叶酸对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的：采用叶酸处理体外培养的人胃腺癌细胞株SGC-7901来研究叶酸在体外的抑癌作用。方法：采用生长曲线法，群体倍增时间法，集落形成实验来研究叶酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901体外增殖的影响；采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞周期的影响。结果：叶酸浓度达375nmol／L、750nmol／L和1875nmol／L时对人胃腺癌细胞株的增殖有抑制作用，叶酸处理的SGC-7901，G0／G1期细胞比例增大，细胞分裂受阻。结论：叶酸可以抑制胃腺癌细胞的生长、增殖并延长其群体倍增时间，降低其集落形成能力，叶酸可使胃腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0／G1期，从而达到抑制癌细胞生长的目的。     

4株人源乳酸杆菌体外黏附及抑制幽门螺杆菌黏附SGC-7901细胞的效果研究

目的研究4株从人胃肠道分离的乳酸杆菌体外对胃腺癌上皮细胞(SGC-7901)的黏附能力和抑制幽门螺杆菌黏附SGC-7901的能力。方法乳酸杆菌在体外与SGC-7901细胞爬片共同孵育2h后,采用光镜、电镜技术观察其黏附效果。乳酸杆菌与幽门螺杆菌SS1对胃腺癌细胞竞争性黏附2h后,荧光抗体染色法评价黏附于胃腺癌细胞上的幽门螺杆菌密度。结果4株乳酸杆菌在活菌和死菌状态下都能大量黏附于胃腺癌细胞,明显降低幽门螺杆菌在胃腺癌细胞上的黏附密度。除不同活菌菌株黏附率有显著性差别外,4株菌的黏附性能差别无显著性;而抑制黏附性能具有差异,抑制性能最好的是Lac15,最差的是Lac12。结论4株乳酸杆菌均具有明显抑制幽门螺杆菌体外黏附胃腺癌细胞的能力。     

阻断泛素-蛋白酶体通路对胃癌细胞株SGC-7901 DNA合成及细胞周期的影响

目的 研究阻断泛素-蛋白酶体通路对胃癌细胞株SGC-7901 DNA合成及细胞周期的影响。方法 将泛素-蛋白酶体通路特异性阻断剂MG-132加入胃癌细胞株SCC-7901，^3H-TdR掺入试验测定对胃癌细胞DNA合成的影响。流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果 MG-132作用于胃癌细胞株SGC-7901后，细胞DNA合成显著受抑制，G0／G1期细胞比例增加，S、G2／M期细胞比例减少。结论 MG-132能显著抑制胃癌细胞株SGC-7901的DNA合成，使细胞产生G1期阻滞，表明阻断泛素-蛋白酶体通路可能是治疗胃癌的新思路。     

曲古菌素A对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胃癌细胞SGC-7901增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:75 ng/ml TSA在48 h时就出现明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。抑制由12 h至72 h显著增加,细胞周期检测发现75 ng/ml TSA即可导致细胞G2期阻滞,抑制细胞增殖。结论:TSA可抑制体外胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导SGC-7901细胞出现G2期阻滞。     

重组腺病毒介导野生型PUMA基因对胰腺癌细胞的放射增敏作用

目的 探讨野生型PUMA基因通过重组腺病毒转染至胰腺癌细胞后对放射治疗(放疗)的增敏作用。方法 将含野生型PUMA基因的重组腺病毒50MOI转染Aspx-1胰腺癌细胞48h后,采用⁶⁰Coγ射线对其进行照射6Gy。Western blot法检测细胞内PUMA蛋白表达。通过噻唑蓝比色法和细胞克隆形成试验检测细胞生长、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记检测细胞凋亡水平。结果 转染野生型PUMA基因的Aspx-1细胞生长受到了明显的抑制(P<0.05),凋亡率增加。转染野生型PUMA基因的Aspx-1细胞再经6Gyγ射线照射后,细胞生长抑制和细胞凋亡率增加更加明显。结论 ①野生型PUMA基因转染促进胰腺癌细胞凋亡并抑制其生长。②野生型PUMA基因转染可增加胰腺癌细胞对放射治疗的敏感性。     

植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达。结果植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达。结论植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

重组腺病毒介导人野生型p53基因转染神经母细胞瘤细胞系的实验研究

目的 观察人野生型p53基因(wt-p53)转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.结果 以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH-SY5Y细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率.确定合适的感染倍数(MOI).分别以空病毒质粒(Ad)及携带wt-p53的腺病毒质粒(Ad-p53)转染SH-SY5Y细胞,即对照组和p53组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组).采用Western blot免疫印迹法检测p53蛋白的表达.观察转染前后细胞生长情况,绘制生长曲线,通过FCM分析细胞周期分布及细胞凋亡情况.结果 检测结果 表明腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染率,100MOI为合适的转染倍数.Ad-p53转染SH-SY5Y细胞后,wt-p53基因得到了高效表达.与空白组和对照组相比,p53组细胞生长曲线上升减缓,生长速度减慢,细胞凋亡增加,G1期细胞比例增加(P<0.01).结论 wt-p53基因转染可以有效抑制SH-SY5Y细胞的生长,这为p53基因修饰的肿瘤疫苗用于神经母细胞瘤的临床治疗提供了体外实验依据.     

