内质网应激参与蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导大鼠脂肪性肝纤维化的发生与恢复

目的 探讨内质网应激在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用及饮食控制对脂肪性肝纤维化恢复的影响.方法 蛋氨酸-胆碱缺乏饮食 (MCDD) 喂养10周诱导非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型,恢复组于第9周开始将MCDD转变为蛋氨酸-胆碱对照饮食 (MCCD) 喂养2周.纤维化和炎症程度采用组织病理染色方法检测,纤维化和炎症相关因子采用Western blot和实时定量聚合酶链反应 (RT-PCR) 方法检测,内质网应激标记物半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (caspase)12、7和葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 采用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法检测.计量资料采用统计分析软件SPSS13.0中的ANOVA程序进行单因素方差分析或q检验,并用LSD进行两两比较.结果 饮食由MCDD转变为MCCD后,组织病理学结果显示肝细胞脂肪沉积及炎症反应明显减轻,伴随着活化的肝星状细胞和枯否细胞减少,肝纤维化程度明显减轻.模型组大鼠肝细胞凋亡数为每5个高倍视野 (68.2±15.9) 个,明显高于正常组 (40.3±8.3) 个,P<0.05;肝细胞增殖/凋亡比值 (0.10±0.03) 明显低于正常组(0.19±0.03),P<0.01.恢复组大鼠肝细胞凋亡数为每5个高倍视野 (48.0±6.5)个,明显低于模型组 (68.2±15.9) 个,P<0.05;增殖数为每5个高倍视野 (17.2±4.4)个,明显高于模型组 (7.5±3.0) 个,P<0.01;肝细胞增殖/凋亡比值 (0.41±0.09) 也明显高于模型组 (0.10±0.03),P<0.01.模型组大鼠肝组织GRP78、caspase12、caspase7和cleaved caspase7蛋白质和mRNA表达均明显高于正常组(P<0.05或P<0.01),恢复组均明显低于模型组 (P<0.05或P<0.01).结论 大鼠饮食由MCDD转变为MCCD后,肝脏的炎症和纤维化程度迅速逆转,提示饮食摄取对于控制肝脏脂肪沉积和病理改变至关重要,且内质网应激参与了这一过程,阻断内质网应激尤其是Caspase12通路也许有助于非酒精性脂肪性肝纤维化的临床治疗.     

内质网应激与肝脏疾病研究进展

内质网应激是一种重要的细胞自我防御机制,内质网应激时,首先启动生存途径,但是持续的内质网应激将启动细胞凋亡途径.肝细胞内有大量的内质网,许多肝脏疾病均与内质网应激及其介导的细胞凋亡有关,如病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、药物性肝病、急性肝衰竭、肝癌等,针对内质网应激途径来进行凋亡保护或促进凋亡以寻找新靶点药物来治疗肝脏疾病在理论上成为可能.本文将从内质网应激反应的生存途径、凋亡途径,内质网应激及其介导的细胞凋亡在肝脏疾病发病机制中的作用以及在肝病干预治疗上的意义等方面进行综述.     

内质网应激凋亡通路中Caspase12激活介导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡

目的:观察内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活性变化,探讨其在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的可能作用.方法:将Wistar大鼠随机分为正常4 wk组、正常8 wk组、肝纤维化4 wk组和肝纤维化8 wk组.皮下注射40%CCl_4花生油溶液诱导肝纤维化形成,剂量0.3 mL/100 g体质量,2次/wk.肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12基因水平的表达通过实时荧光定量PCR技术测定;GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达采用蛋白质免疫印迹法检测;肝细胞凋亡通过TUNEL法测定.结果:肝纤维化4 wk组大鼠肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12 mRNA表达显著高于正常4 wk组大鼠;肝纤维化8 wk时,肝组织中GRP78、GRP94、Caspase12 mRNA的表达较正常8 wk组显著增加.通过Western blot对各指标蛋白水平的检测发现,肝纤维化4 wk时大鼠肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达较正常4 wk组大鼠显著增加;肝纤维化8 wk时,肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12、活性Caspase12蛋白的表达仍保持在高水平,但与肝纤维化4 wk时比较无显著差异.细胞凋亡检测发现,与正常组大鼠比较,肝纤维化4 wk及8 wk组大鼠肝细胞凋亡均明显升高.结论:内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活化可能介导了肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的发生.     

