酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

鸿雁骨胶原多肽制备及其抗氧化活性研究

以鸿雁（Anser cygnoides）骨骼为原料,采用复合酶酶解制备雁骨胶原多肽,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化酶解工艺。以水解度为指标,确定木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶为最佳酶组成复合酶,质量比为1∶2∶1,最佳酶解工艺为：酶解温度50℃、pH 7.1、加酶量6 100 U/g、酶解时间5 h,此时水解度为26.34%。通过超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力测定,发现雁骨胶原多肽的抗氧化活性与胶原多肽质量浓度成正相关,当底物浓度为6 mg/mL时,超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除率分别为59.21%、51.82%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和分子排阻色谱法测定复合酶酶解制备的雁骨胶原多肽分子量为851 Da～11 092 Da。氨基酸组成分析显示雁骨胶原多肽富含甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及天冬氨酸等,这些特定的氨基酸与胶原多肽的抗氧化活性相关,为雁骨的开发利用提供参考。     

酶解制备菜籽蛋白肽条件的优化

选用碱性蛋白酶Alcalase对菜籽蛋白进行水解。在单因素试验研究不同处理条件对菜籽蛋白水解度和菜籽蛋白肽得率的影响的基础上,建立单因素对菜籽蛋白肽水解度影响的数学模型,通过响应面分析对酶解条件进行优化。确定菜籽蛋白酶解最佳工艺条件为:底物质量分数为4.49%、pH8.45、温度55℃、酶解时间180min、加酶量5000U/g pro,在该优化条件下,菜籽蛋白水解度理论值可达15.00%,实际值为14.71%。     

核桃雄花多肽酶解法制备工艺

为优化核桃雄花多肽酶解法制备工艺,该试验以响应面法对核桃雄花多肽制备工艺进行研究。对中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和风味蛋白酶进行酶种类筛选及复配,以多肽得率为指标,通过单因素试验及响应面法研究复合酶添加总量、酶解时间、酶解温度、液料比对核桃雄花多肽得率的影响。结果表明,影响核桃雄花蛋白的多肽得率的因素顺序依次为酶解温度>酶解时间>复合酶添加总量>液料比。核桃雄花的最优酶解工艺为液料比8∶1(mL/g)、复合酶添加总量51 500 U/g（木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶质量比为25∶6∶20）、酶解温度45℃、酶解时间3.0 h,实际多肽得率达到30.00%。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备多肽的工艺研究

选用Protex-6L碱性蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成多肽,以多肽肽得率为考察指标．对其酶解工艺进行研究。基于单因素实验,考察了酶解条件：pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用DesignExpert7．1．1软件设计响应面对酶解条件进行优化分析。结果表明：pH9．37、酶解温度55℃、底物质量分数7．0％、加酶量5000．02U／g条件下酶解4．76h,多肽得率可达到91．37％。     

酶解制备高得率大豆肽工艺条件优化

用Alcalage碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽.通过单因素实验研究了底物质量分数、酶解pH、酶解温度、加酶量对蛋白水解度和大豆肽得率的影响,并通过响应面分析法对酶解条件进行了优化,得出最佳条件为:底物质量分数5%,酶解pH9.5,酶解温度55℃,加酶量5 400 U/g蛋白.在此条件下,大豆分离蛋白水解度为20.16%,大豆肽得率为92.30%.     

响应面法优化辣椒籽抗氧化肽的酶解制备工艺

以辣椒籽蛋白质为原料,采用酶法制备辣椒籽抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为评价指标,在单因素试验基础上,通过响应面法优化辣椒籽抗氧化肽的酶解制备工艺。结果表明：碱性蛋白酶为最适蛋白酶,最优酶解工艺参数为酶添加量0.11 g(以0.30 g辣椒籽蛋白质质量计)、pH 9.0、酶解温度55℃、酶解时间3.75 h,在此条件下,DPPH自由基清除率达到37.71%±0.83%。     

酶解菜籽粕制备多肽的研究

本试验以菜籽粕为原料,从四种蛋白酶中挑选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶对菜籽粕进行同步复合酶解。分别考察了不同的加酶量、酶比、料液比和时间对多肽得率的影响,并利用响应面分析法对混合蛋白酶水解菜籽粕的条件进行了优化。结果表明,在加酶量固定为4500 U/g,温度50℃,pH为8.0,料液比1:8及碱性蛋白酶:中性蛋白酶为3:1条件下酶解6.5 h,可使多肽得率达到54.89%。     

