钩吻素子对兔血小板聚集的影响

钩吻素子在体外实验中，对由花生四烯酸（ＡＡ）、凝血酶（Ｔｈｒ）、Ｃａ２＋诱导的兔血小板聚集抑制作用的ＩＣ５０分别为０．４５ｇ／Ｌ、０．２２ｇ／Ｌ、０．００１５ｇ／Ｌ，并在一定浓度范围内呈剂量依赖关系。钩吻素子在静注后不同时间内，其抑制血小板聚集作用呈现良好曲线变化，以ＡＡ、Ｔｈｒ为诱导剂，其最大抑制作用的时间分别为静注后５６ｍｉｎ、７８ｍｉｎ处     

钩吻素子抗肿瘤作用研究

目的:研究钩吻素子(koum ine,Kou)的抗肿瘤作用。方法:对体外培养肿瘤细胞的作用采用MTT检测法,并观察Kou对小鼠移植性肿瘤的抑制作用。结果:Kou能抑制多种常见细胞株的增殖,并对数种小鼠移植性肿瘤具有明显的抑制作用,对体外Bel7402细胞、A549细胞、Lovo细胞最高抑制率分别为59.52%、61.89%和64.51%;对荷Bel7402实体瘤、H22实体瘤和Lew is实体瘤小鼠的抑制率分别为58.3%、50.2%和47.8%。结论:Kou在体内外均对肿瘤有明显抑制作用。     

钩吻素子对小鼠脾细胞增殖反应及体液免疫反应的抑制作用

钩吻素子(Kou) 体外对混合淋巴细胞培养反应、刀豆蛋白A(ConA 2μg/ml) 或细菌脂多糖(LPS10μg/ ml) 诱发的小鼠脾细胞增殖反应均有不同程度的抑制作用,最低抑制浓度分别为10 、5 、40μg/ml。Kou(10 、20 、40 mg/kg ×7d)ip 可降低小鼠血清溶血素的活性,高浓度时Kou 对补体介导的溶血反应亦有轻度抑制作用     

人血浆中钩吻素甲和钩吻素子HPLC-UV测定

目的建立HPLC法测定人血浆中钩吻素甲(GM)和钩吻素子(KM)的浓度。方法用Waters HLB-SPE固相萃取小柱提取人血浆中GM及KM。色谱柱为Shim-Pack C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水-二正丁胺(58∶42∶0.01);体积流量1.0 m L/min;进样量50μL;柱温30℃;检测波长263 nm。结果 GM和KM在0.05~20μg/m L线性关系良好,最低定量限为50 ng/m L(S/N≥10),GM和KM的平均提取回收率分别为90.88%、87.84%,平均方法回收率分别为98.65%、96.31%,平均日间精密度RSD分别为9.81%、10.63%,平均日内精密度RSD分别为7.79%、8.24%。含GM和KM的人血浆在室温25℃避光的条件下保存12 h、在4℃冰箱保存2 d、在-20℃冰箱保存15 d、-20℃冰箱反复冻融3次的条件下,低、中、高3个质量浓度(0.05、5.0、20μg/m L)的GM和KM回收率均在90%以上。结论建立的人血浆中GM和KM的HPLC测定方法灵敏度高、血浆用量少、操作简便、结果准确可靠,适用于钩吻制剂药动学研究和钩吻中毒时定性和定量分析。     

高速逆流色谱分离制备钩吻素子

目的 建立应用高速逆流色谱技术分离纯化中国钩吻中钩吻素子的方法。方法 从中国钩吻中提取得到的钩吻总碱以氯仿-甲醇-0.1 mol/L HCl(4 ∶ 4 ∶ 2 ,V/V/V)为溶剂体系,通过高速逆流色谱进行分离,得到的目标单体采用高效液相色谱分析纯度,核磁共振谱氢谱、质谱分析确证化学结构。结果 进样300 mg钩吻总碱,分离得到生物碱单体为75 mg,经结构鉴定确证为钩吻素子,高效液相色谱分析得到质量分数为99.2 %。结论 高速逆流色谱技术可高效分离纯化钩吻素子。     

