BBB). The prazosin uptake assay and western blot analysis were used to assess the function and expression of BCRP, respectively. It was noted that the uptake of prazosin by rBMECs was time-, concentration- and temperature-dependent. The BCRP inhibitors novobiocin and imatinib mesylate significantly increased the uptake of prazosin by the cells in a concentration-dependent manner. The cells were also incubated with sera from diabetic rats for 72 h, serving as a diabetic in vitro model. We found that the uptake of prazosin by rBMECs incubated in the diabetic rat sera was 39.8% of that in normal rat sera, and insulin treatment reversed this decrease. Further results showed that insulin down-regulated the function and expression of BCRP in rBMECs in a concentration-dependent manner. Treatment with an antibody against the insulin receptor abolished the down-regulation of BCRP function and expression that was induced by insulin. These results indicate that insulin suppressed the function and expression of BCRPs in rBMEC primary cultures.     

人乳腺肿瘤原代细胞的分离培养

目的分离培养人乳腺肿瘤原代细胞,为研究人乳腺肿瘤的病理研究提供实验模型。方法采用Ⅲ型胶原酶消化法和差速离心法分离培养人乳腺肿瘤细胞,对存活乳腺肿瘤细胞进行细胞形态观察和免疫荧光染色鉴定。结果乳腺肿瘤细胞接种24 h后开始贴壁,培养8~10 d生长融合成片,在倒置显微镜下观察,细胞呈上皮细胞样,细胞角蛋白(CK)-19免疫荧光染色呈阳性,细胞纯度达到95%以上。结论采用本法体外分离培养人乳腺肿瘤原代细胞,细胞生长良好,纯度高,可用于人乳腺肿瘤病理等方面研究。     

Narcotic addiction in two Asian cultures: A comparison and analysis

Our current knowledge regarding the effects of open access to narcotic drugs is limited. This study was undertaken to clarify issues regarding availability of these drugs. Two ethnic groups in Laos were compared: the Hmong (or Meo), a tribal group with access to opium in their homes; and the Lao, a peasant people with more limited access, usually in opium dens.Of 15 demographic and clinical variables studied, 10 showed significant differences between the two cultures. Eight of these 10 could be readily accounted for by differences in drug availability. Only two differences could be ascribed to socio-ecologic factors not related to drug availability. Similarities between the two groups appeared due to (1) pharmacologic effects of narcotic addiction and (2) low social opprobrium toward addiction in both cultures.In this study, open availability of narcotic drugs appeared to favor the following: a greater proportion of female addicts; younger age of opiate usage and addiction; use of the more intoxicating route of administration; earlier onset of problems related to addiction; and shorter duration of addiction before seeking treatment.     

盐霉素和盐霉素钠对人乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞体外细胞毒作用的比较(英文)

盐霉素是一种从白色链丝菌培养物中分离提取的聚醚类离子载体型抗生素,它广泛应用于畜禽类动物鸡球虫病的防治,并且还能作为饲料添加剂以促进畜禽的生长。最近新发现盐霉素具有特异性抑制肿瘤干细胞的作用。目前盐霉素钠的价格只是盐霉素的十分之一,但两者在抑制肿瘤细胞和肿瘤干细胞方面的异同却未见文献报导。本研究以人乳腺癌细胞MCF-7及其干细胞为模型,通过SRB实验对盐霉素及其钠盐的细胞毒性进行了评价和比较。首先,通过流式细胞仪从MCF-7细胞中分选得到了SP细胞;然后用乳腺癌干细胞表面特异性标志物CD44~+/CD24~-对SP细胞进行了鉴定;最后,分别测定了盐霉素和盐霉素钠对分选得到的肿瘤干细胞和肿瘤细胞的体外生长抑制率。结果表明,与乳腺癌细胞相比较,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤干细胞均表现出了更强的抑制作用,在同样的给药浓度下,盐霉素和盐霉素钠对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制作用未表现出明显的差异。本研究结果提示,在抑制肿瘤干细胞的相关研究中,可以用盐霉素钠替代盐霉素而不会影响抑制效果。     

两种腹膜透析置管术的疗效比较

目的 比较常规外科手术与腹腔镜手术腹膜透析(腹透)置管的疗效.方法 首次置管并接受腹透治疗的患者116例,随机均分为常规手术组(A组)和腹腔镜组(B组),随访2年,记录术后并发症及临床结局.结果 A、B组1年技术存活率相仿(84.5％ vs.94.8％)(P＞0.05),A组2年技术存活率明显低于B组(65.5％ vs.86.2％)(P＜0.05).A组发生腹膜炎5例,B组1例;A组发生机械并发症17例,多于B组的6例(P＜0.05).结论 腹腔镜下腹透置管患者技术存活率高,并发症少,尤其适合于腹部情况复杂的肾衰患者.