响应面优化酶法制备芝麻饼粕ACE抑制肽研究

以芝麻饼粕为原料酶法制备具有降血压活性的血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,在单因素试验基础上进行酶解条件的响应面优化,结果显示芝麻饼粕ACE抑制肽酶法制备的最优条件为p H 8.88,酶解温度46℃,底物质量浓度85 mg/m L,酶解时间24 min。高效液相色谱测得ACE抑制肽的IC50值3.03 mg/m L,进一步经过膜分离,发现经过碱性蛋白酶酶解后,芝麻多肽从平均相对分子质量8 949.62降低到1 721.90,其中酶解液中相对相对分子质量大于10 000的物质仅占1.65%,小于2 000的物质占73.83%,为进一步研究芝麻饼粕ACE抑制肽的制备提供参考。     

猪骨胶原蛋白多肽制备过程中的脱色研究

对猪骨泥进行酶解,探讨酶的种类对酶解效果(水解度和酶解液颜色)的影响.在单酶水解的基础上,探讨复配酶对酶解效果的影响.结果表明:先用风味蛋白酶水解4h,再加入木瓜蛋白酶水解2h,双酶活力比为2:1,此时酶解效果最好.以脱色率和肽氮类物质损失率为考察指标进一步研究酶解液的脱色工艺,较优的脱色条件为添加4%的颗粒状活性炭室温下脱色1.5h,脱色率达到73.29%,肽氮类物质损失率为11.97%.     

罗非鱼骨胶原钙螯合肽的酶解制备

本研究以罗非鱼骨胶原蛋白为原料酶解制备具有良好钙螯能力性的活性肽。以钙螯合活性为指标,将罗非鱼骨架经过脱肉、脱钙等前处理获得的罗非鱼骨胶原蛋白通过木瓜蛋白酶酶解制备得到罗非鱼骨胶原蛋白肽,通过单因素及正交试验对制备罗非鱼骨胶原螯合肽的酶解工艺进行优化。同时对最优条件下酶解获得的罗非鱼骨胶原钙螯合肽的分子量及氨基酸组成进行分析。结果表明,最优酶解工艺条件为:酶解时间4.5 h,pH 6.5,酶解温度62℃,酶底比0.6%。罗非鱼骨胶原钙螯合肽是一类小分子功能活性肽。同时通过对比罗非鱼骨胶原钙螯合肽及其钙-肽螯合物氨基酸组成,发现胱氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸等氨基酸对活性肽的钙螯合能力起到重要作用。     

白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化

为减少淡水鱼加工过程中副产物对环境的污染和资源的浪费、提高淡水鱼的附加值,对白鲢鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行研究。以白鲢鱼骨和氯化钙为原料,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,考察温度、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因子二次正交旋转设计优化,得到鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为温度42 ℃、时间38 min、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比2.1∶1、pH 6.8,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为80.4%和12.1%。对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其总氨基酸含量为61.03%,且具备典型的胶原蛋白氨基酸组成特征。红外光谱扫描和电镜扫描观察表明：钙离子与胶原多肽发生了螯合反应,结合方式有离子结合、配位结合和吸附作用。     

酶法制备芝麻粕多肽的工艺研究

通过单因素试验和正交试验分析,确定碱性蛋白酶Alcalase水解芝麻粕蛋白的最佳水解工艺条件为底物浓度70g/L、温度65℃、[E]/[S]为6%、pH8.0、水解时间3h。在此水解条件下,水解液水解度达到了31.3%。     

复合酶分步水解法制备汉麻多肽及其抗氧化特性研究

汉麻籽由于其营养丰富,且不含有胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子,近年来成为食品、医药等领域的研究热点。本研究以汉麻分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶分步酶解的方式对其进行酶解,通过响应面优化酶解参数,制取汉麻多肽。并采用分光光度计测定其DPPH自由基清除率与铁还原能力,对汉麻多肽抗氧化能力进行评价。结果表明,采用先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶的酶解方式,制得的汉麻多肽含量最高。酶解最优条件为：第一步碱性蛋白酶水解：底物浓度为5%,酶解时间2 h,pH为8.5,酶解温度为54℃,加酶量为10100 U/g;第二步木瓜蛋白酶水解：pH为6.5,温度为50℃,加酶量为5000 U/g,酶解时间1.5 h,最终获得汉麻多肽混合物的水解度为24.48%,肽含量为8.48 mg/mL;汉麻多肽的DPPH自由基清除率为82.32%,与汉麻分离蛋白相比具有较强的铁还原能力,表明汉麻多肽具备较强的抗氧化能力。本研究为汉麻多肽的开发利用提供理论基础。     