腺病毒介导野生型p53基因转染对人胃癌细胞系的作用

目的　观察野生型p5 3基因 (wtp5 3 )对体外培养人胃癌细胞系生长的抑制作用 ,探讨野生型p5 3基因在胃癌基因治疗中的重要意义。方法　以携带有野生型p5 3基因的复制缺陷型腺病毒 (pAd -p5 3 )为载体 ,转染有p5 3基因突变的人胃癌细胞系BGC -790 1。应用生化染色 ,检测外源基因的转染效率 ;应用免疫组化、原位杂交等方法检测外源基因的表达效果 ;应用细胞计数、MTT法检测pAd -p5 3转染对胃癌细胞生长的抑制效果 ;应用流式细胞仪检测细胞周期。结果　当腺病毒在 10 0MOI以上效靶比转染人胃癌细胞系时 ,转染效率达 10 0 %。转染 3d以后 ,胃癌细胞中突变性p5 3蛋白表达开始减少 ,野生型p5 3mRNA的表达开始增多 ,BGC -790 1细胞生长受到明显抑制 ,流式细胞仪检测显示G0 /G1期细胞数增加 (未转染组 5 6 47% ,转染pAd -p5 3组 79 40 % ,P<0 0 5 ) ,S期细胞数减少 (未转染组 3 0 80 % ,转染pAd -p5 3组 13 81% ,P <0 0 1)。结论　腺病毒介导的野生型p5 3基因体外转染人胃癌细胞 ,可有效抑制胃癌细胞的生长 ,可能成为胃癌基因治疗的手段之一。     

共轭亚油酸诱导人胃腺癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用

目的 研究共轭亚油酸单体（c9,t11-CLA)诱导人体胃腺癌细胞（SGC－7901）凋亡作用。方法 采用细胞生长曲线,凋亡细胞的荧光显微镜、电镜观察,流式细胞光度术的检测以及P53蛋白表达方法。结果 显示出c9,t11-CLA对SGC－7901细胞有明显的抑制作用,并可诱导SGC－7901细胞产生凋亡,并随着c9,t11-CLA浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;而P53蛋白表达则随着c9,t11-CLA浓度的增加呈逐渐降低的趋势。结论 这可能是c9,t11-CLA抑制肿瘤细胞机制之一。     

姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制

目的探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的可能机制。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,细胞计数盒8(CCK8)法观察不同浓度姜黄素对胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用;流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期;Western blot检测SGC-7901细胞核转录因子κB(NF-κB)、livin、caspase-3蛋白表达情况。结果与对照组比较,各剂量姜黄素组SGC-7901细胞增殖活力均受到抑制,呈剂量效应关系(r=0.901,P0.01)与时间效应关系(r=0.389,P0.01);与对照组(2.8%)比较,20、40、60μmol/L姜黄素组SGC-7901细胞凋亡率[分别为7.7%、13.4%、20.7%]明显升高(P0.05);与对照组(58.59%)比较,20、40、60μmol/L姜黄素组SGC-7901细胞周期G1期比例[分别为60.24%、65.13%、68.35%]明显升高(P0.05);与对照组比较,姜黄素组SGC-7901细胞内NF-κB、livin蛋白表达降低,caspase-3蛋白表达升高(P0.05),呈剂量效应关系。结论姜黄素可抑制人胃癌细胞SGC-7901的活性,其机制可能与姜黄素下调NF-κB信号通路,促进livin解除对caspase的抑制效应而激活caspase-3,发挥其诱导细胞凋亡作用有关。     

DON对体外培养胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响

目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养的胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823细胞经100、500、1000μg/LDON处理72h,以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况及其量效关系,流式细胞术、免疫细胞化学和Westernblot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果FCM定量检测结果表明,DON各处理组细胞凋亡率均高于对照组,且均随DON浓度升高凋亡率相应增加,具有明显量效关系(SGC-7901:r=0.660,P<0.05,n=4;BGC-823:r=0.750,P<0.01,n=4)。FCM、免疫细胞化学和Westernblot结果显示,DON处理后SGC-7901、BGC-823细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论DON可剂量依赖地诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞中核因子及抗凋亡基因的影响

目的本研究以人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,在体外探讨维生素E琥珀酸酯(VES)在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡过程中对NF-κB组成性激活及抗凋亡基因在转录水平上的调控作用。方法采用MTT法和AnnexinV法分别检测不同浓度水平VES处理人胃癌SGC-7901细胞后细胞的生长和凋亡情况。采用细胞成分分离法获得细胞核总蛋白,然后以Westernblot法测定VES处理后核因子蛋白p65在细胞核总蛋白中的含量。用RT-PCR方法检测VES对SGC-7901细胞中抗凋亡基因c-IAP1、c-IAP-2、NAPI、survivin、XIAP的转录调节作用。结果12.5～50.0μmolVES作用24h后,SGC-7901细胞的生长被明显抑制。50μmolVES作用于细胞12h后可诱导细胞发生凋亡,且作用48h后其凋亡诱导作用更明显。Westernblot结果发现,VES处理SGC-7901细胞后使细胞核内NF-κBp65蛋白的含量下降,即抑制了NF-κBp65向细胞核内的迁移。RT-PCR结果提示,VES处理胃癌细胞后可以在基因水平上抑制抗凋亡基因NAIP和survivin转录,对其他IAPs家族成员-c-IAP1、c-IAP-2、XIAP的转录无下调作用。结论VES对SGC-7901细胞内NF-κB组成性激活的调控作用及对抗凋亡基因在转录水平上的抑制作用可能是其抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞发生凋亡的机制之一。     

