灸法预处理脑缺血再灌注模型大鼠自噬及NLRP3炎症小体的表达北大核心

背景:灸法作为中医学疗法之一在防治脑卒中方面显示出明显的临床疗效。目的:探讨灸法预处理对脑缺血再灌注模型大鼠自噬及NLRP3炎症小体表达的影响。方法:采用随机数字表法将36只SD大鼠分为假手术组、模型组、灸法预处理组,每组12只。灸法预处理组在造模前给予百会、大椎、足三里麦粒灸3壮/穴,1次/d,共治疗7 d。灸法预处理组末次艾灸30 min后,模型组和灸法预处理组大鼠采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞模型,脑缺血处理2 h后拔除中动脉线栓进行再灌注;假手术组仅给予颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉剥离,而并不插入线栓。再灌注12 h后,对3组大鼠进行进行神经功能缺损评分,采用TTC染色法计算大鼠脑梗死体积,Western-blot法检测大脑皮质缺血区中自噬相关蛋白Beclin1、p62及NLRP3炎症小体的蛋白表达。结果与结论:①模型组大鼠神经功能缺损评分高于假手术组(P<0.01),灸法预处理组大鼠神经功能缺损评分低于模型组(P<0.01);②TTC染色显示,假手术组大鼠脑组织未见明显梗死灶,模型组、灸法预处理组大鼠右侧脑组织可见明显缺血灶,其中灸法预处理组大鼠右侧脑梗死体积小于模型组(P<0.01);③Western-blot检测显示,与假手术组比较,模型组、灸法预处理组Beclin1、NLRP3蛋白表达升高(P<0.01),p62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,灸法预处理组Beclin1蛋白表达升高(P<0.05),p62及NLRP3蛋白表达降低(P<0.01);④结果表明,灸法预处理可显著改善缺血再灌注后大鼠的神经功能,其机制可能与激活自噬抑制炎症因子表达有关。     

依达拉奉对急性脑梗死大鼠的保护作用及生长分化因子15 的影响

目的:研究依达拉奉对急性脑梗死大鼠的保护作用及生长分化因子15(GDF-15)的影响。方法:以大脑中动脉线栓栓塞法复制急性脑梗死大鼠模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、依达拉奉高、低剂量组,并以假手术组作为对照。造模后1 h给药,24 h后进行神经行为学评分,取完整大脑进行TTC染色及梗死体积测量。通过RT-PCR及蛋白印迹法检测脑组织中GDF-15、Smad2 mRNA及蛋白的表达水平,并通过HE染色观察急性脑梗死大鼠大脑的病变程度。结果:模型大鼠神经行为学评分明显升高,脑梗死体积明显升高,脑组织病变严重,脑组织中GDF-15、Smad2 mRNA及蛋白的表达水平明显上升。不同剂量依达拉奉干预后,神经行为学评分明显下降,脑梗死体积明显减少,大脑病变程度减轻,脑组织中GDF-15、Smad2 mRNA及蛋白的表达水平明显下降。结论:依达拉奉对急性脑梗死大鼠的保护作用机制可能与其调节脑组织中GDF-15、Smad2的表达有关。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

天麻素干预可减轻缺血性脑卒中大鼠的炎症损伤

背景：天麻素具有抗炎作用，在临床中主要用于治疗缺血性脑卒中，目前其作用机制尚不明确。目的：探讨天麻素干预缺血性脑卒中大鼠炎症损伤的作用机制。方法：将50只SD大鼠采用随机数字法分为假手术组、模型组、阳性对照组、天麻素高剂量组和天麻素低剂量组，每组10只。除假手术组外，其余4组大鼠均采用大鼠中脑动脉闭塞法建立缺血性脑卒中模型。各组于术后第3天开始给药，阳性对照组大鼠腹腔注射依达拉奉注射液(6 mg/kg)，天麻素高剂量组和天麻素低剂量组大鼠腹腔注射天麻素注射液(50,10 mg/kg)，假手术组和模型组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。各组连续治疗14 d后，观察大鼠脑组织的病理变化，检测NLRP3炎症小体阳性表达及炎症反应相关蛋白和m RNA表达。结果与结论：(1)与假手术组相比，模型组大鼠脑梗死体积变大；脑组织结构疏松，可见不规则空洞，神经元数量减少并排列不规则；NLRP3炎症小体阳性表达上升(P<0.01);Toll样受体4、髓样分化因子88、凋亡相关斑点样蛋白、半胱氨酸蛋白酶1、白细胞介素1β蛋白及mRNA表达水平上升(P <0.01)；(2)与模型组相比，天麻素高剂量组和...     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。     

