脱细胞异体真皮基质与人脂肪干细胞的生物相容性

背景：脱细胞异体真皮基质具有优良的生物相容性和组织细胞诱导功能。 目的：评价人脂肪干细胞与脱细胞异体真皮基质的生物相容性。 方法：取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离脂肪干细胞,并行原代与传代培养,传至第3代,将细胞与脱细胞异体真皮基质联合体外培养3,7 d,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架材料上的黏附、生长及增殖情况,并计算细胞在材料上的黏附率;XTT比色法检测细胞的生长增殖情况。 结果与结论：脂肪干细胞在支架材料上分布均匀,24 h内细胞开始伸展、黏附,二三天完全伸展变形,以梭形为主,呈网状排列;随着培养时间延长,支架上的细胞逐渐增多;人脂肪干细胞细胞与脱细胞异体真皮基质混合培养后平均黏附率为95.03%,并保持正常的生长增殖速度,表明支架对细胞具有良好的黏附性;脱细胞异体真皮基质材料与人脂肪干细胞复合后相容性良好。     

异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质，经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架，它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织，经临床应用证实，异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性，现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

异体脱细胞真皮基质的研究进展

异体脱细胞真皮基质是天然真皮的脱细胞基质,经过冷冻干燥形成的三维支架结构。作为一种新兴的生物工程支架,它通过空间诱导和组织替代作用修复组织缺损。由于其源于人体正常组织,经临床应用证实,异体脱细胞真皮基质拥有优秀的组织相容性,现已广泛地应用于临床各科的创伤修复。     

戊二醛交联优化脱细胞真皮基质的生物相容性

目的 通过体内包埋实验将优化的脱细胞真皮基质(ADM)与成纤维细胞(FB)体外培养,探讨是否具有生物相容性. 方法 用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到大鼠ADM,用低浓度戊二醛交联ADM,未交联A组(0min)作为对照,根据交联时间不同分成B组(10min)、C组(15min)和D组(30min).通过大鼠体内包埋实验对比各组ADM 物理性状、包埋后面积、炎性反应、浸润生长的FB和毛细血管数目,选择出最佳交联时间.制备优化的人ADM,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ADM的细胞毒性;人FB与ADM复合培养检测其细胞相容性,用免疫组织化学和透射电镜观察FB的生长和增殖情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达. 结果 大鼠体内包埋实验显示,4周取材,未交联组不易触及移植物,植入物和周围的软组织基本融合难以分开;未交联组ADM的面积较包埋前缩小;未交联组ADM内有少量炎性细胞,胶原纤维嗜酸性弱;交联组ADM内未见炎性细胞,浸润生长的FB数目、血管数目与戊二醛交联时间的单因素相关性分析呈负相关;最佳的交联时间为10min.体外培养显示,优化ADM的细胞毒性反应0～1级;人FB能够很好地在优化的ADM表面贴附、生长和增殖;ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低. 结论 高渗盐-NaOH消蚀法制备ADM,工艺简单、成本低、生物相容性好,可以提供细胞生长的空间,并可在细胞间转导通讯和信号,下调细胞外基质代谢系统.     

脱细胞胶原基质双层材料与骨髓间充质干细胞的生物相容性研究

目的 对脱细胞胶原基质双层材料和骨髓间充质干细胞（BMSCs）间的生物相容性进行研究.方法 将BMSCs与脱细胞胶原基质双层材料共培养作为实验组,单独培养的BMSCs为对照组,对BMSCs的生长和增殖情况进行研究,扫描电镜下观察细胞在材料上的贴附生长情况,并采用CCK-8法测定细胞活性.结果 扫描电镜结果显示BMSCs在脱细胞胶原基质双层材料上生长良好.CCK-8法测得的BMSCs与脱细胞胶原基质双层材料共培养的生长曲线显示,实验组与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 脱细胞胶原基质双层材料具有较好的生物相容性,这为脱细胞胶原基质组织工程支架双层材料下阶段在体内动物中的应用提供了科学依据.     

