UBE2C在结直肠癌中的研究现状与进展

世界范围内,结直肠癌（colorectal cancer,CRC）的发病率在恶性肿瘤中排名第三,其死亡率位居第四。近年来,随着人们生活水平的提高和生活方式及饮食结构的改变,CRC的发病率及死亡率呈上升趋势。尽管CRC早期诊断有所改善,但转移性CRC患者的总体5年生存率仍然很低。泛素蛋白酶体系统（ubiquitin proteasome system,UPS）是细胞质和细胞核内的一种依赖ATP的蛋白质降解途径。它通过泛素化-蛋白酶体-去泛素化机制调节其降解的蛋白质以维持体内的稳态。当调节的蛋白质失去稳定性时,会诱发癌症等疾病。泛素偶联酶（UBE2C）又名泛素结合酶10（UBH10）,它在UPS中具有重要的生物学作用,是细胞周期进展和周期蛋白降解所必需的。UBE2C在CRC患者组织中高度表达,并且与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭性、预后和放化疗敏感性相关。目前已经证实UBE2C可作为CRC诊断、预后、淋巴结转移的潜在肿瘤标志物及CRC基因治疗的新靶点。本文就近年来关于UBE2C在CRC中的研究进展加以综述。     

抑制TPD52基因表达对结直肠癌细胞凋亡及ROS含量的影响

目的:探讨抑制肿瘤蛋白D52（TPD52）基因表达对结直肠癌细胞活力、凋亡率及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的影响及机制。方法:正常结肠NCM460细胞作为对照细胞,分别用RT-PCR及Western blotting检测人结直肠癌Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞TPD52的mRNA及蛋白表达。以LipofectamineTM 2000为载体,将抑制TPD52表达的siRNA（TPD52-siRNA）及阴性对照siRNA（NC）转染HCT116细胞,转染48 h,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测各组细胞增殖相关蛋白Ki67和PCNA及凋亡相关蛋白Bax和Survivin的蛋白表达。结果:与正常结肠NCM460细胞比较,Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞中TPD52的mRNA及蛋白表达均明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。转染TPD52-siRNA的HCT116细胞TPD52的mRNA及蛋白表达均明显降低,与空白对照组和NC组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。与NC组比较,TPD52-siRNA组细胞活力明显降低,凋亡率升高,ROS含量升高,Ki67、PCNA和Survivin的蛋白表达明显降低,Bax的蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:TPD52基因表达抑制可降低结直肠癌细胞活力和诱导凋亡,机制可能与细胞内ROS水平提高及Ki67、PCNA、Survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

FHIT基因在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡抑制的相关性

Objective： To investigate the expression of fragile histidine triad （FHIT） protein in normal colorectal tissue, colorectal adenoma and colorectal cancer （CRC）, and to study the relationships between the expression of FHIT protein and the clinical pathology, the apoptosis-associated protein （Bcl-2, Bax, Survivin）, apoptosis in colorectal cancer. Methods： Tissue microarray （TMA） and immunohistochemistry SP were used to detect the expression of FHIT gene, Bcl-2, Bax and Survivin in 16 cases of the normal colorectal tissue, 16 cases of colorectal adenoma and 80 cases of the colorectal cancer. TUNEL was used to detect the apoptosis index （Al） in 80 cases of the colorectal cancer. Results： （1） The positive rates of FHIT gene expression in normal colorectal tissue, colorectal adenoma and adenocancer were 93.75%, 68.75% and 46.25% respectively. There were no significant differences in the relationships between the FHIT gene expression and histological types, the gender as well as the age （P〉0.05）. There were significant relationships between FHIT gene expression and lymph node metastasis, histological grades, Duke＇s system as well as the 5-year survival rate after operation. （2） The positive rates of Bax, Bcl-2 and Survivin in colorectal adenocancer were 72.50%, 51.25%, 77.50% respectively. The expression of FHIT gene was positively correlated with that of Bcl-2, Bax and Survivin. （3） The mean AI in FHIT negative tumors was significantly lower than that in FHIT positive tumors （P〈0.01）. Conclusion： FHIT gene may play a role in the oncogenesis and progression of colorectal cancer. The abnormal regulation of apoptosis may play an important role in the pathogenesis of colorectal cancer.     

