甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化。使用NA蛋白以100g/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证。结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09NA基因,长度约1400bp。将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50kd。采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化。用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11。Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原。结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础。     

神经氨酸酶抑制剂抗流感病毒的研究进展

  神经氨酸酶(NA)是流感病毒表面一种蘑菇云状四聚体结构的包膜糖蛋白,其抑制剂对高致病性流感病毒的各亚型均具有抑制作用,且其安全性和耐药性良好,可用于流感病毒的预防和治疗。笔者在归纳总结近年来该领域国内外文献的基础之上,对神经氨酸酶及其抑制剂的分类、构效关系以及国内外研究现状进行总结,有助于我们更好地利用现有条件设计并合成出活性更好、选择性更高的抗流感药物。     

绵马贯众中流感病毒H_5N_1神经氨酸酶抑制剂的筛选

目的:筛选绵马贯众中流感病毒H_5N_1神经氨酸酶(NA,neuraminidase)抑制剂。方法:将绵马贯众中已分离得到的99个化合物建立配体库,从Protein Data Bank(PDB)中下载NA(H_5N_1)的X-ray晶体三维结构文件,采用AutoDock Vina软件筛选出与NA有较好结合作用的化合物,并通过神经氨酸酶抑制实验验证筛选出的化合物对NA的作用。结果:通过分子对接筛选出5个与NA有较好结合的化合物,神经氨酸酶抑制实验结果表明候选化合物中Dryocrassin ABBA对NA的抑制作用最强,IC₅₀为(18.59±4.53)μmol/L。结论:绵马贯众中化合物Dryocrassin ABBA具有较好的抗H_5N_1流感病毒神经氨酸酶的作用。     

兰紫解毒糖浆抗甲型H1N1流感病毒作用的机理研究

目的探讨兰紫解毒糖浆抗甲型H1N1流感病毒作用机理研究。方法将2016年6月—2018年6月收治的62例甲型H1N1流感患者随机分为对照组和试验组,每组31例。对照组予磷酸奥司他韦胶囊75 mg,1次/d口服;试验组加用兰紫解毒糖浆,每次5～30 m L,每日3次,饭后口服。两组均维持治疗5 d。检测肺损伤标志物[细胞因子Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)、肺表面活性蛋白D(SP-D)]、外周血NK细胞和T淋巴细胞亚群、细胞因子[白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)]变化。结果与治疗前,两组血清KL-6、SP-D降低(P0.01),外周血NK、CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+升高(P0.05),IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4降低(P0.01);与对照组比较,试验组血清KL-6、SP-D较低(P0.01),外周血NK、CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+较高(P0.05),IFN-γ、IFN-γ/IL-4较低(P0.01),IL-4较高(P0.01)。结论兰紫解毒糖浆可通过调节外周血T淋巴细胞表达、纠正Th1/Th2失衡发挥抗甲型H1N1流感病毒作用。     

中国H5N1流感病毒神经氨酸酶的进化分析

目的研究新型甲型H5N1流感病毒神经氨酰酶的进化规律。方法采用MEGA软件对H5N1神经氨酸酶氨基酸序列进行种系发生树的构建及序列同源性的分析。结果发现地域对流感病毒的进化有直接影响。同源比对显示神经氨酰酶存在部分高变位点。结论为基于受体的抗流感药物设计提供理论基础。     

甲型H1N1流感患者的护理

目的：探讨甲型H1N1流感患者的护理方法。方法：回顾分析我院2009年8月至2010年1月收治的112例患者的临床资料。结果：112例患者治愈出院。结论：对甲型H1N1流感患者在治疗的同时,有针对性采取护理措施以及严格的消毒隔离制度,是救治甲型H1N1流感的保证。     

中药抗甲型H1N1流感病毒的研究概况

<正>2009年3月18日墨西哥和美国等国家先后出现甲型H1N1流感的流行,同年6月11日世界卫生组织将警告级别升至最高级别6级,宣布全球进入流感大流行阶段,疫情严重程度为中等。此次流感的病原体是由人流感病毒、禽流感病毒和猪流感病毒重组而成,为一种以前在人或动物身上从未发现过的新型H1N1流感病毒。它所引起的并发症严重,病     

重症甲型H1N1流感病毒肺炎的机械通气策略

甲型H1N1流感为急性呼吸道传染病,人群普遍易感,少数可发展为危重症甲流,病死率极高.顽固性低氧血症是甲流重症肺炎主要临床表现,机械通气技术能有效地纠正缺氧、维持患者呼吸功能,为原发病争取治疗时间.目前对于甲流重症肺炎患者机械通气的时机、模式、参数设置等方面存在较大争议,本文就机械通气策略做一介绍.     

金振口服液抗甲型H1N1流感病毒作用实验研究

目的 观察金振口服液对甲型H1N1流感病毒抑制作用.方法 采用体外抗病毒实验,观察金振口服液对流感病毒的抑制作用;采用体内实验,以流感病毒感染小鼠,观察小鼠生存时间、死亡率及肺组织病变程度.结果 金振口服液体外对甲型H1N1流感病毒有一定抑制作用,体内则能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺湿质量(P＜0.05、0.01),减轻肺组织病变程度.结论 金振口服液体内外均有一定的抗甲型H1N1流感病毒作用.     

