姜黄素减弱TNF-α刺激的人脐静脉内皮细胞的炎症反应

炎症和内皮细胞机能障碍是动脉粥样硬化的关键早期事件。研究了姜黄素对肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,以了解姜黄素对内皮细胞的抗炎作用的途径,为防治细胞因子诱导的内皮细胞机能障碍提供新方法。以 MTT 法检测了姜黄素对 HUVEC 的细胞毒     

补骨脂素对人脐静脉内皮细胞活力及TNF-α诱导组织因子产生的影响

目的:通过补骨脂素对TNFα诱导血管内皮细胞组织因子的影响,以明确补骨脂素在血栓形成过程中的作用,探讨补骨脂素对心血管系统的调节作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein cells,HUVECs),采用MTT方法,检测补骨脂素对HUVECs细胞活力的影响;以肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激HU-VECs,利用ELISA方法检测补骨脂对TNF-α诱导HUVECs组织因子(Tissue Factor,TF)水平的影响。结果:补骨脂素可以增强正常HUVECs活力,最大浓度约为10-7M。在10-7、10-8M浓度下补骨脂素对TNF-α诱导HUVECs分泌TF呈现显著抑制作用(P<0.01和P<0.05)。结论:补骨脂素能够降低TNFα诱导HUVECs的TF释放,降低血栓形成风险。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF的影响

目的探讨溶栓颗粒对受损血管内皮细胞保护的可能机制。方法用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、申、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色,观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果应用TNF-α 40ng／mL可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加,VEGF表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少VEGF表达,减少细胞有丝分裂。结论溶栓颗粒可以保护因炎性介质增加而受损的血管内皮细胞,这种保护作用可能与减少VEGF表达有关。     

姜黄素对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞FKN表达的干预作用

目的:观察姜黄素对TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的不规则趋化因子(Fractalkine,CX3CL1,FKN)表达的影响。方法:MTT法筛选HUVEC的姜黄素最佳药物浓度,检测不同浓度TNF-α对HUVEC FKNmRNA表达的上调作用,比较不同时间段TNF-α0.5ng/ml对HUVEC FKNmRNA表达的影响,比较0~5μmol/L姜黄素联合TNF-α0.5ng/ml对HUVEC FKNmRNA表达的影响,荧光定量PCR和Western-blot检测FKNmRNA及蛋白质水平变化。结果:MTT法筛选出HUVEC的姜黄素最佳药物浓度为5μmol/L,0.5ng/ml TNF-α能明显提高HUVEC FKNmRNA表达,刺激16小时0.5ng/ml TNF-α能显著增加HUVEC FKNmRNA表达量,荧光定量PCR及Western-blot检测表明姜黄素2~5μmol/L联合TNF-α0.5ng/ml能明显抑制HUVEC FKNmRNA的表达量及蛋白质表达水平。结论:Cur可抑制TNF-α刺激HUVEC的FKNmRNA及蛋白表达。     

栀子苷通过PI3K通路抑制OX-LDL诱导HUVEC中KLF2表达

目的:探讨栀子苷((Geniposide)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中人Krüppel转录因子2(KLF2)表达的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为空白对照组、OX-LDL模型组、栀子苷25、50、100μg/ml剂量组。造模后,除空白对照组和OX-LDL模型组外,分别用25、50、100μg/ml栀子苷预处理HUVEC 24 h。24 h后,除空白对照组外,用100μg/ml OX-LDL干预HUVEC 24 h。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞上清液中IL-6、TNF-α及KLF2的含量;CCK-8法测定细胞活性,Western Blotting检测细胞中KLF2、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)及其磷酸化蛋白(P-PI3K)的含量。结果:与OX-LDL模型组相比,栀子苷组HUVEC细胞增殖明显抑制,细胞内IL-6、TNF-α分泌明显增加,KLF2蛋白表达下降,以100μg/ml栀子苷干预效果最明显。阻断PI3K通路后,再加入栀子苷,对HUVEC的抑制效应降低,与空白对照组相比差异不明显。结论:栀子苷能显著诱导HUVEC损伤,主要与其阻断PI3K信号通路传导,进而抑制细胞中KLF2表达有关。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ICAM-1的影响研究

