食用醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染性和生殖力的影响

目的观察食用醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染性和生殖力的影响。方法140只雄性昆明小鼠随机均分为14组,分别喂饲经食用醋(总酸浓度4.5%,pH3.05)、食用酱油(含19.3%NaCl)和生理盐水浸泡不同时间的含有300条旋毛虫肌幼虫的小鼠肌肉(重约0.02g),于喂饲后第7天和第42天每组各剖杀5只小鼠,分别观察肠道成虫、肌幼虫的数量和生殖力指数(RCI)。结果小鼠喂饲经食用醋处理3、6、12和24h的旋毛虫肌幼虫后,其肠道成虫数分别为77、41、0和0条,RCI分别为52.48、18.45、0和0,均显著低于生理盐水对照组肠道成虫数(分别为121、121、116和101条)和RCI(分别为159.10、124.56、73.63和42.17)(P0.05)。小鼠喂饲经食用酱油处理12、24、36和48h的旋毛虫肌幼虫后,肠道成虫数(分别为79、39、3和0条)和RCI(分别为48.75、20.80、1.87和0)亦均明显低于对照组(116、101、95和89条,73.63、42.17、21.53和4.13)(P0.05)。感染小鼠的肠道成虫数和RCI均随醋或酱油处理时间的延长而降低(P0.05)。结论含旋毛虫肌幼虫的肌肉经食用醋或酱油处理后,肌幼虫的感染力和生殖力均明显下降。     

酒精对旋毛虫感染性幼虫杀伤作用的实验研究

目的研究酒精对旋毛虫感染性幼虫的杀伤作用。方法在体外模拟胃内环境条件下,旋毛虫肌幼虫用不同浓度酒精处理不同时间后用美蓝-伊红-硼砂(M.E.B.)染液鉴定肌幼虫的死活;将酒精处理后的肌幼虫经口接种小鼠,观察幼虫在小肠中发育为成虫的数量及生殖力。结果肌幼虫在酒精中的存活时间随酒精浓度的升高而缩短,肌幼虫在45°酒精中30min的死亡率为100%(96/96),而肌幼虫在65°酒精中10min的死亡率为100%(90/90)。肌幼虫用30°、25°、20°酒精分别处理2h、4h、4h时,染色法表明幼虫的存活率分别为57.6%(76/132)、98.6%(70/71)及100%(136/136),但接种小鼠后未在小肠和肌肉中发现成虫和幼虫;含幼虫的小鼠肌肉经35°、30°、25°酒精处理0.5h、2h、4h后接种小鼠,从小肠和肌肉中亦未回收到虫体。结论20°以上酒精对旋毛虫肌幼虫有较强的杀伤作用,虽然酒精处理后的肌幼虫仍是活的,但已丧失了感染性。结果提示,生食或半生食肉类及肉制品时适量饮用白酒对预防旋毛虫感染有一定作用。     

碳酸氢钠对旋毛虫幼虫感染性及生殖力的影响

目的观察碳酸氢钠对旋毛虫幼虫感染性及生殖力的影响。方法将旋毛虫肌幼虫在体外经1%碳酸氢钠处理不同时间后观察其活力。100只雄性昆明小鼠随机分成10组(每组10只),1～3组中每组5只分别喂饲经碳酸氢钠或生理盐水浸泡不同时间(24、36、48h)含300条旋毛虫肌幼虫的小鼠肌肉(约0.02g);4～9组分别用不同剂量碳酸氢钠或食用醋(总酸浓度4.5%,pH3.05)灌胃后0.5h喂饲含300条肌幼虫肉块,10组为灌服生理盐水对照组。于喂饲后第7天和第42天每组剖杀5只小鼠,分别观察肠道成虫数、肌幼虫数及生殖力指数(RCI)。结果肌幼虫经碳酸氢钠处理24～240h的死亡率与生理盐水对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。小鼠喂饲经碳酸氢钠处理24、36h和48h旋毛虫肌幼虫后42d,其肌幼虫数(84467、84600条和82300条)均明显高于生理盐水对照组(12650、6460条和1240条)(P0.05)。灌饲0.4、0.6ml碳酸氢钠小鼠的肠道成虫数(193、203条)与RCI(323.77、326.55)均明显高于食醋对照组(68、67条;217.55、195.33)及生理盐水对照组(145条,268.13)(P0.05)。结论碳酸氢钠可明显增加旋毛虫的感染性与生殖力。     

