A簇链球菌胞外产物抗体的检测

Ａ簇链球菌可释放５种胞外产物：溶血素Ｏ、透明质酸酶、链激酶、脱氧核糖Ｂ酶、辅酶Ｉ酶。传统的抗Ｏ试验（ＡＳＯ）是把外毒素溶血素Ｏ还原，与病人血清中和后测剩余毒素的溶血力。该方法只能检测到１种胞外产物抗体。我们参照国内外有关文献，把５种胞外酶同时致敏在人红细胞上，采用间接血凝（ＡＳＴＺ）技术，一次检测多种胞外产作者单位：１３００６２卫生部长春生物制品研究所物抗体。实验中，抽取临床疑似链球菌感染的病人血清１３９０份，采用间接血凝法（ＡＳＴＺ）与抗Ｏ试验（ＡＳＯ）对比检测，结果见表１。表１　ＡＳＴＺ与…     

A群链球菌疫苗的研究进展

A群链球菌(GAS),是革兰氏染色阳性致病菌,是引起人类感染最常见的致病菌之一,导致全球每年约50万的死亡人数,用于治疗的费用也成了不小的经济负担.目前,GAS感染治疗策略依旧是使用合适的抗生素如青霉素,但在一些地区,抗生素针对某些血清型的作用效果十分有限,已不能很好地控制疾病.因而,研发出安全、有效的商品化GAS疫苗从而达到预防和控制感染的目的是近些年来GAS研究的重点.目前,已经有一些GAS的候选疫苗进入了临床评估阶段,因而对疫苗作用机制进行研究具有重要意义.     

OF抑制试验对A族β溶血性链球菌的分型

本研究通过ＯＦ（ＯｐａｃｔｏＦａｃｔｏｒ，混度因子）抑制试验对临床分离的１１０株Ａ族β溶血性链球菌（ＧＡβＨＳ）进行ＯＦ分型。结果表明，（１）ＯＦ分型阳性率仅有３０％。（２）ＯＦ阳性菌株集中在Ｍ６８，Ｍ７５，Ｍ６０，ＰＴ２８４１，Ｍ２２五个Ｍ型，其中Ｍ６８，Ｍ７５明显占优势达６６．６％。（３）全部Ｍ６８型菌株均取自咽扁桃体炎和猩红热患儿，大部分脓疮病ＯＦ阳性株为Ｍ７５株。提示：（１）我国儿童ＧＡ６ＨＳ感染流行菌株有明显不同于欧美等国家的Ｍ／ＯＦ菌型谱。（２）这时期在北京地区有Ｍ６８，Ｍ７５感染菌株的局部流行。（３）对我国ＧＡＲＨＳ感染菌株分型研究应在采用Ｍ／ＯＦ方法的基础上，进一步探讨其它分型方法。     

A族乙型溶血性链球菌emm基因测序分型的研究进展

emm测序分型是根据编码M蛋白的emm基因高变区核苷酸序列特异性将A族乙型溶血性链球菌分型的分子生物学技术,与传统血清学分型比较,具有准确、快速的特点,实验室间可方便、快捷地通过网络进行资料比较.在多价疫苗的构建和效能检测上将有很好的发展前景.     

免疫荧光法检测B群链球菌方法的建立及性能评价

目的:建立免疫荧光法B群链球菌检测方法并评价其性能,确定免疫荧光法B群链球菌检测试剂的最佳反应条件;了解免疫荧光法B群链球菌检测方法的局限及改进措施。方法:双盲法。采集103例产检孕妇阴道分泌物标本,分离培养、鉴定,免疫荧光法对分离的疑似B群链球菌菌落免疫荧光法检测;248例孕妇阴道拭子直接涂片免疫荧光检测进行双盲法平行检测,以分离培养、鉴定结果为标准,统计免疫荧光法B群链球菌检测试剂与分离培养鉴定法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率,计算一致性系数;设计干扰试验,研究与其他细菌抗原交叉反应的可能。结果:试验结果统计分析显示,103例免疫荧光法B群链球菌检测菌落涂片与分离培养鉴定法检测结果的总符合率为94.17%,阴性符合率为92.41%,阳性符合率为100%,Kappa值为0.85。对248例临床孕妇阴道分泌物涂片检测,免疫荧光法B群链球菌检测试剂与分离培养鉴定法检测结果的总符合率为95.16%,阴性符合率为96.48%,阳性符合率为80.95%,Kappa值为0.71。结论:免疫荧光法B群链球菌检测试剂检测分离菌落涂片、与分离培养鉴定法的检测结果无显著性差异,阴道分泌物直接涂片的结果与分离培养鉴定法的检测结果一致。免疫荧光B群链球菌检测方法具有快速、简便、准确的特性,可用于产前孕妇阴道分泌物分离的疑似B群链球菌菌落直接鉴定。     