尿石素A预处理对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨尿石素A(Uro-A)对肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠模型的保护作用。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Uro-A低剂量组(1 mg/kg)和Uro-A高剂量组(3 mg/kg),每组10只。造模前Uro-A低剂量和高剂量组每天灌胃药物1次,持续5 d。动物麻醉后造模,恢复血流后6 h检测血清中ALT、AST与乳酸脱氢酶(LDH)的含量,ELISA法检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、IL-1β、IL-6和TNFα含量,观察肝脏病理损伤与肝细胞凋亡情况,Western Blot法检测肝脏中内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、下游应激转录因子(CHOP)和凋亡蛋白家族(Caspase-12)的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 Uro-A高剂量组ALT、AST、LDH、MDA、CAT、IL-1β、IL-6、TNFα、CHOP、GRP78、Caspase-12水平及凋亡率均较模型组降低,SOD含量较模型组升高,差异均有统计学意义(P值均0.05)。模型组肝脏结构破坏严重,阳性率90%,Uro-A高剂量组肝脏结构完好,未见明显组织增生与炎性细胞增多,阴性率80%。与Uro-A高剂量组相比,Uro-A低剂量组ALT、AST、LDH水平和细胞凋亡率均显著升高(P值均0.05)。结论 Uro-A预处理可降低大鼠肝脏缺血再灌注造成的损伤,减少氧化损伤与炎症因子的释放,其机制与通过抑制内质网应激通路减少肝细胞的凋亡有关。     

葡萄糖调节蛋白78在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用

葡萄糖调节蛋白78(GRP78)作为一个重要的内质网分子伴侣,在蛋白质的折叠、转运和内质网应激反应过程中发挥重要作用。GRP78还存在于肿瘤细胞、内皮细胞和单核细胞的表面,可作为病毒进入宿主细胞的受体。内质网应激是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个重要的发病机制。对GRP78功能的深入挖掘,将为探索NAFLD的防御机制提供新思路。     

葡萄糖调节蛋白78在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用*

葡萄糖调节蛋白78（GRP78）作为一个重要的内质网分子伴侣,在蛋白质的折叠、转运和内质网应激反应过程中发挥重要作用。GRP78还存在于肿瘤细胞、内皮细胞和单核细胞的表面,可作为病毒进入宿主细胞的受体。内质网应激是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个重要的发病机制。对GRP78功能的深入挖掘,将为探索NAFLD的防御机制提供新思路。     

内质网应激在四氯化碳致大鼠急性肝损伤中的作用探讨

目的研究内质网应激在四氯化碳诱导的大鼠急性肝损伤中的变化规律和作用机制。方法采用四氯化碳制备大鼠急性肝损伤模型，动态测定大鼠肝脏GRP78蛋白和caspase 12酶原表达情况，测定大鼠血清ALT、AST水平、肝组织SOD活性、MDA浓度和caspase 3活性变化；采用HE染色和TUNEL法观察肝组织病理形态学和肝细胞凋亡变化。结果四氯化碳染毒后大鼠肝脏GRP78蛋白表达显著增加，caspase 12酶原表达相应减少，呈一定时间依赖方式。大鼠染毒后出现血清ALT、AST水平以及组织MDA含量显著升高，SOD活性明显下降，与对照组有显著性差异（P〈0．01）；染毒后大鼠肝组织caspase 3活性亦显著升高，病理学及TUNEL法检测结果均显示肝脏有严重损伤，大量肝细胞发生凋亡。结论四氯化碳诱导大鼠肝损伤时GRP78和caspase 12的表达变化表明发生了内质网应激反应，其变化趋势和大鼠肝细胞凋亡、病理损伤一致，这一结果提示内质网应激介导的肝细胞凋亡参与了大鼠肝损伤。     