目的：探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。方法：用TNF-α（40ng/mL）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达。结果：TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加。受损细胞的ICAM-1表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论：溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成;溶栓颗粒减少血管内皮细胞分裂增殖,对稳定动脉粥样斑块稳定性或许有积极作用。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECS）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组：正常对照组（5.5mmol/L）、持续高糖组（25mmol/L）、波动高糖组（5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜）。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

小檗碱通过JNK通路降低内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和TNF-α的研究

目的研究c-Jun氨基端激酶(JNK)信号转导通路对内脏脂肪素(内脂素)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调控作用及小檗碱的干预作用。方法体外培养HUVEC,用内脂素不同质量浓度(0、50、100、200μg/L)及不同时间(0、6、12、24、48 h)作用HUVEC,MTT法检测HUVEC增殖;流式细胞仪检测HUVEC凋亡;ELISA法检测HUVEC上清液中IL-6及TNF-α的量;Western blotting法检测HUVEC中p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白表达;并用小檗碱(50μmol/L)及JNK通路特异性抑制剂SP600125(10μmol/L)干预HUVEC,检测小檗碱的干预作用。结果与对照组相比,100μg/L内脂素可显著抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC凋亡,诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α的量显著增高,并可显著增加HUVEC内p-JNK及Bax蛋白表达,减少HUVEC内Bcl-2蛋白表达;与内脂素组相比,小檗碱及SP600125均可显著减轻内脂素对HUVEC增殖的抑制及其诱导的HUVEC凋亡,降低内脂素诱导HUVEC上清液中IL-6及TNF-α的量并能降低HUVEC中p-JNK及Bax蛋白的表达,增加HUVEC内Bcl-2蛋白表达。结论小檗碱可减少IL-6及TNF-α的分泌,减轻内脂素诱导的HUVEC损伤,其机制可能与抑制JNK信号转导通路有关。     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α所致人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法建立TNF-α致HUVEC损伤模型;MTT检测细胞的存活率;光镜观察细胞形态的改变;流式细胞术检测细胞凋亡峰;Hoechst 33258染色荧光显微镜检测凋亡的细胞核;RT-PCR检测caspase-3基因的表达。结果姜黄素处理组与TNF-α组比较其HUVEC贴壁良好;荧光显微镜下可见凋亡小体减少;流式细胞术检测凋亡峰明显降低;caspase-3基因表达下调。结论姜黄素对TNF-α所致的HUVEC凋亡具有保护作用,该作用可能是通过下调caspase-3的基因表达而实现的。     

保元汤活性成分4’,7,8-三羟基二氢黄酮抑制过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 研究保元汤中4’,7,8-三羟基二氢黄酮(4’,7,8-trihydroxydihydroflavonoid, TF)对过氧化氢(hydrogen peroxide, H₂O₂)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)氧化损伤的改善作用,并进一步阐明其药理机制。方法 用不同浓度的TF处理HUVEC血管内皮细胞6小时后给予15μmol/L和30μmol/L H₂O₂刺激1小时,检测细胞存活率并确定TF起效剂量。利用2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-dipheny 1-1-picrychydrazy 1,DPPH)分析实验、DCF-DA荧光探针和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测TF对自由基的清除作用,以及H₂O₂损伤后TF对HUVEC细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和细胞凋亡相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosph...     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF及ICAM-1影响的研究

目的:探讨溶栓颗粒对TNF-α损伤血管内皮细胞VEGF及ICAM-1表达的影响。方法:用TNF-α(40ng/mL)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)造模,用含大、中、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:TNF-α可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降、皱缩、分裂相细胞明显增加;受损细胞的VEGF、ICAM-1表达明显增多;含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少VEGF、ICAM-1表达,减少细胞有丝分裂。结论:溶栓颗粒可以减少因炎性介质TNF-α增加而受损的血管内皮细胞VEGF、ICAM-1表达,或许可以减缓动脉粥样硬化形成,并对稳定动脉粥样斑块稳定性有积极作用。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

三棱含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 研究三棱含药血清对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）损伤的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组和三棱组,制备空白血清及含药血清。建立LPS诱导的HUVEC损伤模型,设置对照组、模型组、5%空白血清组和三棱含药血清（1%、3%、5%）组,采用MTT法检测三棱含药血清对细胞活力的影响;采用荧光显微镜分析各组细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用ELISA法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-17、组织因子...     

