基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉（A.ficuum)AS3.324的植酸酶基因（phyA)，克隆到pPIC9K中，得到重组载体pPIC9K/phyA Ⅱ，分别用限制性内切酶Dra I和Bpul 102 I线性化，用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)GS115中，构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明，两者的酶学性质无显著差异。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉 (A .ficuum)AS3 .3 2 4的植酸酶基因 (phyA) ,克隆到pPIC9K中 ,得到重组载体pPIC9K/phyAⅡ ,分别用限制性内切酶DraⅠ和Bpu1 1 0 2Ⅰ线性化 ,用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS1 1 5 中 ,构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明 ,两者的酶学性质无显著差异     

一株高产细胞表面植酸酶酵母的产酶性质

对一株高产细胞表面植酸酶酵母突变株WZ 4菌的细胞植酸酶性质进行了研究,结果表明:该酶的最适pH为5,最适温度为50℃,Km为0.666mmol/L。此外,WZ 4菌产植酸酶受控于培养基中的磷的质量浓度,最大产酶磷的质量浓度为50mg/L,当磷的质量浓度大于0.1g/L时产酶被完全阻遏。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨．采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化，电泳显示为单一谱带，该酶的相对分子质量为63000，研究显示其性质为：37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0．31mmol／L，该酶最适pH为5．5，最适作用温度为55℃，研究了金属离子对植酸酶活力的影响．     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨.采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化,电泳显示为单一谱带,该酶的相对分子质量为63000.研究显示其性质为:37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0 31mmol/L,该酶最适pH为5 5,最适作用温度为55℃.研究了金属离子对植酸酶活力的影响.     

产植酸酶菌株的筛选

从２０份天然样品中筛选出２０余株发酵液植酸酶活力超过３０ＩＵ／ｍＬ的胞外植酸酶产生菌。经过复筛,发现产植酸酶活力大于１００ＩＵ／ｍＬ的菌株８株,包括霉菌４株,酵母４株。酵母ＹＰ９０１、ＹＰ１４４、ＹＰ１３３发酵液活力分别达到２８４、２６５、２６５ＩＵ／ｍＬ;霉菌ＭＰ１１３的发酵液酶少了高达１８９ＩＵ／ｍＬ。通过ＰＨ２２．５和ＰＨ５．５处酶活力比较确定,酵母分泌的植酸酶为ｐｈｙＢ型,霉菌分泌的植酸酶     

高产植酸酶酵母Candida Krusei WZ-001的等离子束诱变选育

从土壤中筛选得到的 1株高产植酸酶酵母菌CandidaKruseiWZ 0 0 1 ,利用等离子诱变方法对这一菌株进行诱变 ,获得 1株植酸酶高产突变株 ,其酶活性比出发菌株提高了 98%。比较了N+、H+、Zn2 +3种离子注入菌体的诱变效果 ,实验结果表明N+离子注入效果最佳 ,注入最佳剂量为 5 0× 1 0 13N+/cm2 。     

制麦过程中添加肌醇六磷酸酯酶对麦芽的影响

研究了在制麦过程中浸麦阶段添加外源植酸酶,对植酸浓度、植酸酶、α-淀粉酶、蛋白酶以及β-葡聚糖酶活力的影响以及麦芽浸出率的变化.结果表明,外源添加的植酸酶随浸麦水进入大麦分解植酸,由3.20 mg/mL降低到2.35 mg/mL.溶解了淀粉及蛋白质,使植酸酶活力由1.25 U/g提高到2.66 U/g,α-淀粉酶活力由...     

高产植酸酶酵母Candida Krusei WZ—001的等离子束诱变选育

从土壤中筛选得到的 1株高产植酸酶酵母菌CandidaKruseiWZ 0 0 1 ,利用等离子诱变方法对这一菌株进行诱变 ,获得 1株植酸酶高产突变株 ,其酶活性比出发菌株提高了 98%。比较了N+、H+、Zn2 +3种离子注入菌体的诱变效果 ,实验结果表明N+离子注入效果最佳 ,注入最佳剂量为 5 0× 1 0 13N+/cm2 。     

克鲁斯假丝酵母植酸酶对植物性饲料中植酸的脱磷作用

在植物性饲料中，磷主要以植酸磷的形式存在，不能被单胃动物有效利用。在饲料中添加植酸酶，水解植酸脱磷，可以提高动物对磷的利用率。本文通过正交试验，确定了克鲁斯假丝酵母(Qandia Krusei)WZ-001植酸酶水解豆粕和麸皮中植酸脱磷的最适作用条件；并模拟动物胃肠pH环境，对克鲁斯假丝酵母WZ-001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明：WZ-001植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4．89倍，植酸水解率为67％，均高于酶活相同的2种商品酶。     

克鲁斯假丝酵母植酸酶对植物性饲料中植酸的脱磷作用

在植物性饲料中,磷主要以植酸磷的形式存在,不能被单胃动物有效利用。在饲料中添加植酸酶,水解植酸脱磷,可以提高动物对磷的利用率。本文通过正交试验,确定了克鲁斯假丝酵母(CandidaKrusei)WZ 001植酸酶水解豆粕和麸皮中植酸脱磷的最适作用条件;并模拟动物胃肠pH环境,对克鲁斯假丝酵母WZ 001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明:WZ 001植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4.89倍,植酸水解率为67%,均高于酶活相同的2种商品酶。     

克鲁斯假丝酵母植酸酶的筛选及其发酵条件

筛选出了一株高植酸酶活性的酵母菌株 ,鉴定为克鲁斯假丝酵母C .KruseiWZ 0 0 1。该植酸酶定位于细胞壁上 ,为PHYA型植酸酶。最适作用条件 :pH分别为 3.2和 4 .72 ,温度为 5 5℃ ,保持 6 0 %的酶活性 10min。C .KruseiWZ 0 0 1植酸酶有广泛的底物特异性 ,一定浓度的无机磷对其植酸酶活性有抑制作用。在优化的发酵培养基上 ,最高发酵液酶活性为 1.6 μmol/mL ,干细胞植酸酶活性为 2 80 μmol/ g。