实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的评价与应用

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的临床应用价值。方法经培养鉴定的70例已知细菌中22例为MRSA,48例为非MRSA,对已知细菌用实时荧光定量PCR进行检测,了解该方法的特异性和敏感性。对临床88例医护人员和患者的鼻拭子进行实时荧光定量PCR检测,了解医院内MRSA的携带情况。结果培养为MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为MRSA,敏感性为100%;培养为非MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为非MRSA,特异性为100%。实时荧光定量PCR检测MRSA的敏感性可确定为1×103cfu/mL。48例患者的鼻拭子mecA耐药基因阳性26例,金黄色葡萄球菌阳性28例,两者同时阳性(即为MRSA)20例,MRSA阳性检出率为41.6%;40例医护人员鼻拭子mecA耐药基因阳性12例,金黄色葡萄球菌阳性13例,两者同时阳性(即为MRSA)9例,MRSA阳性检出率为22.5%。结论实时荧光定量PCR可用于临床对MRSA的快速检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的评估实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)MecA耐药基因的价值。方法选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法的建立和评价

目的建立实时荧光PCR快速筛查耐甲氧西林葡萄球菌株和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株的方法。方法以耐甲氧西林mecA基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中耐甲氧西林葡萄球菌的实时荧光PCR方法,结合对金黄色葡萄球菌的特异性NUC基因进行实时荧光检测,可鉴定是否为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株。以纸片扩散法作为对照方法,对所建立的实时荧光PCR检测方法检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法的整个检测过程只需要1.5h;对22例临床样本进行检测,所建立的荧光PCR方法比纸片法多检出2例耐甲氧西林菌株;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测结果一致。结论本研究建立的实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法不仅能实现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速检测,更可能为指导临床用药提供有价值的参考。     

多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌

目的：应用多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），利于迅速的诊断和治疗。方法：采用QiaAmpDNABlood MiniKit，从血培养瓶、尿液、穿刺液的肉汤增菌液、脓汁、痰、阴道及子宫颈分泌物直接迅速提取制备模板DNA：通过多重PCR技术扩增标本的meca基因和葡萄球菌16SrRNA基因。结果：287例葡萄球菌感染的临床标本中，金黄色葡萄球菌的meca基因阳性率为54．4％（55／101），凝固酶阴性葡萄球菌meca基因阳性率为58．6％（109／186）。从模板DNA制备到多重PCR产物的检测不到4h。结论：建立的基于DNA分离和多重PCR检测MRS的技术具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA提取方法的改进

目的研究适用于PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的核酸提取方法。方法 MRSA在不同孵育条件下分别经含溶菌酶、溶葡萄球菌酶或chelex100R的裂解液裂解获得DNA,用PCR法检测目的基因。结果同时使用溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R裂解得到的DNA,在用PCR法检测mecA基因时,获得的循环阈值(Ct值)明显低于其他组分的裂解液。采用56℃一步法孵育裂解细菌的效果,与37、56℃二步法比较,差异无统计学意义(P0.05),但简化了步骤。结论含溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R等的裂解液同时与细菌于56℃孵育30min的方法,是获取MRSA细菌DNA既便捷又高效的方法,可以立即用于下一步PCR,为PCR法快速检测临床MRSA感染奠定了基础。     

错配PCR对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecI基因点突变的分析

目的建立用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)上mecI常见突变位点的错配聚合酶链反应(PCR),并用该方法分析上海地区分离MRSA中mecI G→T突变的发生情况。方法用头孢西丁纸片扩散法、mecA基因PCR法检测MRSA,用琼脂稀释法检测细菌的最低抑菌浓度(MIC),用PCR检测mecI基因,建立错配PCR并用20株mecI基因和mec启动子区分析清楚的菌株对该方法进行评价,用错配PCR分析111株MRSA中mecI基因的突变情况。结果111株mecI阳性的MRSA中,mecI43位突变的5株,mecI202位突变的102株,另有4株MRSA的mecI43位和202位碱基均无突变。结论就其简便易行和准确性而言,错配PCR可用于检测mecI上已知的突变。     