乙醇对旋毛虫幼虫活力及感染性的影响

目的观察不同体积分数的乙醇溶液对旋毛虫幼虫活力及感染性的影响。方法在体外模拟胃内环境条件下,将100条旋毛虫用不同体积分数的乙醇溶液处理,美蓝-伊红-硼砂（M.E.B）染液鉴定幼虫的活力。64只昆明小鼠随机分为8组（每组8只）,6组小鼠分别经口接种或喂饲500条用不同体积分数的乙醇溶液处理不同时间后的幼虫或含500条幼虫的肌肉,另2组分别为生理盐水处理幼虫与含幼虫肌肉的对照组,感染后7 d与40 d每组各剖杀4只小鼠,分别观察肠道雌虫数与肌幼虫数。结果肌幼虫用体积分数为0.20和0.25的乙醇溶液处理240 min,死亡率分别为0和1.4%;在体积分数为0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55和0.60的乙醇溶液处理组幼虫全部死亡所需时间分别为180、90、45、30、30、20和20 min;肌幼虫用体积分数为0.65的乙醇溶液处理1和6 min的死亡率分别为44.4%和100%。旋毛虫幼虫经不同体积分数乙醇溶液处理不同时间后的死亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。趋势性分析结果表明,在体积分数为0.25～0.60的乙醇处理组,幼虫的死亡率随乙醇体积分数的增加及处理时间的延长而升高（P〈0．05）。不同体积分数的乙醇溶液处理不同时间的幼虫接种小鼠后7d和40d,未发现肠道成虫与肌幼虫。结论乙醇对旋毛虫幼虫有较强的杀伤作用,幼虫用体积分数≥0．35的乙醇溶液处理30min其感染性及生殖力完全丧失。     

白酒对鼠体旋毛虫幼虫的杀伤作用

目的观察白酒对鼠体旋毛虫幼虫的杀伤作用。方法80只昆明小鼠,各喂食含500条旋毛虫幼虫的肌肉后随机分成8组(10只/组),实验组分别灌饲0.2ml或0.4ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒,对照组灌饲相同体积的生理盐水。7d与40d后各剖杀5只,检查肠道旋毛虫成虫和肌幼虫数。结果灌饲0.2ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒的小鼠肠道成虫数分别为(80.00±11.25)条、(208.00±22.89)条及(256.00±69.37)条,肌幼虫数分别为(37993.60±296.50)条、(54166.60±2951.98)条和(63808.40±2442.81)条,灌饲0.4ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒的小鼠肠道成虫数分别为(21.00±11.83)条、(87.00±27.66)条及(112.00±25.38)条,肌幼虫数分别为(24691.20±4628.14)条、(47266.60±1955.49)条及(50833.40±2211.50)条,生理盐水对照组分别为(312.00±76.93)条和(81050.00±13157.74)条,差异有统计学意义(P均0.05)。灌饲白酒的感染鼠肠道成虫与肌幼虫数均随乙醇灌胃量的增大而减少(P均0.05)。结论白酒对鼠体内旋毛虫的杀伤作用与乙醇含量有关,小鼠灌饲白酒可降低旋毛虫感染程度。     

嗜中性粒细胞及单核细胞介导的细胞毒效应在旋毛虫病免疫机理中的作用

目的探讨嗜中性粒细胞（Neutrophil，Neu）、单核细胞（Monocyte，Mon）介导的细胞毒效应在旋毛虫病免疫机理中的作用。方法采用ELISA检测总IgE、特异性IgE、总IgG和特异性IgG，然后取IgE和IgG高检测值时相的血清为免疫血清，以CO2培养法观察免疫血清对Neu、Mon杀伤旋毛虫肌幼虫的影响。结果大鼠感染旋毛虫后2周和3周，血清特异性IgE最高，感染后5周，特异性IgG阳性率最高。在免疫血清存在时，无论感染鼠还是正常鼠的Neu和Mon对旋毛虫幼虫均有很强的杀伤作用，但感染鼠Neu的作用更强。孵育48 h时，Neu和Mon对旋毛虫肌幼虫的杀伤率分别为42.1%和23.0%。结论大鼠感染旋毛虫后，血清总IgE与特异性IgE、总IgG与特异性IgG同步增加;在免疫血清存在的情况下，Neu和Mon均有杀伤旋毛虫肌幼虫的作用，但感染鼠Neu的作用更强;Neu和Mon发挥杀伤旋毛虫肌幼虫作用时主要依赖的是IgG。     