新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究

目的探索新型脱细胞半月板细胞外基质(d MECM)的制备方法,并对其细胞相容性进行研究。方法无菌条件下收集新鲜的猪半月板组织,切碎,采用湿法粉碎、差速离心的方法制备dM ECM生物材料。通过天狼猩红、甲苯胺蓝染色方法分别比较天然半月板与dM ECM中胶原以及糖胺聚糖含量的区别;采用Hoechst 33258荧光染色法观察脱细胞后dM ECM中DNA残留情况。将P3代的兔内侧半月板细胞种植在铺有dM ECM的盖玻片上,体外培养7 d后行扫描电镜检测其细胞相容性。结果本实验制备的dM ECM天狼猩红、甲苯胺蓝染色均呈阳性,并且与天然半月板染色类似;dM ECM行Hoechst33258染色呈阴性;扫描电镜结果显示种植于d MECM表面上的半月板细胞黏附紧密,可见大量细胞ECM的分泌。结论本实验制备的dM ECM可以很好地保留天然半月板ECM成分,有效地去除DNA物质,并且具有良好的生物相容性,是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料。     

异种脱细胞角膜基质囊袋移植的生物相容性研究

目的探讨脱细胞猪角膜基质移植入兔角膜囊袋后的生物学反应。方法猪角膜通过不同方式去除细胞及免疫源性成分，保留角膜组织基质的弹力纤维及胶原纤维，将其切取为直径为4mm的植片，植入兔角膜囊袋内，在不同时间点观察生物材料在角膜内生物学反应。结果材料植入兔角膜囊袋3个月，生物相容性良好，材料逐渐降解，材料内有胶原和角膜基质细胞长人。结论新型可降解角膜基质材料植入后未见兔角膜有明显的炎症反应，材料的组织相容性好，可作为组织工程角膜的支架材料。     

异体脱细胞真皮基质作为组织工程皮肤真皮支架的可行性*

背景：组织工程皮肤是目前研究皮肤损伤修复重建的重要手段之一,异体脱细胞真皮基质不存在免疫原性,在异体移植时不会发生排斥反应,是比较理想的真皮替代物。 目的：观察异体脱细胞真皮基质的组织相容性。 方法：以正常人体真皮组织作为对照,通过体外、体内细胞毒性实验检测异体脱细胞真皮基质的组织相容性,以膨胀度、饱和含水量及生物力学分析检测异体脱细胞真皮基质的亲水性及机械性能。 结果与结论：真皮基质中未见任何细胞成分,其网孔直径介于100~180 μm 之间。脱细胞真皮基质组饱和含水量为(69.6±3.97)%,膨胀度2.30±0.42,最大断裂力为(3.082±0.046) N,与对照组相比,差异无显著性意义(P > 0.05)。体内外细胞毒性检测,未见明显细胞生长抑制及免疫排斥反应。提示异体脱细胞真皮基质机械性能接近正常皮肤,组织相容性好,免疫排斥反应小,是构建组织工程皮肤理想的真皮材料。     

脱细胞真皮基质水凝胶的制备及生物学评价

背景：最近脱细胞真皮基质水凝胶因其可注射性和能填充不规则空间,在组织填充与修复中有着广阔的应用前景,而细胞相容性和生物相容性是组织修复的关键,探究脱细胞真皮基质水凝胶的相容性具有重要意义。目的：构建一种脱细胞真皮基质水凝胶,用于组织填充和修复。方法：制备可注射型脱细胞真皮基质水凝胶,扫描电镜下观察其微观形貌。将质量浓度8,10 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别与骨髓间充质干细胞共培养,检测细胞增殖与细胞相容性。将蛋白质量浓度0.25,0.5 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别注射至同一SD大鼠背部皮下不同部位,术后2,4周,观察水凝胶降解情况。将蛋白质量浓度1,1.5,2 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别注射至同一SD大鼠背部皮下不同部位,术后8,16周,观察水凝胶降解情况,并进行组织学分析。结果与结论：(1)扫描电镜下可见,脱细胞真皮基质水凝胶呈现一种不规则随机走向的多孔纤维结构,孔径大小不一。(2)共培养1,3,5 d后,两种浓度的水凝胶对骨髓间充质干细胞的增殖无影响;共培养1,2,3 d后的Live/Dead染色显示,两种浓度的水凝胶对骨髓间充质干细胞的增殖无影响,但水凝胶上的细胞...     