探讨甲型H1N1流感的防治措施

甲型H1N1流感是由变异后的新型流感病毒所引起的急性呼吸道传染病。甲型H1N1流感病人为主要传染源,主要在人类中传播。虽然猪体内已发现甲型H1N1流感病毒,但目前尚无证据表明动物为传染源。感染途径主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播,也可通过口腔、鼻腔、眼睛等处粘膜直接或间接接触传播。接触患者的呼吸道分泌物、体液和被污染的物品亦可能造成传播。人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感。     

胶原纤维吸附剂对虎杖提取物中鞣质的选择性去除

目的:研究胶原纤维吸附材料对虎杖中鞣质的选择性去除作用,以及对鞣质的吸附和解吸性能。方法:以皮胶原纤维为原料,通过戊二醛交联反应制备吸附材料。将此吸附材料用于选择性去除虎杖提取物中的鞣质,并用明胶-浊度法、明胶-紫外分光法和HPLC进行分析检测。采用不同浓度的乙醇水溶液对吸附的鞣质进行静态洗脱试验,确定洗脱剂的浓度。在此基础上,在固定床中进行动态吸附和解吸试验,并采用明胶-浊度法对鞣质的去除状况进行检测。结果:所制备的胶原纤维吸附材料对鞣质具有较高的吸附选择性,可以完全除去虎杖提取物中的鞣质,而有效成分(白藜芦醇)基本不损失;该吸附材料吸附鞣质后可用30%乙醇水溶液解吸,解吸后可重复使用。结论:胶原纤维吸附材料可用于虎杖提取物中鞣质的高选择性脱除。     

热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的研究

目的：研究热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒的作用。方法以奥司他韦为阳性对照,采用CPE和MTT法观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒的抑制作用。结果 CPE法结果表明热毒宁注射液最大无毒浓度（TC0）为16.2 mg/mL,半数中毒浓度为（TC50）为（24.5±8.1）mg/mL;MTT法测定结果表明热毒宁注射液TC0为16.2 mg/mL,TC50为（21.7±9.4）mg/mL。热毒宁注射液体外抑制甲型H1N1流感病毒结果显示,CPE法和MTT法热毒宁注射液作用感染细胞1次组半数有效浓度（IC50）为（900.0±173.2）、（933.3±57.7）μg/mL,治疗指数（TI）为27.2、23.2;热毒宁注射液作用感染细胞3次组IC50为（666.7±115.5）、（866.7±208.1）μg/mL,TI为36.7、25.0。结论热毒宁注射液具有明显体外抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

欧意清热解毒软胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 观察欧意清热解毒软胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用,寻求有效的抗甲型H1N1流感病毒作用的中药方剂,为临床治疗甲型H1N1流感病毒感染提供理论依据.方法 观察甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞后引起的细胞病变效应(CPE),并用MTT法检细胞活性,采用治疗指数(TI)作为药物体外抗病毒效果的评价指标.以磷酸奥司他韦胶囊(达菲)作为阳性对照药物,从药物对病毒入侵细胞的阻断作用、直接灭活作用及增殖抑制作用3种方式检测欧意清热解毒软胶囊抗甲型H1N1流感病毒的效果.结果 清热解毒软胶囊可以明显抑制甲型H1N1流感病毒引起的细胞病变效应(CPE),对甲型H1N1流感病毒入侵细胞的阻断作用、直接灭活作用及增殖抑制作用的TI分别为(15.5±0.71),(0.55±0.07),(6.4±1.27);达菲3种作用方式的TI分别为(0.4±0.14),(1.88±0.29),(4.6±0.15).结论 与达菲组比较,清热解毒软胶囊体外具有明显的阻断甲型H1N1流感病毒入侵细胞作用(P＜0.01),其抗流感病毒主要机制可能是阻断病毒入侵细胞,对细胞具有保护作用.进一步的效果需要体内实验证实.     

虎杖药材UPLC特征图谱研究

目的:建立虎杖药材的超高效液相色谱(UPLC)特征图谱的质量评价方法.方法:采用Waters Acquity UPLCBEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相乙腈-0.5％乙酸水溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温为35℃,检测波长290 nm.采用聚类分析,主成分分析,特征图谱相似度分析3种方法对38批不同产地的虎杖药材UPLC特征图谱进行评价.结果:建立了虎杖药材的UPLC特征指纹图谱共有模式,共标定了11个共有峰,指认其中4个共有峰为虎杖苷、白藜芦醇、大黄素和大黄素甲醚.36批虎杖药材相似度＞0.9;2批药材相似度为0.733,0.896.聚类分析和主成分分析结果表明可将药材分为3类,不同类别间质量有差异.结论:本研究建立的虎杖药材的特征图谱特征性和专属性强,且方法快速、简便、可靠,可用于全面控制市场流通虎杖药材的质量.     