应用荧光抗体技术快速检验金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的实验研究

金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)和溶血性链球菌(简称溶链菌)广泛分布于土壤、水、空气、动物体表 以及健康人的鼻咽部。由于这类细菌均能使人致病和引起食物中毒,因此,均被列为医院临床诊断和食品卫生检验的主要对象之一。 国内外大部份实验室和医院的临床诊断多用常规细菌培养法,其操作程序多,手续繁琐费时。本文报道用荧光抗体技术,开展对金葡菌和溶链菌荧光抗体法快速检验的实验研究。 经过三年多的实验研究,掌握了对免疫原和动物免疫途径的选择、抗血清效价的测定、抗体球蛋白的提取和提纯、荧光抗血清的标记和鉴定等试验。制     

荧光原位杂交法快速检测B群链球菌

目的建立一种快速、准确检测和鉴定B群链球菌的方法。方法荧光素Cy3标记的针对B群链球菌16S rRNA的种特异性寡核苷酸探针,与玻片上固定及经溶菌酶破壁后的B群链球菌在50℃下杂交2h,随后在50℃下严格洗涤 10min,蒸馏水清洗,干燥后立即置荧光显微镜下观察。结果探针的特异性经B群链球菌和其它形态学相似菌种的参考菌株证实。荧光原位杂交法可以检测出所有31株B群链球菌,包括3株参考菌株和28株临床分离株。全过程可于3h内完成。结论该检测方法快速、特异性好、敏感性高,可以作为B群链球菌的早期检测方法。     

抗体的系统性检测方法

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无限的产业,而生物医药领域中发展最快的是抗体工程药物,在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的重要作用。虽然抗体的制备技术日趋完善,但用于诊断和治疗的抗体必须符合高纯度、高效价、高可用性的要求,对抗体的制备、分离和鉴定就显得尤为重要。本文简要阐述了抗体工程药物制备中对抗体成分的系统性检测方法,包括纯度检测、特异性检测、亲和力检测、效价检测等,并对抗体这种特殊蛋白的常用定量检测方法进行了比较。     

A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究

目的：制备A群脑膜炎球菌多糖（PS）结合物，观察其免疫原性。方法：A群脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后共价接上己二酰肼手臂，在碳二亚胺催化下与精制破伤风类毒素（TT）偶联剂备结合物。单独多糖、多糖结合物和TT按相同程序免疫NIH小鼠，用ELISA法检测小鼠血清抗多糖抗体滴度和特异性及抗TT抗体滴度。结果：用上述实验方法制备的结合物具有多糖和蛋白质的抗原性，免疫小鼠可诱导高滴度的血清抗多糖IgG抗体，免疫2针后高滴度抗体至少持续存在3周。血清抗体可中和多糖。加强免疫提示有免疫记忆性。结合物还可诱导产生一定水平的TT抗体。结论：A群脑膜炎球菌多糖结合到TT上可明显增强多糖在小鼠中的免疫原性，为制备结合疫苗并研究其对婴幼儿的免疫原性提供了实验基础。     