361 小青龙汤对小鼠CD4^＋T细胞生成Th1／Th2特异性细胞因子的调节作用

探讨了小青龙汤对BALB／c小鼠脾细胞中CD4^＋T细胞的影响。添加小青龙汤后CD4^＋T细胞数尽管没有变化，但其表面蛋白CD69表达减少，IL-2及IL-2R-2mRNA表达增加。IL-4mRNA减少，IFN-Y明显增加。     

钩吻生物碱成分的薄层色谱研究

目的对钩吻根、茎、叶、花、果实生物碱进行薄层色谱研究。方法以钩吻碱甲和钩吻素子为对照,对不同产地钩吻的根、茎、叶、花、果实生物碱进行薄层色谱研究,考察了5种提取方法、4种展开系统、5种薄层板、3种检视方式以及不同温度和湿度对钩吻生物碱薄层色谱的影响。结果以方法 5提取,过PXC柱(阳离子交换树脂),以三氯甲烷-甲醇(9∶1)为展开系统,稀碘化铋钾试液-10%三氯化铁乙醇溶液(10∶1)混合溶液为显色剂,钩吻生物碱薄层色谱信息保留较多,分离较好,薄层效果最佳。结论该方法可作为鉴别钩吻的较专属鉴别方法。     

大鼠肝微粒体中钩吻素子UPLC-MS/MS法测定与酶促反应动力学研究

目的建立UPLC-MS/MS法测定大鼠肝微粒体中钩吻素子的浓度及其酶促反应动力学研究。方法优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系,采用UPLC BEH C18色谱柱,流动相为甲醇-水(两者均含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为1μL,质谱采用正离子,MRM模式检测孵育体系中钩吻素子的浓度,并应用Linewearve-Burk作图分析数据,计算酶促动力学常数。结果钩吻素子在0.5～30μM范围内线性良好,回归方程为y=0.1544x-0.0593(r=0.9939,n=5)。钩吻素子的酶促反应动力学参数Km为14.2μmol/L,Vmax为303.03pmol/(min.mg.pro)以及肝清除率CLint(Vmax/Km)为21.37μL/(min.mg.pro)。结论该方法简单、快速、可靠,适应于钩吻素子的体外代谢研究。     

蓝萼甲素对小鼠脾细胞Th1/Th2型5种细胞因子水平的影响

目的：探讨蓝萼甲素对小鼠脾细胞Th1/Th2型细胞因子水平的影响。方法：采用Cytometric Bead Array (CBA)法检测蓝萼甲素对小鼠脾细胞Th1/Th2型5种细胞因子(IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-5)水平的影响。结果：蓝萼甲素对ConA诱导的Th1细胞来源的细胞因子(IL-2，IFN-γ，TNF-α) 和Th2细胞来源的细胞因子(IL-4，IL-5)的产生均有显著的抑制作用，且蓝萼甲素对Th1细胞来源的细胞因子的抑制作用要强于Th2细胞来源的；对未经ConA活化的小鼠脾细胞，蓝萼甲素对IL-2，IFN-γ和TNF-α的产生有抑制作用，而对IL-4，IL-5则有促进作用。结论：蓝萼甲素的免疫抑制作用可能与其对Th1/Th2型细胞因子的影响有关。     

健儿强身膏对哮喘儿童Th1/Th2类细胞因子的免疫调控作用

笔者采用ELISA方法检测哮喘患儿服用健儿强身膏前后外周血中CD4^＋Th1细胞因子IFN-y和Th2细胞因子IL-4的表达情况。旨在通过研究健儿强身膏对哮喘患儿Th1／Th2细胞的免疫调节作用,探讨其防治小儿哮喘的作用机制,为临床应用提供理论和实验依据。     

钩吻对小鼠造血功能的影响

目的 :观察钩吻对小鼠造血功能的影响。方法 :利用环磷酰胺 (Cy)抑制骨髓及辐照致骨髓损伤造模 ,检测钩吻对Cy所致骨髓抑制小鼠外周血细胞 ,红细胞 ,血小板 ,脾重和骨髓有核细胞的影响及对辐照致骨髓损伤小鼠CFU -S的影响和对小鼠生存的保护作用。结果 :钩吻对Cy骨髓抑制小鼠外周血细胞、红细胞、血小板及骨髓有核细胞均有明显提升作用(P<0 01) ,并显著提高生存率(P<0 05)和CFU -S数(P<0 01) ,而对脾重影响差异无显著性(P>0 05)。结论 :钩吻对抗肿瘤药物及放射线所致的骨髓抑制和/或损伤动物的造血功能有保护作用     