复合酶水解猪血红蛋白制备富血红素多肽

以木瓜蛋白酶和AS1398中性蛋白酶组成的复合酶对猪血红蛋白进行水解,制备富血红素多肽,考察底物质量分数、加酶比例、水解pH值和水解温度等因素对水解率、蛋白质回收率、血红素含量等指标的影响。结果表明：底物质量分数是影响水解率和蛋白质回收率指标的最重要因素;pH值是影响血红素含量指标的最重要因素;复合酶水解猪血红蛋白制备富血红素多肽的最佳工艺条件为底物质量分数6%、pH8、水解温度55℃、加酶比例5:5(木瓜蛋白酶:中性蛋白酶)。在此工艺条件下,猪血红蛋白水解产物具有较高的蛋白质回收率和血红素含量。     

功能性骨胶原多肽提取前处理的脱脂脱钙条件研究

将牛骨制备成骨泥为试验材料,对提取牛骨胶原多肽的前处理脱脂脱钙条件进行研究。比较石油醚、无水乙醇、正己烷3种脱脂剂的脱脂效果;在单因素试验基础上利用二次正交旋转组合设计优化脱钙条件。结果表明:脱脂工艺最佳条件为无水乙醇作为骨泥脱脂剂,骨泥与无水乙醇料液比1:20(g/mL)、150r/min振荡浸泡脱脂24h,骨泥脱脂率可达97.46%。骨泥柠檬酸脱钙工艺最佳条件为柠檬酸浓度0.43mol/L、脱钙时间16h、料液比1:21(g/mL),脱钙率可达96.53%。     

复合酶分步酶解法提取牛骨胶原蛋白工艺的研究

以牛骨胶原蛋白初步酶解产物为研究对象,以水解度为指标,采用甲醛滴定法监测深度酶解的进程,对比分析不同的酶解条件对水解度的影响,确定了中性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的酶解条件。通过正交试验结果表明:采用中性蛋白酶和风味蛋白酶加酶量分步水解牛骨蛋白的最佳条件为物料比1∶750,起始pH值是6.5,先用中性蛋白酶55℃酶解3h后,再用风味蛋白酶于55℃继续酶解2h。此时水解度达到63.6%。     

云南鲷鱼骨胶原蛋白的制备及其理化性质

以云南鲷鱼骨为原料,采用低温酸法提取制备鱼骨中的酸溶性胶原蛋白（acid-soluble collagen,ASC）, 并对ASC的氨基酸组成、亚基组成、红外吸收、紫外吸收、热稳定性、X射线衍射、微观结构、多肽片段以及溶解 性进行了全面的分析。氨基酸组成表明ASC主要含甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸,而酪氨酸、蛋氨酸和半胱氨酸含量 较低;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示ASC为Ⅰ型胶原蛋白;ASC在230 nm波长处有最大紫外吸收 峰;傅里叶变换红外光谱和X射线衍射图谱表明ASC分子排列紧凑,保持了其原有的三螺旋结构;差示扫描量热分 析结果显示ASC的变性温度分别为86.5 ℃和226.2 ℃,有较好的热稳定性;扫描电子显微镜显示ASC分子分布均匀、 表面光滑呈三维立体结构;多肽片段分析结果显示鱼骨胶原的氨基酸构成主要为Gly-X-Y,符合胶原蛋白的一级结构 的特点;在pH值小于4的条件下,ASC溶解度较高,当NaCl质量分数大于4%时,ASC溶解度剧烈下降。     

Bacillus cereus胞外胶原蛋白酶水解牛骨胶原蛋白的动力学

针对从细菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MBL13中提取得到的胶原蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白的动力学性质进行研究。考察底物质量浓度、时间、温度、酶质量浓度、pH值5个因素对酶解水解度的影响,优化酶解的条件;并对酶解过程的动力学进行分析。结果表明:最佳的酶解工艺参数为底物质量浓度30g/L、时间6h、温度45℃、初始酶液质量浓度为0.35g/100mL、pH8.0。在此基础上推导出酶解动力学方程为:V=9.3633[S]/(114.785+[S])。并在波长230nm和570nm处对酶解过程动态变化进行测定,表明胶原多肽含量不断增加的动态变化。