基于Keap1-NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件探讨干燥综合征模型大鼠心功能变化的机制

目的基于Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)-NF-E2相关因子-2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)探讨干燥综合征(SS)模型大鼠心功能变化的机制。方法 30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组,每组15只。模型组大鼠两后足的足跖部皮下注射完全弗氏佐剂联合同种鼠颌下腺抗原造模,诱导SS模型。致炎30 d后观察大鼠的体质量变化、饮水量变化、颌下腺指数、脾指数、腺体的组织学变化;有创血流动力学监测SS大鼠心功能的变化;ELISA检测血清中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAC)、IL-18、IL-35;免疫组织化学方法检测ROS、活性氮自由基(RNS)、谷胱甘肽(GSH)、硫氧还蛋白(TrX)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Keap1、Nrf2、巨噬细胞活化因子(Maf)、ARE mRNA的表达;Western blot法测定大鼠心肌组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠饮水量变化显著升高(P0.01),颌下腺指数、脾指数及体质量显著下降(P0.05);模型组大鼠心率(HR)、心脏指数(HI)、左室收缩期压(LVSP)、左室舒张期压(LVEDP)显著升高(P0.05),左室内压上升下降最大速率(±dp/dtmax)显著下降(P0.05);模型组IL-18、MDA、RNS、TAC、ROS含量均升高,而TrX、GSH、IL-35、SOD含量下降;同时,心组织Keap1、Maf、Nfr2的mRNA,HO-1、γ-GCS蛋白表达水平亦上升(P0.01)。结论 SS大鼠免疫平衡失调可能与Keap1、Maf、Nfr2的mRNA,HO-1、γ-GCS表达上调有关。     

Herkinorin预处理减轻缺血性卒中模型大鼠脑损伤

目的 探讨Herkinorin预处理对短暂性大脑中动脉阻塞(tMCAO)大鼠脑组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)的调节及作用机制。方法 将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)、Herkinorin组(Herkinorin),Herkinorin组大鼠造模前腹腔给予Herkinorin(10 mg/kg)1周,每天1次。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能评分、TTC染色、TUNEL染色;Western blot检测IκBα、p65、p-p65、pro-IL-1β、IL-1β、pro-caspase1、caspase1 p20、NLRP3表达;免疫共沉淀(Co-IP)检测IκBα与β-抑制蛋白2(β-arrestin2)结合。结果 与sham组相比,tMCAO组大鼠神经功能评分增加(P<0.01),脑梗死百分比与脑水肿率增加(P<0.01),脑组织缺血半影区中细胞凋亡水平增加(P<0.01),IκBα、p65表达水平下降(P<0.01),p-p65、IL-1β、caspase1 p20、NLRP3表达水平增加(P<0.01),IκBα与β-...     

MiR-153通过调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路改善脑缺血再灌注后的炎症反应及保护神经元功能的研究