miR-502-3p通过靶向GTPBP2基因调控结直肠癌干细胞增殖与凋亡

目的：探讨miR-502-3p通过靶向GTP结合蛋白2(GTPBP2)调控结直肠癌干细胞（CCSC）增殖、细胞周期和凋亡的分子机制。方法：利用免疫磁珠分选技术从结直肠癌细胞HCT116中分选CCSC(CD133+CD44+双阳性细胞和CD133-CD44-双阴性细胞),用qPCR法检测细胞中miR-502-3p表达水平。利用脂质体转染法分别将miR-NC、miR-502-3p、si-miR-NC、si-miR-502-3p、miR-502-3p+vector和miR-502-3p+GTPBP2转染至CD133+CD44+细胞中,记作miR-NC、miR-502-3p、si-miR-NC、si-miR-502-3p、miR-502-3p+vector和miR-502-3p+GTPBP2组。用qPCR法检测细胞中miR-502-3p、GTPBP2 mRNA表达水平,MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖率、细胞周期和凋亡率,WB法检测细胞中Ki67、CDK1、Bcl2、BAX和GTPBP2蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-502-3p与GTPBP2基因的靶向关系。结果：CD1...     

4EGI-1通过下调Bcl-2诱导K-RAS基因突变型结直肠癌细胞凋亡

目的：研究真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor4E,eIF4E)/eIF4G相互作用抑制剂4EGI-1对K-RAS基因突变型及野生型结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞HCT116和DLD1增殖和凋亡的影响,及可能的作用机制。方法 ：采用MTT法和FCM法检测不同浓度的4EGI-1对K-RAS基因突变型及野生型HCT116和DLD1细胞(HCT116^KRASG13D、HCT116^KRASWT、DLD1^KRASG13D和DLD1^KRASWT)增殖及凋亡率的影响;蛋白质印迹法检测4EGI-1对HCT116^KRASG13D和HCT116^KRASWT细胞中凋亡相关蛋白caspase3和cleaved-caspase3及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly adenosine diphosphate-ribosepolymerase,PARP)和cleaved-PARP,...     

丹参酚酸B调控ROS抑制大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡

目的 验证丹参酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)抑制人大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡,进一步通过活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)阐述其可能机制。方法 体外培养大肠癌细胞HCF-116,分成HCT-116组、HCT-116+H₂O₂组、HCT-116+SalB组、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组。分组干预后,采用MTT法检测细胞存活率、平板克隆实验检测细胞增殖、流式细胞术检测ROS含量、细胞周期及细胞凋亡率。结果 SalB对HCT-116细胞具有抑制作用,且在一定浓度范围内呈正相关(P＜0.01);SalB、H₂O₂促进HCT-116细胞内ROS生成(P＜0.01),ROS清除剂NAC预处理可清除由SalB产生的ROS(P＜0.01);SalB抑制HCT-116细胞增殖(P＜0.01)并促进其凋亡(P＜0.01),该作用可被NAC部分逆转(P＜0.05);SalB引起HCT-116细胞G0/G1周期阻滞(P＜0.01),NAC预处理完全逆转SalB导致的周期阻滞(P＜0.05)。结论 SalB可通过增加HCT-116细胞内ROS水平引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,并促进其凋亡。     

lncRNA DRAIC通过调控自噬影响结直肠癌细胞增殖与凋亡

目的:探讨lncRNA DRAIC对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析DRAIC在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估DRAIC在CRC中的诊断价值。利用UALCAN在线数据库分析DRAIC的表达与CRC临床病理指标的关系。在CRC细胞系HCT-116和HT-29中转染DRAIC过表达质粒(OE-DRAIC)以过表达DRAIC,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞技术和TUNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和AKT/mTOR通路蛋白的表达。转染OE-DRAIC并加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,再采用同上方法分别检测CRC细胞的增殖、凋亡情况,以及LC3B、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达。结果:DRAIC在CRC组织中表达显著下调,ROC曲线下面积(AUC)为0.781。低表达DRAIC的CRC患者总生存率...     