人新型脱细胞真皮制备及性状分析

BACKGROUND: Early vascularization is crucial for wound healing. A high-porosity, macrovoid allogeneic skin leads to the rapid vascularization and cellular infiltration. OBJECTIVE: To obtain a new allogeneic skin product with high porosity, good cell permeability and good histocompatibility using an improved preparation method of human acellular dermal matrix. METHODS: Cell components of healthy human skins were removed by the improved method and the traditional method, respectively. The improved method was to remove the subcutaneous fat, eliminate the epidermis (1 mol/L NaCl solution at 37 ℃ for 24 hours) followed by shaking processing (2% NaOH at 45 ℃ for 4 hours), and then, the solution was neutralized with PBS rinsing, dried and stored at 4 ℃ for standby. We detected the porosity and degradation time in vitro of the acellular dermal matrices prepared by two methods and the cytotoxicity of the material infiltration liquid on the adipose-derived stem cells. Hematoxylin-eosin staining was used for the detection of the cell residual, the integrity of collagen and cell biocompatibility. Scanning electron microscopy was used to detect the pore size. RESULTS AND CONCLUSION: Both the two methods could completely remove the cell components, and maintain the integrity of the collagen scaffold. The porosity of acellular dermal matrix with the improved method was (93.22±0.99)%, which was significantly higher than that with the traditional method [(74.28±2.06)%; P < 0.001]. However, there was no significant difference in in vitro degradation time between the two kinds of acellular dermal matrices (P > 0.05). No obvious cytotoxicity of the acellular dermal matrix prepared with the improved method was detected. At 3-7 days of co-culture, the adipose-derived stem cells cultured on the acellular dermal matrix prepared with the improved method could penetrate the basement membrane to the deep dermis, while there was no obvious cell invasion and growth in the deep dermis prepared by the traditional method. Compared with the traditional method, the improved method is more suitable for cell infiltration and growth with higher porosity and larger pore size.       

骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质支架的生物相容性

背景：国内外许多研究者一直寻找理想的种子细胞与合适的支架材料复合,试图模拟接近正常生理功能的组织工程化尿路替代物。 目的：探讨骨髓间充质干细胞与兔膀胱脱细胞基质支架的生物相容性。 方法：采用密度梯度离心法分离培养兔骨髓间充质干细胞,将第3代兔骨髓间充质干细胞接种到兔膀胱脱细胞基质上进行复合培养,每天进行细胞计数,连续12 d,绘制细胞生长曲线,以单独培养骨髓间充质干细胞为对照组。 结果与结论：骨髓间充质干细胞成功种植到膀胱脱细胞基质上,倒置显微镜下可见骨髓间充质干细胞从膀胱脱细胞基质边缘爬出,膀胱脱细胞基质周围有大量长梭形骨髓间充质干细胞生长。接种5 d内,两组细胞均呈现出平缓生长的状态,接种6-9 d,生长曲线逐渐变得陡峭,细胞呈倍数状态进行分裂生长,速度较快,接种10-12 d,再次趋于平缓状态。两组细胞生长曲线基本重合,可推断兔骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质生物相容性良好。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