目的探究miR-153在脑缺血再灌注中的表达及相关作用机制。方法小鼠脑内注射miR-153 agomir进行过表达miR-153,采用短暂局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)造模以构建脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)模型;RT-PCR检测造模后小鼠外周血及梗死侧脑组织中的miR-153表达水平;分别应用TTC染色与免疫组织化学染色检测过表达miR-153对脑梗死体积及脑内神经元与小胶质细胞功能的影响;利用神经系统严重程度评分实验(mNSS)、转角实验(conner test)及转棒实验(rota-rod test)检测过表达miR-153对I-R模型小鼠神经功能影响;ELISA、ROS检测及Western blot实验分别检测过表达miR-153对I-R模型小鼠脑内IL-1β、TNF-α、Keap1及Nrf2、HO-1、NLRP3、TXNIP、ROS表达水平影响;利用生物学信息技术预测miR-153的靶基因,并筛选Keap1进行研究,双荧光素酶基因报告实验进行检测两者的靶向关系;体外培养小胶质细胞BV-2与神经元细胞HT22,并应用糖氧剥脱(OGD)方法进行建立缺血再灌注的细胞模型,再次应用ELISA、ROS检测及Western blot实验过表达miR-153对细胞表达IL-1β、TNF-α、Keap1及Nrf2、HO-1、NLRP3、TXNIP、ROS的影响。结果 miR-153在I-R模型小鼠的血浆与缺血侧脑皮层组织中的表达均显著低表达,而过表达miR-153可显著减少脑梗死面积,并保护神经元功能,降低小胶质细胞的活化水平,改善I-R后小鼠的神经功能缺陷;ELISA、ROS检测及Western blot实验结果表明,过表达miR-153可显著降低小鼠脑内缺血半暗区中的IL-1β、TNF-α、NLRP3及TXNIP、ROS、Keap1表达显著降低,Nrf2、HO-1表达显著降低升高。体外实验证实在小胶质细胞中miR-153能够通过负向调控Keap1表达,且主要通过Keap1/Nrf2/HO-1信号通路活抑制小胶质细胞的活化并下调其对ROS、IL-1β、TNF-α的表达,而在小胶质细胞中同时过表达miR-153及Keap1能够消除这种现象。此外,过表达miR-153后HT22细胞活力并无明显改善,而过表达小胶质细胞中miR-153可显著促进神经元细胞的存活率。结论缺血再灌注发生后小鼠体内miR-153的表达显著降低,且过表达miR-153能够对脑组织缺血再灌注损伤产生保护作用,其可能是通过Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制小胶质细胞的激活并下调其对ROS及炎性因子TNF-α、IL-1β的释放而发挥上述作用。     

依达拉奉对急性脑缺血/再灌注大鼠AQP4和Aβ表达及MMP-2和MMP-9活性的影响

目的:探讨依达拉奉对急性脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的治疗效果及其作用机制。方法:选取健康雄性SPF级SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组(等体积生理盐水)、模型组(造模后给予等体积生理盐水)、低剂量组(依达拉奉6 mg/kg)和高剂量组(依达拉奉10 mg/kg),采用Zea Longa线栓法造模,并对各组大鼠在术后的神经功能评分,TTC法测定脑梗死体积;采用RT-qPCR法检测脑组织中水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)和β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)的mRNA表达; Western blot法检测Aβ及AQP4的蛋白水平;采用明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9的活性。结果:相对于模型组,依达拉奉能显著减轻大鼠神经功能障碍、组织学损伤和脑水肿,降低AQP4和AβmRNA和蛋白水平及MMP2和MMP9活性,且高剂量组效果优于低剂量组(P 0. 05)。结论:依达拉奉减轻急性缺血性脑卒中大鼠脑组织损伤的机制可能与其抑制AQP4和Aβ表达及MMP2和MMP9活性有关。     

盐酸羟考酮激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激缓解大鼠神经病理性疼痛

目的 探讨盐酸羟考酮对脊髓损伤大鼠氧化应激的影响及神经性病理疼痛的作用。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤模型组（SCI组）和盐酸羟考酮组（OHI组）,Allen’s方法建立脊髓损伤大鼠模型。于实验开始前1d及造模后1d、3d、7d、14d对各组大鼠进行BBB评分,进行热缩爪潜伏期和机械性缩爪潜伏期的测定;利用HE染色观察脊髓损伤病理变化;免疫荧光法检测活性氧ROS的表达;ELISA检测血清中SOD、MDA、GSH-PX的含量;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Nrf2、Keap1、HO-1的表达水平。结果 盐酸羟考酮抑制SCI大鼠病理损伤,缓解神经病理性疼痛,抑制ROS的释放,抑制MDA的分泌,促进SOD、GSH-PX的释放,上调Nrf2、HO-1的表达,下调Keap1的表达。结论 盐酸羟考酮通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激,缓解SCI大鼠神经病理性头痛,降低病理损伤。     