清肝活血方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡基因表达的影响

目的:探讨清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠内质网应激反应性凋亡GRP78/Bip、GRP94、caspase-12基因和蛋白表达的影响.方法:建立大鼠慢性酒精性肝损伤复合模型, 第11周将造模大鼠按体质量和状态均衡分为模型组、清肝活血方组9.5 g/(kg·d)、清肝方组3 g/(kg·d)、活血方组6.5 g/(kg·d)和空白对照组, 每组10只. 各组每日上午仍灌胃给予乙醇混合液, 下午给予药液或生理盐水,连续给药2 wk, 末次给药1 h后称质量, 腹主动脉采血, 处死, 分离肝脏. DNA ladder法和流式细胞术对肝细胞凋亡进行定性和定量检测, RT-PCR和Western blot法检测大鼠肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达.结果:与正常组比较, 造模12 wk大鼠血清ALT和AST水平明显升高(138.3±43.3 U/Lvs 33.9±9.8 U/L, 257.4±162.3 U/L vs 119.6±28.6 U/L, P<0.01); 肝细胞发生早期凋亡改变, 总凋亡率和早期凋亡率分别达到29%和26%( P<0.01); 肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达明显增强( P<0.05或0.01). 经2 wk治疗后, 清肝活血方及拆方均能明显降低酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST水平; 抑制肝细胞凋亡, 总凋亡率和早期凋亡率分别降至8%和6%; 清肝活血方及清肝方显著降低肝组织GRP78/Bip、GRP94和caspase-12基因和蛋白表达, 与模型组比较有统计学差异( P<0.05或0.01), 而活血方组与模型组则无明显差异.结论:清肝活血方及拆方对酒精性肝损伤大鼠肝细胞凋亡均表现出较强的抑制作用, 其机制可能与下调内质网应激反应性凋亡相关基因caspase-12、GRP78/Bip和GRP94表达有关.     

小檗碱抑制内质网应激炎症通路对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的探讨

目的观察小檗碱(BBR)对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤半影区内质网应激相关炎症通路的影响。方法72只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,采用高脂饮食和链尿佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,数字抽签随机将糖尿病大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病大鼠+BBR治疗组(BBR组)、糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(MCAO组)、糖尿病大鼠MCAO+BBR治疗组(MCAO+BBR组),纳入研究每组6只。治疗组在术前48 h、24 h和术后6 h经胃灌注给予相应剂量药物。采用线拴法制备大鼠MCAO模型,进行神经缺损评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、核因子(NF)-κB p65表达情况。结果在脑缺血半影区,缺血2 h再灌注24 h后,MCAO组大鼠神经功能缺损评分(2.83±0.41)分,高于MCAO+BBR组大鼠(1.67±0.52)分(P<0.05),促炎因子TNF-α和IL-1β和内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、PERK和NF-κB p65的表达水平亦增高(P<0.05)。BBR治疗亦可降低脑缺血再灌注半影区促炎因子(TNF-α和IL-1β)和内质网应激相关炎症通路蛋白(GRP78、PERK和NF-κB p65)的表达水平。结论BBR可通过抑制内质网应激相关炎症通路降低2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的炎症反应,发挥神经保护作用。     

川芎嗪通过抑制内质网应激减轻小肠缺血再灌注损伤的研究

目的研究川芎嗪(TMP)对大鼠小肠缺血再灌注损伤及内质网应激通路的影响。方法将120只Wistar大鼠按照随机数字表法平均分为假手术组、模型组和TMP低、中、高(15、30、60 mg/kg)剂量组。造模前30 min腹腔注射给药,假手术组、模型组腹腔注射生理盐水。通过夹闭肠系膜上动脉60 min制备小肠缺血再灌注大鼠模型,再灌注2 h后,检测肠组织含水量;通过HE染色法行肠组织病理学检查并进行损伤评分(Chiu′s氏评分)、TUNEL法观察细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);ELISA法检测肠组织CRP、TNF-α、IL-1β含量;Western blot法检测内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP)及Cleved Caspase-12、Cleved Caspase-3、NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,TMP中、高剂量组大鼠肠组织含水量显著降低(P<0.05);肠系膜病变明显改善且凋亡细胞数量明显减少,Chiu′s氏评分和AI显著降低(P<0.01);肠组织CRP、TNF-α、IL-1β含量和GRP78、CHOP、Cleved Caspase-12、Cleved Caspase-3、NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论TMP能够通过抑制内质网应激相关炎症和细胞凋亡通路,对小肠缺血再灌注损伤起到保护作用。