益气护卫汤对哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子水平的影响

益气护卫汤是著名中医内科专家洪广祥教授根据哮喘的发病特点创制的用于哮喘防治的有效方剂[1] ,以往的实验研究表明益气护卫汤可以降低哮喘豚鼠的气道高反应性(ＡＨＲ) ,显著延长豚鼠卵蛋白雾化引喘潜伏期[2 ] ;降低豚鼠血浆可溶性细胞间粘附分子 1(ｓＩＣＡＭ 1)水平[3 ] ;调节Ｔ淋巴细胞亚群比例平衡 ,并能有效抑制Ｔ细胞活化[4] 。本研究通过观察益气护卫汤对哮喘小鼠肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中白介素 4 (ＩＬ 4 )、γ 干扰素 (ＩＦＮ γ)水平的变化 ,探讨其对Ｔｈ1/Ｔｈ2细胞亚群反应的影响及防治哮喘的作用机理。1　材料1.1　药物及试…     

ROS/JNK/FoxO3a信号通路在钩吻素子抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的 以人结肠癌细胞HCT-116细胞为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻素子（Kou,0,100,200,400 μmol·L^-1）,进一步探讨Kou对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子作用机制。方法 Kou体外干预HCT-116细胞24 h后,用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡及活性氧（ROS）的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测叉头蛋白O3a（FoxO3a）mRNA表达情况,采用小干扰核糖核酸（siRNA）进行细胞转染,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测FoxO3a靶基因蛋白的表达情况。结果 与空白组比较,Kou处理明显降低了HCT-116细胞的增殖率（P<0.05,P<0.01）,呈剂量依赖性。与空白组比较,Kou处理引起细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导HCT-116细胞的凋亡（P<0.05,P<0.01）,其作用与Kou的浓度呈正相关;FoxO3a siRNA干扰显著降低了FoxO3a及其下游相关细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B（p27）和细胞死亡调解子（Bim）蛋白的表达（P<0.01）。与空白组比较,Kou处理诱导了HCT116细胞中氨基末端激酶（JNK）的活化（P<0.01）,JNK特异性抑制剂（SP600125）处理抑制了Kou诱导的FoxO3a活化及其下游相关蛋白的表达（P<0.01）;乙酰半胱氨酸（NAC）处理显著降低了Kou诱导的ROS水平和JNK信号的活化（P<0.01）。结论 Kou能有效抑制结肠癌细胞HCT-116的增殖,促进HCT-116细胞的凋亡,其机制可能与其作用于ROS/JNK/FoxO3a途径有关。     

益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的影响

目的探讨益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞的影响。方法用流式细胞仪检测18例经益气解毒方加常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(观察组)及l5例常规治疗的中晚期鼻咽癌患者(对照组)外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞比例,RT-PCR法检测Foxp3 mRNA和ROR-γt mRNA转录水平,ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)水平。结果观察组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例和Foxp3 mRNA的相对表达量均低于对照组(P0.05),而Th17细胞占CD4+T细胞的数量比例和ROR-γt mRNA的相对表达量均高于对照组(P0.05);观察组患者血清IL-6水平高于对照组(P0.05),而TGF-β水平低于对照组(P0.05)。结论益气解毒方可影响中晚期鼻咽癌CD4+CD25+调节性T细胞的比例与功能,增强Th17细胞的分化,其机制可能是通过调节IL-6和TGF-β水平而逆转鼻咽癌免疫耐受。     

平哮合剂对实验性哮喘豚鼠Th1/Th2类细胞因子影响的研究

1 实验材料动物:健康豚鼠40只,体重250～350g,雌雄各半,由江苏省中医院临床实验室提供.药物:平哮合剂由江苏省中医院药剂科提供,制剂批准文号:宁卫制97-334号,每瓶250ml(相当于生药201g).醋酸地塞米松片由浙江仙居制药股份有限公司提供,批号:030404.主要试剂及器材:试剂:卵蛋白片由中国医药(集团)上海化学试剂站提供,批号:F981130.IFN-γ和IL-4试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司.超声雾化器:s-888E型,中外合资南京道芬电子有限公司生产.     