缺氧条件下大豆异黄酮对胃癌细胞增殖和缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的:研究缺氧条件下大豆异黄酮(soy bean isoflavone,SI)对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用及可能机制。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造缺氧条件,实验分为正常对照、SI、缺氧对照和缺氧SI四组,用MTT法检测常氧和缺氧条件下药物效应。流式细胞仪分析各组细胞周期分布,透射电镜观察细胞超微形态的改变,免疫细胞化学法检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α和FAS的表达。结果:不同浓度SI在常氧和缺氧条件下都对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系,细胞均滞留于G2/M期,缺氧条件下SI组抑制作用增加,细胞凋亡率增加。透射电镜观察常氧下SI处理后细胞出现凋亡,缺氧条件下出现凋亡和坏死。SI在不同氧条件下均上调Fas表达,并能下调因缺氧表达增加的HIF-1。结论:SI对人胃癌细胞生长有抑制作用,其机制可能通过阻抑细胞周期进程,上调FAS蛋白表达,从而诱导胃癌细胞凋亡而实现的。缺氧条件下SI抑制作用增强,抑制HIF-1α的表达可能是其重要机制。     

叶酸对体外人胃腺癌细胞SGC-7901生长的作用

目的 以体外培养的人胃癌细胞株SGC—7901为材料，观察叶酸的抑癌防癌作用。方法 采用生长曲线法、MTT法观察叶酸对细胞的增殖和功能的影响；采用FCM进行细胞周期分析，观察叶酸对细胞凋亡的影响。结果 在叶酸浓度为375，750和1875nmol／L时对人胃癌细胞株的增殖和功能有抑制作用，浓度为375nmol／L时引起的凋亡率可达33．1％。结论 叶酸对人胚肌腱细胞无抑制作用，表明叶酸对正常人体细胞无不良影响而对癌细胞有抑制作用。     

亚硒酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及hTERT表达的影响

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株生长、凋亡和hTERT表达的作用及相关机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24、48、72、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901细胞形态的影响;MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞细胞的凋亡的影响;链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)免疫细胞化学法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERT蛋白表达的影响。结果 (1)MTT法结果显示:用亚硒酸钠培养SGC-7901细胞株24,48,72,96h后,随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h后当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L时,与对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01),48、96h后各浓度亚硒酸钠组与正常对照组比其吸光度值均明显降低(P<0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长抑制率逐渐增加。(2)流式细胞仪检测结果显示:亚硒酸钠可促进SGC-7901细胞发生细胞凋亡。5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组比正常对照组凋亡率明显升高(P<0.01)。(3)免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可降低SGC-7901细胞中hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5、8μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),48h时0.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),72h时2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),96h时实验组与对照组比较MOD均明显降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

环氧合酶-2在c9,t11-共轭亚油酸抑制肿瘤细胞转移中的作用

目的 研究c9,t11-共轭亚油酸（c9,t11-CLA）抑制人胃腺癌细胞（SGC-7901）转移作用与亚油酸代谢途径中限速酶环氧合酶-2（COX-2）的关系。方法采用体外细胞培养方法,用COX-2的选择性抑制剂NS．398抑制SGC-7901细胞中COX-2的活性,再加入200、100、50和25μmol／L浓度的c9,t11-CLA,利用重组基底膜侵袭实验、黏附实验、趋向运动实验检测c9,t11-CLA抑制肿瘤细胞转移的作用与COX-2的关系。结果与NS-398组比较,NS-398＋100Ixmol／Lc9,t11-CLA和NS-398＋200μmol／L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的侵袭有明显的抑制作用,穿过膜的细胞数分别为48．7±1．5（F=14．309,P=0．000）和43．7±4．0（F=19．005,P=0．000）;NS-398＋200μmol／L c9,t11-CLA组能显著降低SGC-7901细胞对基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和基质胶的黏附作用,所测吸光度值（A值）分别为0．052±0．011,0．058±0．008（F=3．063,P=0．021）和0．042±0．004（F=6．692,P=0．001;F=11．999,P=0．000）;NS-398＋200ixmol／L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的趋向运动能力无明显的抑制作用（F=1．380,P=0．276）,其中NS-398＋2001xmol／L c9,t11-CLA组细胞数为26．6±3．4。结论 c9,t11-CLA具有抑制SGC-7901细胞体外侵袭能力、黏附能力和趋向运动能力,这种抑制作用可能与COX-2途径有关。