新型纳米化仿生骨基质与羊脂肪基质细胞复合培养的生物相容性**☆

背景：仿生策略研制骨组织生物支架已成为当今研发生物替代品的关键环节,如何模仿天然骨的成分和结构特征以适应细胞生长是仿生研制骨基质的重要内容。 目的：观察纳米级β-磷酸三钙/壳聚糖/聚己内酯(nβ-TCP-CS-PCL)的细胞及组织相容性,评估其生物安全性。 方法：基于三维图像重建辅助研制纳米化仿生骨基质,羊自体脂肪基质细胞分离和成骨诱导培养,进行复合培养：实验组：nβ-TCP-CS-PCL+凝胶+重组人骨形态发生蛋白2+脂肪基质细胞;对照组：凝胶+重组人骨形态发生蛋白2+脂肪基质细胞。 结果与结论：实验组细胞生长旺盛、细胞外基质丰富,细胞增殖活力、碱性磷酸酶及骨钙素水平均高于对照组(P < 0.05),新骨发育趋于成熟,未见炎性反应。提示纳米级nβ-TCP-CS-PCL具备良好的生物相容性,是一种理想的骨组织工程支架。     

去细胞真皮基质的黏弹性研究

目的通过对比分析皮肤的物理参数值评价去细胞真皮基质的黏弹性性质。方法将清洁级日本大耳白兔背部皮肤进行3种不同的创面处理,分别为薄自体皮加上去细胞真皮基质移植到创面组(PADM组)、薄自体皮原位回植组(TS组)、正常皮肤真皮组(NS组)。对该3组皮片进行应力-应变关系的实验。结果从PADM、TS、NS 3组皮肤的应力松弛曲线、蠕变曲线和应力-应变关系曲线可知,在一定应力下,PADM组的应变最小,NS组的应变最大,TS组居于两者之间。结论皮肤的黏弹性力学模型是4参量黏弹性模型。用去细胞真皮基质作为皮肤替代物移植到皮肤创面后,该植皮的弹性较差,变形后的恢复能力也较差,与临床结果相符合。     

去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞的相容性

背景：去细胞肌肉生物支架联合人脐带间充质干细胞移植将是治疗脊髓损伤的一项重要措施。但两者是否具有良好的相容性,人脐带间充质干细胞能否在去细胞肌肉生物支架中长期存活并均匀分布,尚未得到证实。 目的：观察大鼠去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞的相容性。 方法：改良化学法制备大鼠去细胞肌肉生物支架,将第3代人脐带间充质干细胞Hoechest33342荧光标记后分为3组进行实验,细胞+支架组、细胞+支架大鼠体内组和单纯细胞组。分别应用苏木精-伊红、Masson染色方法观察去细胞肌肉生物支架的组织形态,以荧光倒置相差显微镜和扫描电镜观察人脐带间充质干细胞的吸附和生长情况。 结果与结论：人脐带间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架充分附着,生长增殖活跃,细胞在支架内分布均匀。细胞+支架体内组与细胞+支架组相比在移植后1-7 d人脐带间充质干细胞数量差异无显著性意义(P > 0.05),在移植14 d细胞+支架体内组人脐带间充质干细胞数量大于细胞+支架组(P < 0.05)。提示去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞有较好的相容性,体内环境更有利于细胞增殖和两者融合。     

维甲酸对成纤维细胞及脂肪源干细胞成骨诱导的影响

目的　探究维甲酸（RA）对乳鼠真皮成纤维细胞（DFB）及脂肪源干细胞（ADSCs）成骨诱导分化的影响。 方法　分别离体培养5~7 d龄乳鼠DFB及ADSCs。对DFB进行波形蛋白的免疫荧光鉴定,对ADSCs进行成骨、成脂肪诱导并做表面标记物鉴定。用RA及传统成骨诱导液分别对两类细胞进行成骨诱导2周,茜素红染色检测细胞内钙结节的形成,酶标仪检测细胞诱导后ALP 的OD值。 结果　两类细胞在常规成骨诱导及RA诱导成骨后,均有钙结节形成。传统成骨诱导与RA成骨诱导组与各自对照组相比,ALP活性均升高。在DFB组中,RA诱导的ALP活性比传统成骨诱导高,而在ADSCs组中,结果相反。 结论　RA可以促进DFB及ADSCs的成骨分化,并且因细胞种类不同而显著效果不同。