旋毛虫排泄分泌抗原对小鼠的保护性免疫

目的比较旋毛虫成虫排泄分泌抗原(ES抗原)、肌幼虫ES抗原、成虫和肌幼虫ES混合抗原对小鼠的免疫保护作用。方法用生理盐水培养法从培养液中提取成虫ES抗原、肌幼虫ES抗原,分别用成虫ES抗原、肌幼虫ES抗原、成虫和肌幼虫ES混合抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和对照组,间隔7d共免疫3次。末次免疫后7天,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口进行攻击感染。感染后7天和30天检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数。结果旋毛虫成虫ES抗原组、肌幼虫ES抗原组、成虫和肌幼虫ES混合抗原组的成虫减虫率分别为87.95%、69.48%、84.34%,肌幼虫减虫率分别为74.79%、87.97%、86.87%。成虫ES抗原组、成虫与肌幼虫ES抗原混合组的成虫减虫率均高于肌幼虫ES抗原组(P均<0.05)。肌幼虫ES抗原组、成虫与肌幼虫ES抗原混合组的肌幼虫减虫率均高于成虫ES抗原组(P均<0.01)。结论旋毛虫成虫和肌幼虫ES混合抗原均能诱导小鼠产生抗成虫及肌幼虫较强的免疫力。     

嗜酸性粒细胞介导的ADCC效应在旋毛虫感染免疫中的作用研究

目的通过对小鼠总IgE、特异性IgE及依赖IgE的嗜酸性粒细胞(Eos)介导的ADCC效应的动态观察,进一步探讨嗜酸性粒细胞在旋毛虫病免疫中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水平,用间接ELISA法测定特异性IgE水平;分别在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的嗜酸性粒细胞。感染鼠血清及感染鼠的旋毛虫肌幼虫与含10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液,37℃条件下培养,分别在12、24、48h显微镜下观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响。结果实验组较对照组总IgE水平增高,在感染后14、21d达到高峰(P<0.01),之后呈逐渐下降;特异性IgE阳性率在感染后14和21d为88.9%,对照组阳性率为0,差异有统计学意义(P<0.01)。在体外培养的条件下,单纯Eos对旋毛虫肌幼虫无杀伤作用,在免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强;灭活IgE和补体后,Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos组比较肌幼虫死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要免疫血清的参与,免疫血清中介导上述效应的物质为IgE和补体。     

肥大细胞介导的ADCC效应在旋毛虫病免疫中的作用研究

目的通过对大鼠总IgE、特异性IgE及IgE介导的肥大细胞脱颗粒动态观察,进一步探讨肥大细胞介导的ADCC效应在旋毛虫病免疫中的作用。方法采用雄性Wistar大鼠为旋毛虫感染的动物模型,将90只大鼠随机分为10组,以ELISA双抗体夹心法和间接法动态检测总IgE、特异性IgE,以直接法进行肥大细胞脱颗粒试验,然后采用体外CO2培养法观察免疫血清存在下肥大细胞杀伤旋毛虫肌幼虫作用。结果在免疫血清存在时,感染鼠和正常鼠肥大细胞对旋毛虫幼虫均有杀伤作用,48 h时杀虫数分别为31.5和17.5条(χ2=13.146,P<0.01);χ2=28.543,P<0.01),以感染鼠肥大细胞杀伤作用更强。结论在IgE类抗体依赖肥大细胞介导杀伤旋毛虫肌幼虫的ADCC中,肥大细胞的作用较强。     

两种新型免疫佐剂CT-B、Saponin制备的旋毛虫疫苗对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较两种新型免疫佐剂CT -B(霍乱毒素B亚单位 )、saponin(皂素 )制备的旋毛虫疫苗对小鼠的免疫保护作用。方法　将旋毛虫肌幼虫可溶性抗原分别与CT -B、saponin混合 ,以口服或皮下注射途径免疫NIH小鼠 ,间隔 1周共免疫 3次 ,末次免疫后 1周 ,与对照组同时予 2 0 0条旋毛虫感染期肌幼虫攻击 ,比较三组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力及肌幼虫数。结果　与对照组比较 ,CT -B组成虫减虫率、新生幼虫减虫率及肌幼虫减虫率分别为 91 5 9%、6 1 74 %和 90 32 % ,saponin组成虫减虫率、新生幼虫减虫率及肌幼虫减虫率分别为 79 2 1%、6 7 4 4 %和 88 39%。 结论　CT -B和saponin均能有效提高机体对旋毛虫的保护性免疫力 ,CT -B对肠道成虫的影响更显著     