FOXJ1调控AKT信号通路对结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子J1(FOXJ1)对人结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制.方法 应用Western Blot方法检测人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480及人正常肠上皮细胞FHC中FOXJ1的表达水平.细胞中转染pEGFP-N1-FOXJ1和pEGFP-N1,Western Blot检测细胞中FOXJ1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480中FOXJ1的表达水平均明显低于人正常肠上皮细胞FHC(P﹤0.01).人结直肠癌细胞HCT116中FOXJ1的表达水平下降最多,后续选用HCT116细胞继续研究.转染pEGFP-N1后的细胞凋亡率、侵袭细胞数目及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3、MMP-2、AKT、p-AKT的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染pEGFP-N1-FOXJ1后的细胞凋亡率及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3的表达水平明显高于对照组(P﹤0.01);转染pEGFP-N1-FOXJ1后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P﹤0.01).结论 FOXJ1在人结直肠癌细胞中过表达.FOXJ1能够促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭,其作用机制可能与AKT信号通路有关.     

沉默circSATB2对结直肠癌细胞Caco2迁移、侵袭和凋亡影响的机制研究

目的 研究沉默circSATB2对结直肠癌细胞Caco2迁移、侵袭和凋亡的影响及其可能的机制.方法 qRT-PCR方法测定circSATB2在结直肠癌细胞SW480、HR-8348、Caco2和正常肠黏膜上皮细胞中的表达差异.结直肠癌细胞Caco2分成对照组、sh-NC(shRNA对照)组、sh-circSATB2(c...     

二甲基塞来昔布通过活性氧诱导乳腺癌细胞凋亡

目的:探讨二甲基塞来昔布（2,5-dimethyl celecoxib,DMC）对乳腺癌细胞凋亡的作用。方法:用DMC处理人乳腺癌BT-20和MCF-7细胞,检测细胞生存率、细胞凋亡情况、细胞内ROS的产生;Caspase凋亡通路相关蛋白表达水平;预处理ROS抑制剂NAC、Caspase通路抑制剂Z-VAD-Fmk,检测细胞内Caspase凋亡通路蛋白表达水平。结果:DMC对BT-20和MCF-7细胞呈现浓度及时间依赖性杀伤作用,并可以明显增加细胞的凋亡,且呈现浓度依赖性趋势;DMC可以显著增加BT-20和MCF-7细胞内ROS的产生和凋亡相关蛋白cleaved caspase-7、9的表达水平;另一组实验证明,预处理NAC和Z-VAD-Fmk,可以明显降低cleaved caspase-7、9的表达水平,且抑制剂NAC组的效果大于Z-VAD-Fmk组。结论:DMC通过ROS途径诱导乳腺癌细胞发生凋亡。     

百草枯诱导AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用

目的: 探讨百草枯诱导小鼠肝细胞系AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用。方法: AML12细胞分别给予0、25、50、100、200、300 μmol/L的百草枯处理。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针经流式细胞仪测定细胞内活性氧水平;MitoSOX荧光探针检测线粒体活性氧变化;激光共聚焦测定JC-1探针荧光强度以检测线粒体膜电位变化。结果: 与对照组比较,25~300 μmol/L的百草枯处理后可以诱导AML12细胞活力下降,且具有剂量效应关系(r=-0.94,P<0.01);300 μmol/L的百草枯作用24 h可明显诱导AML12细胞发生凋亡(P<0.05);25~300 μmol/L 百草枯处理24 h后细胞内活性氧依次增加(P<0.05),25~100 μmol/L百草枯作用24 h时线粒体活性氧增加且呈剂量效应关系(r=0.98,P<0.05),而200 和300 μmol/L的百草枯作用24 h时线粒体活性氧水平降低(P<0.05)。细胞活力下降与细胞内活性氧升高呈负相关(r=-0.90 P<0.05);晚期凋亡细胞的比例与细胞内活性氧呈正相关(r=0.96,P<0.01);JC-1检测线粒体膜电位结果显示,与对照组相比,300 μmol/L的百草枯处理24 h时线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。结论: 百草枯诱导AML12细胞凋亡过程主要由细胞整体水平的活性氧介导,提示线粒体活性氧并未直接参与百草枯诱导的肝损伤过程。     