金黄色葡萄球菌的药敏表型和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型

目的研究从临床标本中分离的金黄色葡萄球菌（SA）的耐药性、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的发生率及其葡萄球菌盒式染体色mec（SCCmec）基因分型。方法采用纸片琼脂扩散法进行SA耐药性检测及MRSA测定,应用多重聚合酶链反应（PCR）进行SCCmec各基因型及PV杀白细胞素（PVL）基因型的检测。结果 102株SA中检出39株MRSA,检出率为38.2%（39/102）。甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）对克林霉素、复方磺胺甲口恶唑、四环素3种抗菌药物耐药率较高,分别为39.7%、31.7%、22.2%;对庆大霉素及喹诺酮类耐药率较低,为6.3%~14.3%。而MRSA对克林霉素、β-内酰胺类抗菌药物100%耐药,对其他药物表现为多重耐药。未检出万古霉素耐药菌株。MRSA菌株的SCCmec基因型以SCCmecⅢ型为主,占71.2%,SCCmecⅣa占10.3%,未检测出PVL基因。结论临床分离的SA中,MRSA耐药率较MSSA高且表现为多重耐药,其SCCmec基因分型主要表现为SCCmecⅢ型,其次是SCCmecⅣa。     

错配PCR对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecI基因点突变的分析

目的建立用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）上mecI常见突变位点的错配聚合酶链反应（PCR）,并用该方法分析上海地区分离MRSA中mecI G→T突变的发生情况。方法用头孢西丁纸片扩散法、mecA基因PCR法检测MRSA,用琼脂稀释法检测细菌的最低抑菌浓度（MIC）,用PCR检测mecI基因,建立错配PCR并用20株mecI基因和mec启动子区分析清楚的菌株对该方法进行评价,用错配PCR分析111株MRSA中mecI基因的突变情况。结果111株mecI阳性的MRSA中,mecI43位突变的5株,mecI202位突变的102株,另有4株MRSA的mecI43位和202位碱基均无突变。结论就其简便易行和准确性而言,错配PCR可用于检测mecI上已知的突变。     

耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测

目的探讨沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的感染情况，流行特征，应用ＭＲＳ鉴别培养，聚合酶链反应产和的酶联检测（ＥＤ－ＰＣＲ）及常规药敏试验法。结果从７５株葡萄球菌中同耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）１０株，耐甲氧西林血浆凝固酶阴性力葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）１３株。１０株ＭＲＳＡ的血浆凝固酶型别主要集中在Ⅳ型，Ⅱ型次之，结论 沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌染较为严重（２３／７６），主要的血浆凝固酶     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测方法的比较

目的 筛选出快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcous aureus,MRSA)的实验方法.方法 从天津医科大学附属肿瘤医院细菌室菌库中提取源自肿瘤患者感染的44株金黄色葡萄球菌,利用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、微量肉汤稀释法、Etest法、青霉素结合蛋白2a(penicillin-binding protein 2a,PBP2a)乳胶凝集法5种表型检测MRSA方法进行检测,并与PCR方法进行比较.结果 PCR法检测mecA基因,确定MRSA 36株;以PCR作为金标准,苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量肉汤稀释法检测出MRSA均为32株,敏感度和特异度均为88.9%和100%;E试验检测出MRSA为33株,敏感度与特异度分别为88.9%、87.5%;PBP2a乳胶凝集法检测出MRSA 29株,敏感度与特异度分别为80.5%、100%.结论 PBP2a乳胶凝集法比上述试验报告周期缩短24 h,是一种快速、简便、特异度好且便于临床试验室推广开展的检测MRSA方法.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行病学调查

目的了解MRSA的耐药性及分子流行病学特点。方法采用纸片扩散法检测住院患者分离的160株MRSA的耐药性;采用随机引物(AP)-PCR法对其中的36株MRSA作同源性分析。结果160株MRSA对万古霉素、替考拉宁和复方磺胺甲噁唑的敏感率分别为100%、100%和95%;对红霉素、庆大霉素和左氧氟沙星的耐药率分别为97.5%、87%和59%;左氧氟沙星的中介率为26%。36株MRSA的AP-PCR图谱有10种类型(A～J型),主要型别为A型12株、B型7株及C型6株,ICU的25株,分别为A型10株、B型6株、C型3株、D型3株及F、I、J各1株。结论医院获得性MRSA是多重耐药菌,ICU的MRSA菌株主要基因型为A、B型。     