加兰他敏通过激活Nrf2 / ROS 通路缓解大鼠脑缺血再灌注后免疫反应和诱导神经再生相关蛋白的表达

目的:探究加兰他敏(GAL)对大鼠脑缺血再灌注后免疫反应和神经再生的影响。方法:SD大鼠随机分为5组(n=30):健康对照组,假手术组,I/R模型组,I/R加低剂量GAL组,I/R加高剂量GAL组。采用改良线栓法建立I/R大鼠模型。HE检测病理组织变化。免疫组化检测神经丝蛋白200(NF-200)的表达。Western blot检测NF-200、生长相关蛋白43(GAP-43)、排斥导向分子(RGMa)的表达水平。ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6、IL-18的含量。Western blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、还原型辅酶氧化还原酶1(NQ01)的表达。试剂盒检测脑组织活性氧(ROS)的含量。结果:I/R模型组与假手术组相比,大鼠CA1区出现明显缺血病变; NF-200密度下降,NF-200蛋白表达显著下调,GAP-43蛋白表达显著下调,RGMa表达显著上调;血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18的含量显著上升; Nrf2、HO-1、NQO-1的表达显著下调; ROS的含量显著上升。GAL加药组与I/R模型组相比,大鼠CA1区缺血病变明显改善; NF-200密度上升,NF-200蛋白表达显著上调,GAP-43蛋白表达显著上调,RGMa表达显著下调;血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18的含量显著降低; Nrf2、HO-1、NQO-1的表达显著上调; ROS的含量显著降低。结论:GAL激活Nfr2/ROS细胞信号通路,缓解大鼠脑缺血再灌注后免疫应激反应,诱导神经再生相关蛋白的表达。     

阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应

目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法:将成年雌性SD大鼠和雄鼠,按照3∶1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑病模型组(HIE)、SF低剂量组(HIE+SF-L)和SF高剂量组(HIE+SF-H)。通过无创止血钳夹闭子宫两侧动脉和卵巢血管法制备胚胎大鼠HIE模型。SF治疗组腹膜腔注射SF。采用HE染色观察胚胎大鼠大脑皮质的病理变化;免疫荧光观察核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、过氧化还原酶1(PRDX1)的表达情况;Western Blot检测胚胎大鼠脑组织中Nrf2和PRDX1蛋白的表达;real time RT-PCR检测miR-216b-3p的表达以及Nrf2和PRDX1的mRNA表达;WST-8法和TBA法检测脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与sham组对比,HIE组胚胎大鼠的大脑损伤加重,病理改变明显;HIE组中Nrf2蛋白表达和mRNA水平降低(P<0.05),PRDX1的蛋白水...     

依达拉奉对大鼠血管性痴呆脑组织中Aβ、Tau和GFAP表达的影响

目的:研究自由基清除剂依达拉奉(edaravone)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠皮质及海马区β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)、Tau蛋白和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响,以探讨依达拉奉对脑的保护作用。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为正常组、假手术组、VD病组和依达拉奉用药组,采用改良法建立SD大鼠VD模型。依达拉奉用药组于缺血后30 min腹腔内及皮下分别注射依达拉奉3 mg/kgwt,30 min后重复1次,以后每日1次。用免疫组织化学和免疫荧光法观察大鼠海马及皮质Aβ、Tau和GFAP免疫阳性细胞的变化。结果:依达拉奉用药组与VD病组相比较,大鼠海马及皮质Aβ、Tau和GFAP蛋白阳性细胞数明显减少(P<0.01或0.001)。Morris水迷宫(Morris Water Maze,MWM)测试显示,随着用药时间的延长,依达拉奉用药组与VD病组相比较,学习记忆有明显的改善(P<0.05)。结论:依达拉奉具有抑制脑内血管内皮细胞和神经细胞的过氧化作用,减少大鼠脑组织中由Aβ导致的神经细胞凋亡、降低脑组织中Tau和GFAP表达水平。     

人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤及Nrf2/HO-1途径的影响

 目的：观察人参皂苷Rg1对小鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤的影响,并从核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路研究其作用机制。方法：C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。以具有抗氧化应激损伤作用、治疗缺血性脑血管病有效的药物依达拉奉作为阳性对照药。取脑组织行海马CA1区神经细胞病理学测定,RT-PCR法测定Nrf2和HO-1 mRNA表达,Western bloting测定脑组织胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白含量。结果：(1)缺血再灌注24 h后,神经细胞出现病理性损伤,细胞存活率显著降低。人参皂苷Rg1和依达拉奉可使神经细胞损伤明显减轻,细胞存活率显著升高。(2)脑缺血再灌注24 h,脑组织Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表达增强,同时脑组织胞核和胞浆中Nrf2蛋白含量增加,核转位率升高,HO-1蛋白表达增强。人参皂苷Rg1和依达拉奉均能降低脑组织胞浆Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核转位率升高,并使脑组织HO-1 mRNA和蛋白表达显著增加。依达拉奉的作用强于人参皂苷Rg1,但两药对脑组织Nrf2 mRNA表达无显著影响。结论：人参皂苷Rg1具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径、促进Nrf2合成和核转位、从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达有关。     