化湿解毒法对慢性乙型肝炎患者Th1／Th2类细胞因子表达的影响

目的：观察化湿解毒方对慢性乙型病毒性肝炎（HBV）患者Th1／Th2类细胞因子表达的影响。方法：将入选的58例HBV患者分别在应用化湿解毒法治疗前后取血，应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定慢性HBV患者血清中IFN-γ，IL-4水平。结果：治疗前患者血清中IFN-γ水平较高，治疗后则下降明显（P〈0．05），而IL-4水平治疗前后无明显变化（P〉0．05）。结论：化湿解毒法对慢性乙型肝炎患者血清中IFN-γ表达有抑制作用，从而使Th1／Th2比例趋于平衡，而有利于病情的恢复。     

中药对Th1/Th2细胞因子平衡调节作用的研究进展

概述中药对Thl/Th2平衡的调节作用,主要包括中药对自身免疫疾病Th1/Th2平衡的影响、对肿瘤Th1/Th2平衡的影响、对变态反应性疾病Th1/Th2平衡的影响以及对不同中医证型Th1/Th2平衡的影响等。     

常绿钩吻碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨常绿钩吻碱促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:常绿钩吻碱体外培养HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察HT-29细胞的凋亡情况,蛋白印迹法(western-blot)观察HT-29细胞的B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:常绿钩吻碱可抑制HT-29细胞增殖,8μg/mL常绿钩吻碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达58.81%。DAPI染色法观察到常绿钩吻碱可促进HT-29细胞凋亡。western-blot法观察到常绿钩吻碱能降低HT-29细胞Bcl-2蛋白表达(P<0.05),对Bax蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:常绿钩吻碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bcl-2/Bax途径诱导细胞凋亡相关。     

平和质慢性HBV携带者T淋巴细胞亚群及Th1/Th2型细胞因子分析

目的:通过对平和质慢性HBV携带者外周血中T淋巴细胞亚群及Th1/Th2型细胞因子的分析,了解平和质慢性HBV携带者的免疫状况。方法:对175例平和质慢性HBV携带者采用流式细胞术和酶联免疫吸附法,分别检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及Th1/Th2型细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10)水平。结果:与健康人比较,平和质慢性HBV携带者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞百分率与CD4+/CD8+比值明显降低,Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ水平均明显偏低,而CD8+T淋巴细胞百分率及Th2型细胞因子IL-4和IL-10水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:平和质的慢性HBV携带者,其机体细胞免疫功能仍表现为明显的低下与失衡。     

益肾活血方对狼疮性肾炎患者Th1/Th2细胞因子的影响

目的:观察益肾活血方对狼疮性肾炎患者临床疗效及对Th1/Th2细胞因子的影响,探讨益肾活血方治疗狼疮性肾炎的机制。方法:将60例狼疮性肾炎患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组给予单纯西药治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用益肾活血方,疗程12周。比较治疗前后LN的临床症状及体征,24小时尿蛋白、血浆白蛋白、肝肾功能(Cr、BUN、ALT),检测外周血液中白介素2(IL-2)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、γ-干扰素(INF-γ)水平。结果:治疗组总有效率为90.0%,对照组总有效率73.3%,治疗组与对照组比较有统计学意义(P0.05);两组治疗后24h尿蛋白、血清白蛋白、Cr、BUN、ALT较本组治疗前具有统计学意义(P0.01),治疗组治疗后与对照组治疗后比较差异有统计学意义(P0.05);两组治疗后IL-6、IL-10、INF-γ较治疗前降低,IL-2较治疗前升高,与治疗前有非常显著性差异(P0.01),治疗组与对照组比较有显著性差异(P0.05)。结论:益肾活血方配合西药治疗狼疮性肾炎优于单纯西药治疗,益肾活血方对狼疮性肾炎患者Th1/Th2细胞因子具有调节作用。