深圳市外来劳务工人A群、C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平检测及分析

目的利用横断面基线调查深圳市外来劳务工人血清中A群和C群流行性脑脊髓膜炎（流脑）水平,为外来劳务工人流脑防控提供依据。方法抽取深圳市罗湖区、龙岗区、宝安区3个监测点,每个监测点选择50人份以上,3个监测点共选择1003人,采用间接ELESA法（定量）检测血清中抗A群和C群脑膜炎奈瑟菌抗体效价。结果共检测1003份血清标本,外来劳务工人A群和C群流脑抗体平均滴度分别为10.78μg/ml、2.71μg/ml。A群和C群流脑血清抗体保护率分别为93.7%、64.8%,二者差异有统计学意义（P〈0.01）;不同年龄组、不同籍贯外来劳务工人A群流脑抗体保护率差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论深圳市外来劳务工人C群流脑抗体保护率明显低于A群,为了预防可能存在的流脑C群流行和暴发,提示应加强外来劳务工C群流脑多糖疫苗免疫接种。     

解脲脲原体生物膜胞外多糖的检测

目的 研究解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)4个型别标准株在体外形成的生物膜之胞外多糖的分布及结构成分.方法 将Uu标准株Parvo群中4、8血清型和T960群中3、14血清型进行体外生物膜培养后,扫描电镜下观察生物膜组成及结构,并在FITC-ConA/PI及ECA/PI双荧光染色后进行激光共聚焦显微镜观察及测定平均荧光强度.秩和检验及t检验分别比较两种荧光标记物、两生物群的总体平均荧光强度的差异.结果 4个型别Uu标准株均可在体外形成生物膜,生物膜结构主要呈网格状,胞外物质占大部分比例.在激光共聚焦显微镜下,Uu生物膜胞外多糖均可被FITC-ConA和ECA染色,FTTC-ConA呈网格状分布,ECA小片状聚集分布.FITC-ConA的总体平均荧光强度较ECA高,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 Uu体外培养生物膜主要呈网格状结构,胞外多糖中含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡聚糖残基,并以葡萄糖、甘露糖残基为主.     

定量检测A群脑膜炎奈氏菌荚膜多糖抗体的固相放射免疫分析法

在流脑防治工作中,无论是评价菌苗免疫效果,还是开展流脑的监测与预测工作,都需要可靠的抗体测定方法。为此,国内外已建立了多种流脑抗体测定方法。目前国外最常用的方法是固相放射免疫分析法(s PRIA)和EL巧A,国内最常用的方法是杀菌力试验(BCA),少数部门采用EL巧A。由于BCA和目前使用的微量     

应用emm基因序列分析对104株A群链球菌分型

目的　通过emm基因序列分析对A群链球菌 (GAS)进行分型 ,探讨T型与emm型的对应关系。方法　用引物以PCR法扩增GASM蛋白的N末端并进行测序 ,确定GAS的emm型 ,并与T分型对照比较。结果　 (1) 10 4株菌株中 ,emm1所占比例最大 ,为 2 9.8% ,然后依次是emm18(9.6 % ) ,emm12 (7.7% ) ,和emm6 9(5 .8% )等。 (2 )T1、T12和T14 4 9与emm基因对应关系好 ,T116株全部对应emm1型 (10 0 % ) ,T12对应emm12 ,符合率 83.3% ,T14 4 92株均对应emm4 9型 ;其它菌型对应关系差 ;同一T型可对应数个emm基因型 ,同一emm基因型可对应不同的T型。 (3)发现 1株新的emm型菌株 ,序列已递交GenBank ,注册号为AY3472 5 9。结论　emm基因分型方法具有准确、快速、分辨力高的优点 ;我国部分地区A群链球菌emm基因分型主导型为emm1、18、12、6 9、110等菌型。     

溶血性链球菌制剂OK-432用于癌的免疫治疗

一、前言1868年Busch首次报告几例肉瘤患者合并丹毒时,巨大的肿瘤迅速缩小.继之,Fehleisen再次确认并发丹毒而肿瘤缩小,同时证实丹毒是链球菌感染所致.冈本受到启发研究出抗肿瘤性溶血性链球菌制剂.冈本等将溶血性链球菌弱毒株Sa(后来改称为     

血小板抗体检测的方法比较

随着临床输血事业的发展,血小板(PLT)的使用日益广泛.但是,随着血小板的大量使用,血小板输注无效(refractoriness to platelet transfusion,RPT)已成为困扰临床医生的常见问题.目前对血小板抗体检测的普及程度还很低,为此本文对现有的血小板抗体检测方法进行比较分析,以便为广泛开展血小板抗体检测及血小板配型提供有价值的参数.     