白藜芦醇通过调节miR-223-3p/NLRP3通路发挥对幼年大鼠脑膜炎模型皮质神经元的保护作用

目的:探究白藜芦醇在大鼠细菌性脑膜炎(BM)模型中对皮质神经元的保护作用及机制。方法:通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作BM模型,经鼻滴注白藜芦醇,并经侧脑室注射微小RNA-223-3p(miR-223-3p)antagomir。HE染色观察脑膜炎组织病理结构的改变;Loeffler评分法评估神经功能;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;免疫荧光染色检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合衔接分子1(Iba1)的表达;Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18的表达水平;RT-qPCR检测miR-223-3p的表达水平;利用在线软件TargetScan查询miR-223-3p与NLRP3mRNA中是否存在互补的核苷酸序列。结果:与假手术组比较,BM模型组大鼠的脑膜增厚;神经功能评分明显降低(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显增多(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞被激活;IL-1β和IL-18的免疫荧光强度明显增加(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β、IL-18和miR-223-3p的表达水平明显升高(P0. 05)。与BM模型组比较,白藜芦醇治疗组大鼠神经功能评分明显升高(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显减少(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞炎症反应被抑制;IL-1β和IL-18荧光强度明显减弱(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,miR-223-3p的表达水平明显上调(P0. 05)。TargetScan查询显示miR-223-3p的部分核苷酸序列与NLRP3 mRNA 3'-UTR的核苷酸序列互补。在白藜芦醇治疗的BM大鼠脑内,与antagomir对照组比较,miR-223-3p antagomir处理组的NLRP3蛋白表达明显升高(P0. 05)。结论:在幼年大鼠BM模型中,白藜芦醇可能通过调节miR-223-3p/NLRP3通路减少皮质神经元炎性死亡,从而发挥对神经元的保护作用。     

地骨皮乙素对创伤性脑损伤继发氧化应激损伤的影响

目的 探究地骨皮乙素（KuB）对大鼠创伤性脑损伤（TBI）继发氧化应激反应的影响。方法30只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组（Sham）、创伤性脑损伤组（TBI）和创伤性脑损伤+KuB组（KuB）,采用控制性脑皮质撞击法（CCI）建立大鼠TBI模型。ELISA检测大鼠血清内炎症因子改变;HE染色观察组织病理学改变;Western blot检测氧化应激相关蛋白及Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白表达;Real time PCR检测ARE的基因表达。结果 与Sham组相比,TBI组大鼠血清内炎症因子TNF-α和IL-6明显升高,IL-10明显降低,脑组织出现明显的炎症细胞浸润;氧化应激相关蛋白MDA5明显升高,抗氧化应激蛋白CAT和SOD-1明显降低,Nrf2-Keap1-ARE信号通路被抑制（P<0.05）。与TBI组相比,KuB处理显著降低血清内炎症因子TNF-α和IL-6的表达,升高IL-10的表达,减少脑组织炎症细胞浸润,降低脑组织内氧化应激相关蛋白MDA5的表达,升高抗氧化应激蛋白CAT和SOD-1的表达,恢复Nrf2-Keap1-ARE信号通路（P<0.0...     