Elevated expression of UBE2T exhibits oncogenic properties in human prostate cancer

Increased expression of ubiquitin-conjugating enzyme E2T (UBE2T) is reported in human prostate cancer. However, whether UBE2T plays any functional role in prostate cancer development remains unknown. We here report the first functional characterization of UBE2T in prostate carcinogenesis. Prostate cancer tissue array analysis confirmed upregulation of UBE2T in prostate cancer, especially these with distant metastasis. Moreover, higher level of UBE2T expression is associated with poorer prognosis of prostate cancer patients. Ectopic expression of UBE2T significantly promotes prostate cancer cell proliferation, motility and invasion, while UBE2T depletion by shRNA significantly inhibits these abilities of prostate cancer cells. Xenograft mouse model studies showed that overexpression of UBE2T promotes whereas UBE2T depletion inhibits tumor formation and metastasis significantly. Collectively, we identify critical roles of UBE2T in prostate cancer development and progression. These findings may serve as a framework for future investigations designed to more comprehensive determination of UBE2T as a potential therapeutic target.     

声动力介导的活性氧与肿瘤关系的研究进展

声动力疗法（sonodynamic therapy,SDT）因损伤较小、选择性较高等特点在肿瘤的治疗方面被广大学者、专家所关注。目前研究发现,声动力治疗肿瘤有多种机制,其中自由基离子理论被认为是主要作用机制。自由基离子理论主要与活性氧(reactive oxygen species,ROS)有关,而ROS是近年来各个医学领域的研究热点。氧化应激导致ROS的产生,而不同浓度的ROS对机体的影响大不相同。氧化应激又与肿瘤的发生、发展有着密不可分的联系,在各种致癌因素的作用下,机体将生成大量ROS,如果机体没有及时把产生的活性氧清除,就可能对周围组织产生损伤,甚至出现恶变。本文阐述在SDT作用下产生的ROS与肿瘤之间的关系,以期为临床上肿瘤的治疗和预防提供新的思路。     

Involvement of reactive oxygen species in 2-methoxyestradiol-induced apoptosis in human neuroblastoma cells

Neuroblastoma is the most common extra-cranial solid tumor in children. Despite advances in the treatment of childhood cancer, outcomes for children with advanced-stage neuroblastoma remain poor. Here we reported that 2-methoxyestradiol (2-ME) inhibited the proliferation and induced apoptosis in human neuroblastoma SK-N-SH and SH-SY5Y cells. 2-ME treatment also resulted in the generation of ROS and the loss of mitochondrial membrane potential in SK-N-SH and SH-SY5Y, indicating that 2-ME-induced apoptosis is mediated by ROS. This is supported by the results that have shown that co-treatment with antioxidants, VC, L-GSH and MitoQ₁₀, decreased 2-ME-induced generation of ROS and the loss of the mitochondrial membrane potential, increased the Bcl-2/Bax ratio, decreased 2-ME-induced activation of caspase-9 and caspase-3 and the up-regulation of apoptosis-inducing factor (AIF), and prevented 2-ME-induced apoptosis in SK-N-SH and SH-SY5Y cells. These results suggested that oxidative stress plays an important role in 2-ME-induced apoptotic death of human neuroblastoma cells.