金黄色葡萄球菌的药敏表型和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型

目的研究从临床标本中分离的金黄色葡萄球菌(SA)的耐药性、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的发生率及其葡萄球菌盒式染体色mec(SCCmec)基因分型。方法采用纸片琼脂扩散法进行SA耐药性检测及MRSA测定,应用多重聚合酶链反应(PCR)进行SCCmec各基因型及PV杀白细胞素(PVL)基因型的检测。结果 102株SA中检出39株MRSA,检出率为38.2%(39/102)。甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)对克林霉素、复方磺胺甲口恶唑、四环素3种抗菌药物耐药率较高,分别为39.7%、31.7%、22.2%;对庆大霉素及喹诺酮类耐药率较低,为6.3%~14.3%。而MRSA对克林霉素、β-内酰胺类抗菌药物100%耐药,对其他药物表现为多重耐药。未检出万古霉素耐药菌株。MRSA菌株的SCCmec基因型以SCCmecⅢ型为主,占71.2%,SCCmecⅣa占10.3%,未检测出PVL基因。结论临床分离的SA中,MRSA耐药率较MSSA高且表现为多重耐药,其SCCmec基因分型主要表现为SCCmecⅢ型,其次是SCCmecⅣa。     

一种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的评价胶体金法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)临床应用价值。方法采用头孢西丁纸片扩散法、PCR扩增mecA基因和胶体金法对临床分离的150株金黄色葡萄球菌(100株MRSA和50株MSSA)、68株溶血葡萄球菌(58株MRSH和10株MSSH)、135株表皮葡萄球菌(97株MRSE和38株MSSE)进行检测并作比较。结果 MRSA、MSSA、MRSE、MSSE、MSSH三种方法检测结果一致。58株MRSH中6株胶体金法检测阴性。结论胶体金法可作为MRSA简便而准确的检测方法,同时也可分析MRCNS。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床耐药性分析

目的 为预防和控制医院感染的发生,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布和耐药性进行分析.方法 使用ATB细菌鉴定分析仪进行细菌鉴定,用纸片扩散法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,药敏试验用K-B法.结果 在各临床科室中,由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起的医院感染,ICU的比例最高,下呼吸道是最常见的感染部位,52株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对多种抗菌药物耐药,没有发现耐万古霉素菌株.结论 由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起的医院感染以ICU病人最多见,以下呼吸道感染为主,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌除对万古霉素敏感外对多种抗菌药物耐药.因此,临床医生要合理使用抗菌药物.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速显色检测及评价

目前,临床上检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)主要有两大类方法:一类是对MRSA的表型检测;另一类是对MRSA的m ecA基因检则。我们根据金黄色葡萄球菌代谢特点,参考文献[1]探讨了刃天青和硝酸钾还原2种M IC快速显色法,结果如下。1材料与方法1.1试剂刃天青钠盐、N-萘基-茶碱乙烯     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价

摘要：目的：对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的可靠性进行评估。 方法：用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率。 结果：PCR法的最低检测限为5×10⁴ CFU/mL;菌数5×10⁶和5×10⁴ CFU/mL标本的批内变异系数（CV）为0.81%、0.94%,批间CV为1.48%、2.03%;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100%。痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98%,血液、尿液和其他体液标本均为100%。 结论：PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用。     

金黄色葡萄球菌耐药性分析及耐甲氧西林的检测

目的 了解我院金黄色葡萄球菌多重耐药性情况 方法 采用法国生物梅里埃ATB半自动细菌分析仪ID 32STAPH试条进行细菌鉴定,药物敏感试验采用K-B法。结果 共分离出116株金黄色葡萄球菌,其中MRSA 75株占金黄色葡萄球菌的64.5％,MRSA为多重耐药,对β-内酰胺类药物均耐药。结论 金黄色葡萄球菌的耐药问题相当严重,MRSA所占比例较高     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以其多重耐药率高,致病性强,常引起院内感染的暴发流行等特性,已引起世界范围的广泛重视,寻找一种简便、快速、准确的检测方法,对于控制院内感染,积极救治患者有重要意义。本文概述了MRSA的一些特性以及近年来检测MRSA的方法,可望有助于充分认识MRSA以及选择准确检测MRSA的方法。