依达拉奉联合高压氧降低脑梗死大鼠脑组织环氧合酶2及β淀粉样肽的表达

目的探讨依达拉奉联合高压氧对脑梗死(MCAQ)模型大鼠脑组织环氧合酶2(COX-2)及β淀粉样肽(Aβ)表达的影响。方法成年健康SD大鼠60只,建立MCAQ模型。随机分为4组,每组15只。脑梗死组(尾静脉注射0.1 mol/L PBS)、依达拉奉组(静脉滴注依达拉奉30 mg,bid)、高压氧组(0.22 MPa,80 min高压氧治疗,qd)、联合组(依达拉奉治疗同时,联合高压氧治疗),共处理21 d。治疗前及治疗后对各组大鼠进行神经功能学评分,观察各组疗效;应用反转录PCR、Western blot法检测脑梗死模型大鼠脑组织内COX-2、Aβ的mRNA及蛋白水平;免疫组织化学染色观察脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)测定细胞凋亡的情况。结果依达拉奉组、高压氧组大鼠的神经功能缺损评分明显低于对照组,联合组明显低于依达拉奉组及高压氧组;依达拉奉组、高压氧组COX-2、Aβ的mRNA及蛋白水平明显低于脑梗死组,联合组明显低于依达拉奉组及高压氧组;依达拉奉组、高压氧组GFAP阳性细胞数目明显少于脑梗死组,联合组阳性细胞数又明显少于依达拉奉组及高压氧组;联合组的凋亡细胞数明显少于依达拉奉组、高压氧组及脑梗死组。结论依达拉奉联合高压氧能降低脑梗死大鼠脑组织中COX-2及Aβ的表达。     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响

 摘要:目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响。方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d 3个时间点。取双侧“合谷”穴（LI 4）为电针刺激穴位。免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;逆转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS 、MMP-9蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组各时间点eNOS 蛋白及mRNA增加明显（P<0.01）。eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为 (0.4291±0.0173),模型组再灌注3d表达为 (0.7374±0.0252),电针组表达为 (0.8536±0.0212),各组比较差异显著（P<0.01）。与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d低于模型组（P<0.01）,再灌注3、7 d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组（P<0.01）。 结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达。     

高压氧对模型大鼠颅脑损伤CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2影响的研究

目的:研究高压氧对模型大鼠颅脑损伤过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的影响。方法:健康SD大鼠30只,体重250~300 g,4~5月龄,随机分为3组:假手术组、模型组和高压氧组,每组10只,参照Feeney自由落体冲击造模法建立颅脑损伤大鼠模型。假手术组只给予手术,不造成颅脑损伤;模型组和高压氧组给予颅脑损伤处理;高压氧组用高压氧治疗,1次/d,10 d。用ELISA法检测脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2含量,采用实时荧光定量PCR检测脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2 mRNA相对表达量,用Western Blot测定脑组织Nrf2胞质蛋白和Nrf2核蛋白。结果:假手术组、模型组、高压氧组之间的CAT、SOD、GSH-Px、Nrf2 mRNA水平均有差异(P0.05)。模型组脑组织CAT、SOD、GSHPx、Nrf2 mRNA水平低于假手术组(P0.05),而高压氧组则高于模型组(P0.05)。假手术组、模型组、高压氧组之间的脑组织CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2核蛋白水平存在差异(P0.05),模型组低于假手术组(P0.05),高压氧组高于模型组(P0.05)。Western Blot检测显示:与假手术组比较,模型组和高压氧组脑组织细胞质(核)中Nrf2蛋白表达量有明显升高(P0.05),高压氧组升高更明显(P0.05)。结论:高压氧对模型大鼠颅脑损伤CAT、SOD、GSH-Px和Nrf2表达具有调节作用,通过这些调节改善机体氧化性损伤。     

褪黑素通过抑制NLRP3活化减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的:研究外源性褪黑素对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期脑损伤(EBI)的影响及分子机制。方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、SAH组和褪黑素治疗组(SAH+Melatonin),用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,腹腔注射方法给予褪黑素进行治疗。通过检测大鼠脑的含水量评估脑水肿程度,利用real time RT-PCR方法检测大鼠脑组织中IL-1β、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA的表达,利用免疫组织化学染色法观察大脑皮层中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达,利用Western Blot方法检测NLRP3和cleaved caspase-1的表达。结果:SAH大鼠皮层发生水肿,IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA的表达增加,NLRP3和cleaved caspase-1蛋白的表达增加。褪黑素能减轻SAH大鼠脑水肿,抑制皮层中IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA的表达,下调皮层NLRP3和cleaved caspase-1蛋白的表达。结论:褪黑素通过抑制NLRP3活化减轻SAH大鼠的早期脑损伤。