导痰汤通过NF-κB信号通路抑制人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的研究

目的:研究导痰汤能否通过对核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节而干预ICAM-1的表达,以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法:通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对肿瘤坏因子-α(TNF-α)刺激脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κB表达的影响。结果:TNF-α诱导组ICAM-1和NF-κB显著高于空白对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或吡咯烷二硫氧基甲酸(PDTC)处理后,ICAM-1和NF-κB p65表达显著下降(P<0.05,P<0.01);NF-κB活性与ICAM-1 mRNA水平呈显著正相关(r=0.716,P<0.01)。结论:导痰汤可以调节NF-κB信号通路,从而有效抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达。     

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降;Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.     

潜阳育阴颗粒含药血清对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤NADPH氧化酶、AKT、TNF-α、IL-6的影响

目的研究潜阳育阴颗粒(鬼针草、山茱萸、何首乌、玄参、川牛膝和泽泻)含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞损伤NADPH氧化酶、蛋白激酶(AKT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组、缬沙坦组、潜阳育阴颗粒组,制备含药血清。人脐静脉内皮细胞分为5组,除正常组外,其余组均采用10-6mol/L AngⅡ干预建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。造模后,分别给与空白血清培养液、缬沙坦血清培养液、潜阳育阴颗粒血清培养液。TBA法检测MDA水平;ELISA法检测NADPH氧化酶、TNF-α、IL-6水平;Western-Blot检测磷酸化AKT1与AKT1蛋白表达。结果潜阳育阴颗粒显著降低AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤后NADPH氧化酶的活性水平,降低p-AKT1蛋白表达,降低TNF-α、IL-6的释放。结论潜阳育阴颗粒可以抑制AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞损伤后的炎症反应,推测其机制与抑制NADPH氧化酶、AKT、TNF-α、和IL-6有关。     

补肾清肝中药配伍对间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究

研究补肾清肝中药配伍对间歇性低氧致人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应。实验采用改良的间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞建立体外细胞损伤模型,以补肾清肝中药有效成分配伍(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪)作为干预药物,首先进行中药最优配伍浓度体外筛选,然后选择最优配伍浓度作为干预剂量,观察其对模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应。结果显示异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪在0.01 mg·L~(-1)时具有最佳的体外抗炎效应。间歇性低氧组NF-κB p65入核量及p-IκB较对照组与其他各组均显著增加,同时免疫荧光染色NF-κB p65可见间歇性低氧组出现明显NF-κB p65核移位表现,内皮细胞黏附程度明显增加;与间歇性低氧组相比,p38MAPK抑制剂组及补肾清肝中药配伍组p-p38MAPK,NF-κB p65入核量及p-IκB表达量均明显较少,内皮细胞黏附明显被抑制。该研究表明,补肾清肝中药最优浓度配伍通过将抑制p38MAPK的磷酸化作为起始,继而阻断了NF-κB的核移位行为,抑制其转录功能,实现对间歇性低氧诱导血管内皮细胞损伤模型的保护效应。     

Z-藁本内酯对人脐静脉内皮细胞保护作用及其机制研究

目的 通过观察Z-藁本内酯对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及核因子-κB (NF-κB)表达的影响,探讨其对炎性因子损伤内皮细胞的保护作用及其机制.方法 向体外培养的HUVEC中加入TNF-α10 ng/mL造成细胞损伤,同时加入不同浓度(5、10、20 μmol/L)的Z-藁本内酯,共同孵育24 h,MTT法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞培养液中 ICAM-1和VCAM-1的量,Westernblotting法检测各组细胞NF-κB蛋白表达.结果 与对照组比较,TNF-α可造成HUVEC明显损伤(P＜0.05、0.01),显著增加HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的表达(P＜0.01).与模型组比较,Z-藁本内酯可以剂量相关地降低ICAM-1 (P＜0.01)和VCAM-1 (P＜0.05)的表达,显著减少细胞NF-κB蛋白 的表达(P＜0.05).结论 Z-藁本内酯可减轻TNF-α对HUVEC的损伤,其作用机制可能与通过抑制NF-κB的激活,进而减少ICAM-1和VCAM-1的表达有关.