凝固酶阴性葡萄球菌胞外多糖蛋白复合物的检测

凝固酶阴性葡萄球菌(coagulasenegative Staphylococci,CNS)属人体正常菌群.随介人性治疗和免疫抑制剂的使用,现成为院内感染的条件致病菌.本研究通过刚果红黏附试验和刚果红-阿利新蓝联合染色,对采自临床的CNS标本进行胞外多糖蛋白复合物检测,以胞外多糖毒力指标作为确定CNS致病性的一个可能性依据,可为医院有效控制CNS感染提供实验基础.     

蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及诊断方法的建立

蜡样芽胞杆菌是引起食物中毒的细菌之一〔1〕。蜡样芽胞杆菌的溶血素具有肠毒素的性质〔2〕,提取其溶血素可作为实验室诊断蜡样芽胞杆菌食物中毒和分析食品中残留毒素的诊断试剂。材料和方法蜡样芽胞杆菌溶血素的制备 :试验用的菌株接种肠毒素产毒培养液 ,经 37℃、16ｈ静置培养后 ,振荡培养 10ｈ。培养液基本按Ｂｅｅｃｈｅｒ等〔3〕的方法提取成粗制溶血素。进一步提纯则采用制备性ＳＤＳ ＰＡＧＥ的方法 ,切下含有 3种溶血素成分的凝胶 ,利用蛋白质沉淀或冷冻干燥的方法浓缩后得到分析测定用的溶血素。溶血素的测定1 用紫外吸收法测定蛋…     

BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫佐剂作用

目的探讨免疫佐剂BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的作用。方法将不同剂量(5、10、100μg)的免疫佐剂BCG-CpG-DNA与A群脑膜炎球菌多糖疫苗直接混合后,皮下免疫小鼠,与未添加佐剂疫苗比较,ELISA法检测抗原特异性IgG抗体水平,并分析抗体亚类IgG1和IgG2a的水平。结果BCG-CpG-DNA能提高A群脑膜炎球菌多糖疫苗特异性抗体IgG水平,并能促进抗原特异性抗体亚类的产生,其中佐剂中、高剂量(10、100μg)实验组IgG、IgG2a水平与未加入免疫佐剂疫苗之间差异有统计学意义。结论BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗有免疫佐剂作用。     

提高抗体芯片检测灵敏度的方法

抗体芯片作为蛋白质芯片的一种,具有高通量、高特异性及平行性分析的优点,目前已被应用到许多领域,成为蛋白质组学研究过程中不可缺少的技术。但是如何构建高敏感度、微型化及检测动力学范围广的抗体芯片以满足样品检测的需要,仍然是抗体芯片发展过程中所面临的重要挑战。就如何提高其检测灵敏度作一综述。     

弓形虫IgM抗体检测方法的研究

本文以鼠抗人μ链单克隆抗体捕获被测人血清中ＩｇＭ抗体，再以辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原进行直接酶联免疫吸附试验，检测人血清中特异性抗弓形虫ＩｇＭ抗体，并以阻断试验证实该方法的特异性。与风疹病毒ＩｇＭ抗体阳性血清，巨细胞病毒ＩｇＭ抗体阳性血清和类风湿因子等无交叉反应。与进口试剂盒以酶联免疫吸附试验双夹心法（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ－Ｔｏｘ－ＩｇＭ）进行比较检测了临床血清样品１０５３份，两者阳性符合率为９５．５６％，ＤＳ－ＥＬＩＳＡ阴性血清在Ｄ－ＥＬＩＳＡ法亦阴性，而且后者灵敏度略高。酶标记抗原和包被抗体的酶标板在４℃中保存６个月仍稳定。试剂盒操作简便，快速，适用于弓形虫病的早期诊断。