不同浓度醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染力和生殖力的影响

目的 通过比较经不同浓度食用醋或食用酱油分别浸泡不同时间的肉块,其所含旋毛虫肌幼虫对小鼠的感染力和生殖力的影响.方法 84只昆明小鼠分为21组,分别喂食经不同浓度的食用醋(总酸浓度分别为3.5 g/100 ml、4.5 g/100 ml、6 g/100 ml)或食用酱油(氨基酸态氮浓度分别为0.4g/100 ml、0....     

Cryopreservation of Trichinella spiralis muscle stage larvae

A cryopreservation protocol for Trichinella spiralis muscle stage larvae is described. Larvae are pretreated in 10% bile at 37 degrees C for 1 hr to induce an increase in surface permeability, than incubated in 20% v/v ethanediol at 37 degrees C for 10 min, transferred to 0 degrees C for a second incubation step of 15 min in a v/v mixture of 33% ethanediol: 33% methanol: 34% saline at 0 degrees C followed by rapid cooling (approximately 5,100 degrees C min-1) of aliquots distributed onto glass coverslips. The larvae are thawed by dropping the coverslips into 2 ml saline at room temperature (20 degrees C) and immediately agitating, which simultaneously dilutes (1:100) the cryoprotectants. Groups of 6 mice were infected with muscle stage larvae by gastric intubation. Five days post-infection 14.5 +/- 3.2% of control untreated unfrozen MSL and 16.5 +/- 4.1% of unfrozen bile and cryoprotectant treated controls were recovered as adult worms from the small intestine. Of the cryopreserved larvae, 1.1 +/- 0.4% were recovered as adults, which represents 7.6% compared to the untreated unfrozen controls. When the bile pretreatment step was omitted fewer adult worms (0.09 +/- 0.04%) were recovered and no second generation muscle stage larvae were produced. Modifying this technique by omitting the first incubation step in 20% ethanediol and extending the second incubation step to 25 min yielded 72.3% recovery of T. nativa adult worms 5 days post-infection compared to unfrozen controls. The reproductive capacity index of bile treated cryopreserved T. spiralis was 2.5 +/- 0.6 compared to 51.8 +/- 18.8 for normal muscle stage controls.     

旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原的保护性免疫研究

目的：比较旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原接种小鼠诱导产生的保护性免疫。方法:检查肠道成虫、肌幼虫和血液中嗜酸性细胞数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。结果：成虫、新生幼虫和肌幼虫抗 免疫组的成虫减虫率分别为82.19％、72.31％和42.88％;肌幼虫减虫率分别为68.83％、78.19％和51.96％。血清IgG抗体滴度明显升高,成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的GMRT分别为对照组的7.46倍、5.28倍和4.92倍。血液嗜酸性粒细胞明显增多。结论：旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原均为激发特异性液免疫和细胞免疫,诱导小鼠对攻击感染产生保护性。其中,成虫抗原和新生幼虫抗原显示出更好的免疫原性,而成虫抗原有可能成为较理想的免疫疫苗来源。     

三苯双脒治疗小鼠不同虫株旋毛虫囊包幼虫感染的效果比较

目的观察不同剂量三苯双脒对小鼠感染不同虫株旋毛虫囊包幼虫的作用效果。方法对河南株、云南株、黑龙江株旋毛虫囊包幼虫感染鼠采用3种剂量的三苯双脒治疗,观察其效果。结果各治疗组小鼠均无不良反应,治疗组平均检虫数均少于对照组(P<0.05),河南株旋毛虫感染组3种剂量治疗后的减虫率分别为87.5%、75.4%和57.8%。云南株旋毛虫感染组减虫率分别为99.1%、92.4%和74.5%。黑龙江株旋毛虫感染组减虫率分别为61.6%、53.3%和50.5%。结论三苯双脒对小鼠感染河南株、云南株、黑龙江株旋毛虫囊包幼虫均有一定的疗效,尤其对云南株旋毛虫囊包幼虫感染的疗效更显著,且随药量的增加减虫率增大。     

旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的　观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法　将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果　IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论　旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。