甲型H1N1流感的应对措施

目的：探讨甲型H1N1流感的应对措施。方法：对符合诊断标准的57例甲型H1N1流感患者分别从医院、病区、患者3个角度给予制定岗位责任制、成立发热门诊、成立隔离病区、合理公布病区、医务人员自身防护、病区消毒处理、健康宣教、饮食指导等应对措施。结果：57例患者经治疗全部痊愈,痊愈率达100.00%。住院天数最短为5天,最长为11天,平均6.8天;病毒转阴天数最短为3天,最长7天,平均5.3天。结论：从医院、病区、患者3个角度给予甲型H1N1流感有针对性的应对措施有助于患者康复。     

降阶梯治疗危重症新型A/H1N1流感的临床应用

目的使用降阶梯方案治疗发热隔离病区危重症新型A/H1N1流感,评价其疗效。方法选取2009年10月26日—2010年2月26日本院发热隔离病区危重症新型A/H1N1流感患者6例,随机分为2组,传统治疗组3例以头孢夫辛钠+左氧氟沙星为经验性治疗方案,降阶梯治疗组3例以亚胺培南/西司他丁+去甲万古霉素作为经验性治疗方案,比较2组患者的初始治疗恰当率、感染控制率和感染控制所需时间。结果降阶梯治疗组和传统治疗组的初始治疗恰当率分别为100%和33%(P0.01),治疗有效率分别为100%和33%(P0.05),感染控制所需时间分别为(7.3±2.8)d和(13.4±4.3)d(P0.05)。结论对于危重症新型A/H1N1流感使用降阶梯治疗可获得较好疗效。且亚胺培南/西司他丁+去甲万古霉素作为危重症新型A/H1N1流感起始经验性用药,可防止病情迅速恶化,随后根据病原学及临床效果换用针对性抗菌药物的降阶梯疗法有其合理性。     

黄芩苷体外抗流感病毒作用的研究

[目的]通过观察黄芩苷对甲型流感病毒(H1N1)感染人肺癌细胞株(A549细胞株)的作用,探讨其在体外抗甲型流感病毒的作用。[方法]通过细胞病变效应(CPE)观察黄芩苷对病毒致细胞病变作用的影响,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测药物对人肺癌细胞株A549的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)。检测药物不同给药方式和作用时间的吸光度,比较各组抗病毒有效率,找出黄芩苷最佳抗病毒作用方式。采用Probit回归计算最佳作用方式时其对病毒感染的半数抑制浓度(IC50)以及治疗指数(TI)。[结果]在7.920~0.495 mg/L范围内的黄芩苷作用24~48 h,对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,细胞存活率明显高于病毒感染组。其中,抗病毒生物合成组(Ⅲ)在给药后48 h,其抗病毒有效率最高,浓度为3.960 mg/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达89.107%。计算该条件下黄芩苷IC50为1.399 mg/L,TI为22.608。[结论]黄芩苷在一定浓度下有抗病毒作用,主要是通过抑制病毒在感染的A459细胞内生物合成而发挥抗病毒作用。     

热毒宁注射液抗甲型H1N1流感病毒作用机制研究

目的 研究热毒宁注射液体内抗甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠制备肺炎模型,观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均存活时间、存活率、肺指数、病毒载量及细胞因子的影响。结果 与模型组比较,热毒宁注射液显著提高病毒感染小鼠的存活率、延长小鼠平均存活时间（P＜0.05、0.01）;显著降低病毒感染小鼠肺指数、肺组织病毒载量（P＜0.05、0.01）;提高肺组织γ干扰素（IFN-γ）水平,降低白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结论 热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高IFN-γ水平,降低IL-6、TNF-α水平有关。     

基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究

目的: 建立快速准确的头花蓼与尼泊尔蓼药材的分子标记鉴定方法。方法: 通过RAPD随机引物筛选,获得头花蓼特异的RAPD 分子标记片段,经克隆、测序,重新设计特异性引物转化形成稳定的SCAR标记。结果: 获得2条稳定扩增的头花蓼特异片段Z300,Z1100,根据该2特异片段序列设计4对特异引物,分别对头花蓼与尼泊尔蓼药材DNA进行扩增,其中引物Z1-2可从头花蓼药材中扩增获得约300 bp 的片段,而尼泊尔蓼药材则未扩增出该片段。结论: 引物Z1-2成功将Z300片段转化为SCAR分子标记,可作为头花蓼与近缘种尼泊尔蓼药材分子鉴定的依据。     

银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用

为探讨银花平感颗粒(YHPG)体内抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,采用滴鼻感染ICR小鼠建立流感病毒肺炎模型,感染后第3天和第7天测定各组动物肺指数并观察肺组织病理变化;采用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞技术,观察各组肺组织病毒载量以及外周血T细胞亚群(CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺)的变化。结果表明,YHPG(15,30 g·kg^-1)剂量组在感染后第3天和第7天均能显著降低流感病毒感染小鼠肺指数和肺组织病毒载量,减轻肺组织病理变化,同时还可显著提高外周血CD4⁺ T细胞水平和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺ T细胞水平。说明YHPG可抑制流感病毒复制、减轻流感病毒感染小鼠肺部损伤以及调节流感病毒小鼠免疫功能下降,对甲型H1N1流感病毒感染小鼠有一定的治疗作用。